本发明专利技术涉及医学领域，特别涉及人白介素22在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用，在肝移植中，有临床研究表明TH17相关因子IL-17及IL-23在肝移植术后的患者血清中显著增高；同IL-17相比，IL-17在排斥组肝组织内术后第1天及第3天升高明显，并在随后的5、-7天内逐渐降低，IL-22在排斥组术后第1天升高明显并从第3天起逐渐下降。排斥组的IL-17和IL-22表达相比于耐受组在术后均有统计学意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学领域，特别涉及肝移植排斥反应的标志物。
技术介绍
肝移植手术，是指通过手术植入ー个健康的肝脏到患者体内，使终末期肝病患者肝功能得到良好恢复的ー种外科治疗手段。按照供肝种植部位不同，可分为原位肝移植术和异位肝移植木。原位肝移植(OLT)已成为肝脏外科手术的成熟技木，并且对许多终末期肝病患者而言，它是唯一有效的治疗手段。尽管有免疫抑制剂的成功应用，而由浸润的淋巴细胞、单核细胞和其他炎症细胞引起的急性移植物排斥反应，依旧是早期供体损伤及移植后生存率的主要危险因素之一。有研究表明，排斥反应中起支配作用的IFNy对移植物损 伤并非是不可或缺的，暗示还有其他因子參与引起排斥反应的炎症反应。最新研究表明，TH17细胞參与移植排斥反应的免疫应答。IL-22是IL-10家族的成员之一，主要由TH17细胞、TH22细胞、NK细胞及淋巴组织诱导细胞(LTi)等产生，IL-22主要作用于皮肤、肝脏及肾脏，发挥固有免疫、损伤保护及促进再生的作用。IL-22对肝脏有着保护及促炎的双重作用，研究证明IL-22对肝部分切除后的肝细胞再生起重要的促进作用，最新的数据证明IL-22參与肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。推測IL-22參与肝移植术后的肝细胞再生及缺血再灌注等作用。但是，至今还没有IL-22 (人白介素22)參与移植排斥反应的免疫应答的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之ー在于提供人白介素22的新应用，该应用为判断肝移植排斥反应提供了新的思路。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为人白介素22在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用。进ー步，所述肝移植排斥反应为原位性肝移植排斥。进ー步，人白介素22的蛋白在制备肝移植的第1-3天肝移植排斥反应的标志物中的应用。进ー步，人白介素22的mRNA在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用。上述技术方案是通过如下实验来证实其功能的成功建立大鼠原位肝移植动物模型，分为排斥组和耐受组(各15只)，取术后1，3，5，7天大鼠血浆及肝组织标本，应用免疫组化染色、Western blot及荧光定量PCR检测其肝组织内IL-17 (白介素-17)及IL_22(白介素-22)的细胞、蛋白及mRNA的表达情況。结果显示排斥组IL-17血浆浓度显著高于耐受组；在肝组织中，IL-17及IL-22的淋巴细胞阳性率、蛋白表达水平及mRNA表达水平排斥组显著高于耐受组。由此可以证实人白介素22在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用。现有技术中IL_17可作用于自身免疫疾病和病原体的防御还參与移植物排斥反应，在人及动物的肾脏、心脏及肺移植中发现IL-17水平的升高。在肝移植中，有临床研究表明TH17相关因子IL-17及IL-23在肝移植术后的患者血清中显著增高。同IL-17相比，IL-17在排斥组肝组织内术后第I天及第3天升高明显，并在随后的5、7天内逐渐降低，IL-22在排斥组术后第I天升高明显并从第3天起逐渐下降。排斥组的IL-17和IL-22表达相比于耐受组在术后均有统计学意义。附图说明图I为HE组织切片，其中，TOL是指耐受组，REJ是指排斥组。图2为HE组织切片Banff的RAI评分分析图。图3为大鼠肝移植模型建立后的肝功能指标变化情况分析图，其中，A为以ALT为指标，B为以AST为指标。图4为免疫组化显示移植后1，3，5，7天大鼠肝组织中IL-17及IL-22的变化情況。图5为Western blotting检测移植后1，3，5，7，天大鼠肝组织内的IL-17、IL-22。