本发明专利技术涉及一株产苦参碱的枝顶孢属真菌及其应用和其发酵液的应用。是枝顶孢属真菌(Acremonium?sp.)SA_NX?E5CCTCCNO.M2012214。本发明专利技术的枝顶孢属真菌，可以通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子主要有效成分，从而开发新的微生物资源，为野生苦豆子植物资源的保护和利用提供了依据。并且本发明专利技术的枝顶孢属真菌可直接利用真菌发酵产生苦参碱，与植物栽培产生苦参碱相比，具有效率高，周期短，不受季节、气候、地理条件等因素的限制，经过试验证明，可通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子的主要有效成分。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株产苦参碱的枝顶孢属真菌及其应用和其发酵液的应用。
技术介绍
苦豆子(Sophora alopecuroides L)为豆科槐属多年生草本植物,广泛分布于我国宁夏、甘肃、内蒙古、新疆等西部省区的荒漠、半荒漠草地。苦豆子全草、根、种子可入药，用于抗肿瘤、抗病毒、抗菌消炎、清热解毒、消肿止痛、止痢、杀虫等，其有效成分主要为苦参碱等喹诺里西啶类生物碱，具有重要的医疗和研究价值。苦豆子抗寒耐旱耐盐碱、固氮作用强，是西北地区防风固沙、维持西部草原生态平衡的重要沙生植物。但近年来，随着临床医疗对苦豆子生物碱需求的不断增加，人为的滥采滥挖致使野生苦豆子储量急剧下降，大批草场退化，水土流失，严重威胁着苦豆子植物资源的可持续开发和利用以及西部草地的生态平衡。目前，人们主要对苦豆子内生细菌、内生放线菌进行了研究，但苦豆子内生真菌的研究较少。王兰等(2007)对苦豆子内生真菌进行研究，分离出I株对小麦赤霉等6种病原菌具有不同程度抑制作用的内生真菌，与苦豆子生物碱的作用相近；顾沛雯等从苦豆子中分离到214株内生真菌，167株具有抑菌活性。但苦豆子中合成喹诺里西啶类生物碱内生真菌的研究还未见报道。产生喹诺里西啶生物碱的苦豆子内生真菌的开发，将是解决苦豆子植物资源日益匮乏的有效途径，具有重要的研究价值和广阔应用前景
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一株产苦参碱的枝顶孢属真菌，利用该枝顶孢属真菌能够通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子的主要有效成分。本专利技术的目的之二是提供一种上述枝顶孢属真菌的应用，其能够用于通过微生物发酵合成苦参碱；本专利技术的目的之三是提供一种上述枝顶孢属真菌发酵液的应用，该发酵液对黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌具有不同程度的抑菌作用。—株产苦参碱的枝顶孢属真菌，是枝顶孢属真菌(Acremonium sp. ) SA_NXE5CCTCC NO. M 2012214。—株用于通过微生物发酵合成苦参碱的枝顶孢属真菌(Acremonium sp. ) SA_NXE5CCTCC NO. M 2012214。一株其发酵液用于抑制黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌的枝顶孢属真菌(Acremonium sp.)SA_NX E5CCTCC NO. M 2012214。本专利技术的枝顶孢属真菌，可以通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子主要有效成分，从而开发新的微生物资源，为野生苦豆子植物资源的保护和利用提供了依据。并且本专利技术的枝顶孢属真菌可直接利用真菌发酵产生苦参碱，与植物栽培产生苦参碱相比，具有效率高，周期短，不受季节、气候、地理条件等因素的限制，经过试验证明，可通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子的主要有效成分。附图说明附图I为本专利技术菌株SA_NX E5的菌落图；附图2为本专利技术菌株SA_NX E5的显微形态；附图3为本专利技术菌株SA_NX E5提取物中保留时问为25. 546min的色谱峰的离子碎片质谱图；附图4为本专利技术菌株SA_NX E5提取物在250 800nm范围的紫外扫描图；附图5为本专利技术菌株SA_NX E5的NJ系统发育树。 具体实施例方式本专利技术提供了一株枝顶抱属真菌(Acremonium sp.) SA_NXE5CCTCC NO. M2012214(以下简称“菌株SA_NX E5”)，该菌株保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO. M2012214，保藏(存活)日期为2012年6月18日，经真菌分类学鉴定为枝顶孢属(Acremonium sp.)