一种检测人腺苷脱氨酶（ADA）的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：甘氨酸缓冲液、3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺配制的显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、腺嘌呤核苷、4-氨基安替比林溶液。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长550nm处吸光度变化的速度，从而测算出腺苷脱氨酶的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
，具体地说涉及一种检测人腺苷脱氨酶的检测试剂盒。
技术介绍
腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷分解代谢过程中关键作用的酶，它能催化腺嘌呤核苷降解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化成次黄嘌呤，最終氧化成代谢产物尿酸。腺苷脱氨酶有三种同エ酶，分别是腺苷脱氨酶I、腺苷脱氨酶1+cp及腺苷脱氨酶2。腺苷脱氨酶在动物体内的分布以盲肠、小肠粘膜和脾中含量最高，在纤维细胞、羊水细胞、肝、肾、肺、骨骼肌等处也有发现，血液中ADA主要存在于血细胞中，如红细胞、淋巴细胞和粒细胞，其活性约为血清中的40 70倍，组织中的腺苷脱氨酶活性在冰冻条件下可保持一周，在组织匀浆中可低温保存数月之久。腺苷脱氨酶活性是反映肝损伤的敏感指标。慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清腺苷脱氨酶活性显著升高。其阳性率达85% 90%，故腺苷脱氨酶活性測定可作为慢性肝病的筛选指标。失代偿期肝硬化腺苷脱氨酶活性明显高于代偿期肝硬化，因而可判断慢性肝病的程度。另外，慢性活动性肝炎腺苷脱氨酶活性明显高于慢性迁延性肝炎，故可用于ニ者的鉴别诊断。ADA检测方法经过多次改进，形成了目前市场上ADA检测试剂盒的两种主要检测方法，包括连续检测法和酶偶联法。最早的ADA检测原理是ADA将腺苷脱氨产生次黄苷和氨。低的底物浓度达不到底物饱和要求，造成ADA活性检测失真。因此，该法不适用于临床应用。随后发展的第二代ADA检测原理为腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。此方法所需试剂易配制，仪器简単，但灵敏度低，易受外源性NH3影响，空白过高，不能直接測定红细胞ADA活性。同样原因，ADA偶联谷氨酸脱氢酶反应通过测量340nm处NADPH吸光度下降的速度来测算ADA活性。该法也因血清含氨干扰，以及测试系统中过高NADPH造成非特异性氧化而无成算。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测人腺苷脱氨酶(ADA)的检测试剂盒。该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。本专利技术的另ー目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。为实现上述目的，本专利技术提供的试剂盒组成为I.甘氨酸缓冲液、2.显色剂、3.嘌呤核苷磷酸化酶、4.黄嘌呤氧化酶、5.过氧化物酶、6.腺嘌呤核苷、7. 4-氨基安替比林溶液。。本专利技术提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下(a)按下列比例配制好试剂 甘氨酸缓冲液80mmol/L 显色剂10mmol /I, 嘌呤核苷磷酸化酶O. 5-1KU/L 黄嘌呤氧化酶O. 8-1KU/L 过氧化物酶O. 6-1KU/L 腺嘌呤核苷30mmol/L 4-氨基安替比林溶液lOmmol/L (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸光度变化值计算出样本中腺苷脱氨酶的浓度。本专利技术试剂盒的独特性在于，显色剂为含有3-甲基-N，N_ニ丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液，4-氨基安替比林溶液为含有4-氨基安替比林的氯仿溶液。经过一系列反应后，可形成醌类化合物，具有显色效果好、反应迅速、稳定的有点。具体实施例方式下述实施例是为了更详细的解释本专利技术，但不应理解为本专利技术局限于此。实施例I : 本专利技术的试剂盒举例可以是双试剂，其中 试剂I: 甘氨酸缓冲液80mmol/L 显色剂10mmol /I, 嘌呤核苷磷酸化酶O. 5KU/L 黄嘌呤氧化酶O. 8KU/L 过氧化物酶O. 6KU/L 试剂2 腺嘌呤核苷30mmol/L 4-氨基安替比林溶液lOmmol/L 其中 (1)甘氨酸缓冲液为35mM甘氨酸，O.05%吐温-20，IOmMこニ胺四こ酸ニ钠，O. 05%硫柳汞，O. 4M NaCl，ρΗ6· 5-10 ； (2)显色剂为含有20mM3-甲基-N，N-ニ丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液； (3)4-氨基安替比林溶液为含有25mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。实施例2 :试剂盒使用方法 I.试剂准备，试剂可为液体双试剂，开瓶即用，其中 试剂I: 甘氨酸缓冲液80mmol/L 显色剂10mmol /I, 嘌呤核苷磷酸化酶O. 5KU/L黄嘌呤氧化酶O. 8KU/L 过氧化物酶O. 6KU/L 试剂2 腺嘌呤核苷30mmol/L 4-氨基安替比林溶液lOmmol/L 2.全自动生化仪參数设置 (a)检测温度37°C (b)检测波长主波长为550nm;副波长为700 nm ； (c)反应时间10分钟，其中，温育时间5分钟，反应时间3分钟，检测时间2分钟。3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成) (a)取180 μ L试剂I和5 μ L血清样本混匀。(b)将混匀后的溶液在37°C温育5分钟。(c)添加60 μ L试剂2，反应3分钟后，在550nm条件下检测2分钟的吸光度变化。4.通过吸光度变化的计算出腺苷脱氨酶的浓度。本专利技术具有的优点 该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。权利要求1.ー种腺苷脱氨酶检测试剂盒，其组成为 甘氨酸缓冲液、显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、腺嘌呤核苷、4-氨基安替比林溶液。2.权利要求I的试剂盒，其特征在于 甘氨酸缓冲液为15-45mM甘氨酸，O. 05%吐温-20，IOmMこニ胺四こ酸ニ钠，O. 05%硫柳汞，O. 4M NaCl，ρΗ6· 5-10 ； 显色剂为含有20mM 3-甲基-N，N- ニ丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液； 4_氨基安替比林溶液为含有20-30mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为 (a)按下列比例配制好试剂 甘氨酸缓冲液80mmol/L 显色剂10mmol /I, 嘌呤核苷磷酸化酶O. 5-1KU/L 黄嘌呤氧化酶O. 8-1KU/L 过氧化物酶O. 6-1KU/L 腺嘌呤核苷30mmol/L 4-氨基安替比林溶液lOmmol/L (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸光度变化值计算出样本中腺苷脱氨酶的浓度。4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在I:45到I :60之间。5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37(±1)で。6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为10-15分钟。7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为550nm，副波长为700 nm。8.权利要求3的方法，其特征在于，试剂可配置成单试剂、双试剂或三试剂。全文摘要一种检测人腺苷脱氨酶(ADA)的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括甘氨酸缓冲液、3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺配制的显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、腺嘌呤核苷、4-氨基安替比林溶液。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长550nm处吸光度变化的速度，从而测算出腺苷脱氨酶的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。文档编号C12Q1/26GK102747133S本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种腺苷脱氨酶检测试剂盒，其组成为：甘氨酸缓冲液、显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、腺嘌呤核苷、4？氨基安替比林溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张雷，
申请(专利权)人：北京恩济和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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