本发明专利技术涉及人源化抗体，所述人源化抗体特异性结合包含由SEQ?ID?NO:15所表示的肽-6的多肽，所述肽-6是源自HSP65的肽。更具体而言，本发明专利技术涉及用于治疗免疫相关病症的人源化抗肽-6抗体、组合物、方法及其用途，所述免疫相关病症具体为炎性病症，例如关节炎、IBD、银屑病、糖尿病和MS。本发明专利技术还提供组合了本发明专利技术的人源化抗体和至少一种抗炎剂的联合组合物和试剂盒，以及所述人源化抗体在诊断试剂盒和方法中的应用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人源化的对源自HSP65的肽(具体而言，肽-6)有抗性的抗体及其任何抗原结合片段。更具体而言，本专利技术涉及用于治疗免疫相关病症的人源化抗肽-6抗体、组合物、方法及其用途。
技术介绍
将本申请中提及的所有出版物都通过援引完整地并入本文，包括其中所引用的所有参考文献。、结核分枝杆菌(MT)的65kDa热休克蛋白(HSP65)在自身免疫性关节炎的发病机理中起重要作用。其效果在佐剂性关节炎(AA)的实验模型中得到了良好的例证。通过皮内接种悬浮于弗氏佐剂中的热灭活分枝杆菌，可以在诸如Lewis或Wistar等大鼠的易感近交系中诱导AA。可以通过对HSP65的180 188位残基有反应性的T细胞克隆来被动转移AA。已报道的证据表明，抵御疾病的保护作用可能是由针对HSP65的细胞应答引起的，这表示该蛋白含有参与发病机理和抗性获得的不同表位。本专利技术人之前已指出，对AA的抗性还可以通过针对HSP65的抗体来赋予，并且可以通过向易患关节炎的大鼠静脉内输注来自具有关节炎抗性的品系的免疫球蛋白来被动转移。进一步的分析明确了抗HSP保护性抗体对31 46位氨基酸残基(命名为肽_6，且由SEQ ID NO: 15表示)的表位特异性。用此肽对Lewis大鼠进行的疫苗接种导致产生了针对全分子的抗体以及对疾病诱导的抗性。本专利技术人之前已指出，针对肽-6的多克隆抗体刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生白细胞介素-10 (IL-10) 。抗炎细胞因子IL-10在先天性免疫中起重要作用，主要是由于其使炎性应答受到抑制的抑制效果。据显示，本专利技术人制造的单克隆抗肽-6抗体通过与PBMC结合并刺激该细胞分泌IL-10而保留了这种保护性效果。本专利技术人还指出针对肽-6的抗体不仅与肽-6相互作用，而且它们还直接与巨噬细胞的表面配体发生明显的交叉反应，这种相互作用是理解这些抗体的作用机制的关键。在抗肽-6抗体结合巨噬细胞后，会激活导致细胞因子(特别是IL-10)的产生和分泌增加的信号转导途径。作为抗炎细胞因子，IL-10削弱并抑制炎性过程，从而使炎性病症得到改善和治疗。这会使诸如肿瘤坏死因子a (THF-a)等促炎Thl细胞因子与诸如IL-10等抗炎Th2细胞因子间的平衡发生倾斜。因此，利用抗肽-6抗体将Thl/Th2平衡向Th2抗炎应答的方面调节，适用于治疗炎性病症。然而，施用啮齿动物抗体或抗体片段具有限制其在人体中的适用性的缺点，该缺点部分上是由这些抗体或其片段的免疫原性造成的。为了克服啮齿动物抗体的这些不期望的性质，已通过用人抗体的区域对除抗原结合部位以外的框架区进行置换而开发了人源化抗体。制备此类人源化抗体的常用方法基于对编码人抗体的基因的选择，所述人抗体显示出与小鼠抗体最接近的序列相似性，并且使用CDR移植法仅将该人抗体的互补决定区(CDR)置换成小鼠抗体的互补决定区。人源化抗体的优势在于减少体内免疫应答。然而，当仅将CDR移植到人抗体上时，其选择性和反应性经常会受到损害。此外，虽然人源化技术已提供了在施用给人时通常具有良好耐受性且免疫原性通常小于非人单克隆抗体的抗体。但已显示，用这些技术产生的若干种抗体在患者中引发了免疫原性，即使此类抗体的遗传起源是人。这种对免疫原性的诱导可能是因为在抗体可变区内存在小段的非自身氨基酸序列，所述小段的非自身氨基酸序列在某些情况下能够产生T细胞表位，这些T细胞表位诱导导致免疫原性的T细胞应答。抗肽-6抗体作为免疫调节剂的潜在用途需要产生具有降低的抗原潜力的人源化抗体。因此有需要产生具有高比例的人源序列且避免形成可能诱导T细胞应答的序列的高特异性人源化抗肽-6抗体。因此本专利技术的目的是提供用于调节患有免疫相关病症的受试对象中的Thl/Th2平衡的此类人源化抗肽-6抗体。本专利技术的各种目标将随着描述的进行而变得明显。