。该菌能够通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子的主要有效成分。一、菌株SA_NX E5的分离和培养(I)样品准备采集宁夏盐池县沙地生长的新鲜无病害的盛花期全株苦豆子，放入冰盒中，于12h内进行内生真菌分离。用自来水冲去植物表面泥土,用剪刀将叶、茎、种子、根分离，分别用灭菌的纱布将各组织部分包裹，进行表面消毒。(2)植物样品表面消毒先用体积分数为75%的酒精浸泡20 30s ;再用有效氯质量分数为I %的次氯酸钠溶液浸泡2 3min，最后用灭菌去离子水漂洗2 3次，每次Imin0(3)真菌的分离分别将表面消毒后的叶、茎、种子、根用手术刀切成3_2大小的组织块，用灭菌镊子压放在内生真菌分离培养基表面，然后置20°C培养箱中培养10 20d。待组织块周围长出菌落后，挑去菌落边缘菌丝接种于PDA培养基表面，置20°C培养箱中继续培养，若挑取的菌落在新的PDA表面生长出现不同的菌落，则分别挑取各菌落接种于新的PDA培养基表面进一步培养，待培养基表面仅长出一种菌落时，可确定该菌株已被纯化，进而得到纯化的菌株SA_NX E5菌株。SA_NX E5菌株的菌落扁平，初呈白色，随着培养时间的延长，逐渐转变为粉红色、红褐色(参见附图I)。菌落呈毡状，气生菌丝较少，生长较慢，生长速度为0. 4cm/d。将SA_NXE5菌株接种于PCA培养基斜面，置20°C培养箱中培养10 20d，挑取少许菌丝，以水或棉兰乳酸酚染色液为浮载剂，置显微镜下观察。该菌株在PCA培养基上培养能产生分生孢子及分生孢子梗等结构。菌丝较细，具横隔；分生孢子及分生孢子梗无色，分生孢子梗具分支。分生孢子顶生或侧生，或单生或聚集成团，呈椭球状或梭形，分生孢子大小为I I. 2X0. 8 Iiim(参见附图2)所述的真菌分离培养基、PDA、PCA培养基的组分及配比为真菌分离培养基葡萄糖40g，蛋白胨10g，酵母粉2g，MgSO4. 7H200. 5g，K2HPO4Ig,琼脂15g,蒸懼水IOOOmL, pH为6 7,121 °C高压灭菌20min。PDA培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水lOOOmL，pH为6 7，121 °C高压灭菌20min。PCA培养基马铃薯20g，胡萝卜20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH为6 7，121°C高压灭菌20min。(4)真菌富集培养挑取PCA斜面上的SA_NX E5菌株的菌落，放入装有10 15粒灭菌的玻璃珠和IOml灭菌去离子水的具塞离心管中，置涡旋器上振荡I 2min，分散真菌孢子，并在显微镜下记录每毫升液体中孢子的数量。吸取该孢子悬液5ml加入新的灭菌试管中，在试管中加入适量的灭菌去离子水，轻轻振荡混匀，使真菌孢子的终浓度为I X IO5 I X IO6个/ml。取Iml真菌孢子悬液加入到装有IOOml发酵培养基的250ml三角瓶中，置25°C摇床中，150r/min振荡培养15d。所述的发酵培养基的组分及配比为葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母粉2g，MgS04. 7H200.5g, KCl 0. 5g, FeSO4. 7H20 0. Olg, K2HPO4Ig,蒸馏水 IOOOmL, pH 为 6 7，121 °C高压灭菌20mino二、菌株SA_NX E5抑菌活性的检测(I)菌株SA_NX E5的发酵培养分别在10支装有IOOml发酵培养基的250ml三角瓶中各加入孢子悬液1ml，置25°C摇床中，150r/min振荡培养15d。(2)发酵液的处理待培养结束后，用滤纸将发酵液过滤，滤液用旋转蒸发仪80°C减压浓缩。浓缩残渣用20ml去离子水超声振荡使其充分溶解,然后3000r/min离心本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株产苦参碱的枝顶孢属真菌，是枝顶孢属真菌(Acremonium？sp.)SA_NX？E5？CCTCC？NO.M？2012214。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵清梅，
申请(专利权)人：北方民族大学，
类型：发明
国别省市：
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