图6为Western blotting检测移植后I，3，5，7，天大鼠肝组织内的IL-17、IL-22变化分析图，其中A为IL-17的变化分析图，B为IL-22的变化分析图，分析图中，横坐标为时间，纵坐标为用紫外分光光度计测定的相对浓度(与内參GAPDH比值)。图7为移植后I，3，5，7天大鼠肝组织中IL-17、IL-22的mRNA的变化分析图，其中，a为IL-17的变化分析图，b为IL-22的变化分析图，横坐标为时间，纵坐标为mRNA的表达水平(与内參β -Actin比值)。具体实施例方式为了使本专利技术的目的、技术方案和有点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。本实施例通过掲示IL-22在肝移植急性排斥反应中的表达情况及作用，证实IL-22可以用于制备肝移植排斥反应的标志物。通过实验证实，与耐受组动物模型相比，排斥组动物的其肝组织中的IL-17及IL-22的淋巴细胞阳性率、蛋白表达水平及mRNA表达水平也明显增高。同时我们还发现排斥组肝组织中STAT3 mRNA表达水平升高。这些结果表明，IL-22參与肝移植术后急性排斥反应的发生过程，并推测其通过激活STAT3通路发挥效 应。本实施例中的方法统计方法数据以均数土标准差表示，采用SPSS13. O统计软件行单因素方差分析，组间比较行t检验。P < O. 05为具有统计学意义。实施例ー动物建模I实验动物及大鼠原位肝移植模型的建立雄性BN(RTln)大鼠和LEW(RTl1)大鼠，SPF级动物，体重220_270g，购于第三军医大学大坪医院实验动物中心。饲养于恒温、清洁环境，維持12小时昼夜节律，遵守实验动物使用及管理原则。供、受体术前8小时禁食，术后不禁饮食。大鼠肝移植排斥模型分为排斥组和耐受组，排斥组为LEW(RTl1)大鼠为供体BN(RTln)大鼠为受体，耐受组BN(RTln)大鼠为供体LEW(RTli)大鼠为受体，每组15对。应用改良“ニ袖套”法建立大鼠原位肝移植动物模型，“ニ袖套”法具体參照“不同原位肝移植模型大鼠的CD4+CD25+调节性T细胞数量变化的研究[J].免疫学杂志，2011，27 (4) =283-286分别在肝移植术后第I、第3、第5、第7天处死排斥组和耐受组动物各3只，提取外周血及肝脏组织备检。2肝脏组织病理及免疫组化分析切取肝组织置于体积分数为10%甲醛中固定48小时，常规脱水、透明、石蜡包埋、5 μ m厚切片，HE染色，光学显微镜观察。根据肝组织炎症浸润及坏死情况进行病理分级。结果从图I所示的HE组织切片中可以看到排斥组比耐受组模型发生明显的移植排斥反应，排斥组移植肝病理检查均提示光镜下肝细胞变性肿大，伴大量肝细胞坏死，血窦扩张充血，内皮细胞肿胀明显，整个肝小叶结构紊乱，汇管区及中央静脉出现以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，胆小管破坏伴炎细胞浸润，符合急性排斥反应的病理表现。基于Banff的RAI评分(对汇管区、胆管及静脉内皮炎症进行排斥活动指数计分，总积分为9分，RAI0-2分定为无排斥，2-3分为交界性急性排斥反应，3-4分为轻度急性排斥反应I级，5-6分为中度急性排斥反应II级，7-9分为重度急性排斥反应III级)，结果如图2所示排斥组的评分明显高于耐受组的评分。3肝功能检测 于各时间点经下腔静脉抽血约5mL置于抗凝管中，离心取血浆标本用全自动生化仪(Olympus)检测血清肝功能丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)的变化。结果术后各组血清ALT、TBIL浓度及变化趋势术后2组肝功能均有不同程度升高，可以看出排斥组ALT明显大于耐受组，且在第5天差异最明显。排斥组的TBIL在第7天明显高于耐受组。ΓΡ &本文档来自技高网...
【技术保护点】
人白介素22在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用。
【技术特征摘要】
1.人白介素22在制备肝移植排斥反应的标志物中的应用。2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述肝移植排斥反应为原位性肝移植排斥。3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：张轶，倪兵，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：
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