技术实现思路
根据第一方面，本专利技术涉及特异性地结合包含SEQ ID NO: 15的多肽的人源化抗体或其任何抗原结合片段。应注意的是，多肽SEQ ID勵:15，也称为肽-6，源自肥 65。根据一个实施方式，本专利技术的人源化抗体包含(a)重链可变区，所述重链可变区包含位于H22位的Cys、位于H23位的Ser、位于H26位的Gly、位于H27位的Phe、位于H28位的Ser、位于H29位的Leu、位于H30位的Ser、位于H31位的Thr、位于H32位的Ser、位于H33位的Asn、位于H34位的Met、位于H35位的Gly、位于H35A位的Val、位于H35B位的Gly、位于H48位的Leu、位于H50位的His、位于H51位的He、位于H52位的Leu、位于H53位的Trp、位于H54位的Asn、位于H55位的Asp、位于H56位的Ser、位于H57位的Lys、位于H58位的Tyr、位于H59位的Tyr、位于H60位的Asn、位于H61位的Pro、位于H62位的Ala、位于H63位的Leu、位于H64位的Lys、位于H65位的Ser、位于H92位的Cys、位于H95位的Met、位于H96位的Gly、位于H97位的Gly、位于H98位的Tyr、位于H99位的Tyr、位于HlOO位的Gly、位于H100A位的Asn、位于H100B位的Tyr、位于H100C位的Gly、位于H100D位的Tyr、位于H100E位的Tyr、位于H100F位的Ala、位于H100G位的Met、位于HlOl位的Asp和位于H102位的Tyr，且可选地包含位于H49位的Leu、位于H74位的Tyr、位于Hll位的lie、位于H41位的Ser和位于H108位的Ser中的至少一个；和(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含位于LI位的Gin、位于L23位的Cys、位于L24位的Thr、位于L25位的Ala、位于L26位的Ser、位于L27位的Ser、位于L27A位的Ser、位于L28位的Val、位于L29位的Ser、位于L30位的Ser、位于L31位的Ser、位于L32位的Tyr、位于L33位的Leu、位于L34位的His、位于L47位的Trp、位于L50位的Ser、位于L51位的Thr、位于L52位的Ser、位于L53位的Asn、位于L54位的Leu、位于L55位的Ala、位于、L56位的Ser、位于L71位的Tyr、位于L88位的Cys、位于L89位的His、位于L90位的Gin、位于L91位的Tyr、位于L92位的His、位于L93位的Arg、位于L94位的Ser、位于L95位的Pro、位于L96位的Pro和位于L97位的Thr，且可选地包含位于L21位的Met、位于LlO位的Ile和位于L80位的Ala中的至少一个。应认识到的是，所有指出的位置都是根据Kabat编号系统来确定的。本专利技术的另一方面涉及包含有效量的至少一种分离且纯化的本专利技术的人源化抗体作为活性成分的组合物。本专利技术还提供用于预防、治疗、改善或抑制免疫相关病症的药物组合物。本专利技术的药物组合物包含治疗有效量的至少一种分离且纯化的本专利技术的人源化抗体作为活性成分。在又一方面，本专利技术提供用于使有需要的受试对象(具体为患有免疫相关病症的受试对象)中的IL-IO (白细胞介素-10)的表达和水平增加的组合物和方法。本专利技术的另一方面提供用于预防、治疗、改善或抑制免疫相关病症的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：雅各布·纳帕斯塔克，S·亚伊尔，
申请(专利权)人：普罗塔布有限公司，
类型：发明
国别省市：
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