本发明专利技术公开了一种黑曲霉（Aspergillusniger）Ty-3及其应用，该菌株的保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2011年7月8日，保藏号：CCTCC?NO:M?2011241。上述菌株的菌丝可附着并缠绕在烟草黑胫病菌丝之上，寄生在烟草黑胫病病原菌上进行生长，通过长时间的寄生生长可把病原菌杀死并将其分解，从而对病原菌的生长产生强烈抑制作用。该黑曲霉菌可以用于制备防治烟草病害的菌剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物菌种及其应用，具体的说是一种黑曲霉菌株其及在烟草黑胫病防治中的应用。
技术介绍
烟草黑胫病是一类重要的烟草土传病害，它们通常侵染烟草根部，引起作物根部乃至全株的病害，造成重大的经济损失。目前， 生产上主要采用抗病品种和作物轮作等农业措施来防治烟草土传病害病。中国科学院昆明植物研究所研究出抗黑胫病的品种(专利号CN01108714. 5)，但是由于抗病品种需要抗病基因多样化，并且受环境的影响比较大，防治效果不理想；作物轮作也是防治烟草青枯病和黑胫病的有效方法之一，但是由于我国人多地少，生产中正常的轮作措施无法实现；也有使用化学药剂防治烟草黑胫病的，云南烟草科学研究所研究一种对甲霜灵可以治理黑胫病(专利号CN200710065691. 3)，大量使用化学药剂来防治烟草黑胫病会造成环境污染，药物残留对人体的身体健康有害，同时，化学农药的长期使用，病原菌易对其产生抗药性，因而导致防治效果下降甚至防治失败。大量研究表明，烟田土壤中不仅存在引起烟草病害的微生物而且也存在多种多样的非致病性的、提高烟草生命力的有益微生物，因而烟草的生物防治以及生态防治日益受到重视。生物防治措施是利用有益微生物降低植物病原菌对植物的危害，生态防治则是通过向土壤引入拮抗微生物、培肥土壤和提高土壤中生物多样性等措施，进而使土壤微生态达到平衡，最终通过土壤中不同生物之间的拮抗与竞争实现对土壤病害的防治。专利号CN200710300087和专利号CN200910233578专利文献分别筛选防治黑胫病的菌株，分别为淡紫青霉ZY-19-2和多粘类芽孢杆菌C-5。淡紫青霉ZY-19-2产几丁质酶能力强可以分解蝇蛆体壁，抵抗烟草黑胫病的侵染，但没有菌株直接拮抗黑胫病病原菌的说明，另外，外来菌株施入土壤还存在定殖难的问题。CN200910233578的文献公开了一种把拮抗菌做成有机肥料，菌株和有机肥料一起施入土壤，有利于菌株的定殖，但是肥料利用完以后，作为一种外来菌，菌株的生长能力变差，拮抗作用就会降低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够防治烟草黑胚病的黑曲霉菌(Aspergillus niger)Ty-3。同时，还涉及一种该菌株的应用。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案提供了一种黑曲霉菌(Aspergillusniger) Ty-3,保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏日期2011年7月8日，保藏号CCTCC N0:M2011241 。同时,本专利技术的技术方案还提供了一种黑曲霉菌(Aspergillus niger) Ty-3在制备防治烟草病害的菌剂中的应用。更进一步地,本专利技术的技术方案提供了一种黑曲霉菌(AspergiJJtts niger) Ty-3在制备防治烟草黑胫病菌剂中的应用。本专利技术提供的菌株是从烟草黑胫病植株的根围土壤中筛选出的一株拮抗菌，该菌株已于2011年7月8日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号CCTCC N0:M2011241o黑曲霉菌{Aspergillus niger) Ty-3具体通过如下方法筛选获得 I.病原菌采集与分离 从信阳罗山县和漯河舞阳县采集的较典型黑胫病病症烟株。分离病菌前，先将烟杆冲洗干净，再用75%的酒精对烟杆和小刀 消毒，接着在无菌条件下用小刀剖开烟株茎杆上的病斑，将感病维管束组织切成若干小块，用灭菌过的镊子夹取烟块于牛肉膏蛋白胨培养皿中培养，每皿中放4飞块，重复3皿，培养温度为30°C 32°C。培养48 h，待烟块周围长出像棉絮状的菌丝体时，挑取少许菌丝分离纯化，接入PDA斜面培养基。2.黑胫病病原菌致病性测定 选用烟草K326为试验品种，于盆钵内将烟草种子播种后，待烟株生长到有维管束组织时，将烟草的根部破坏并将培养好的黑胫病原菌稀释一定浓度制成菌悬液，于烟草根围倒A 30 ml菌悬液，并保持高温高湿，20天后观察发病情况。3. 土壤真菌分离 取染病烟株根际周围的土壤10 g，放入90 ml无菌水的三角瓶中，震荡培养30分钟后静置20分钟，然后稀释至10_4、10_5和10_6 (g/ml)3个浓度梯度，分别在3个浓度的溶液中加入I ml 8万单位的硫酸庆大霉素。分别吸取上述3个溶液0.2 ml在PDA培养基平板上均匀涂布，重复3皿，置于28°C温箱中培养72小时后，挑取单菌落进行纯化并移入斜面培养基上保存。4.拮抗菌筛选 分别将培养72小时的土壤真菌和黑胫病病原菌在PDA培养基上进行对峙培养。培养基中间接黑胫病病原菌，两边接种分离得到的土壤真菌，两菌相距2. 5 cm，3天后检查对峙培养结果，根据两菌菌落发展速度、菌落之间有无抑制带、菌落边缘的菌丝是否发生稀疏和萎缩的现象等来判断分离的真菌对病原菌有无拮抗作用。5.拮抗作用测定 制备PDA平板后，采用对峙培养法将上述分离出的拮抗菌分别接种在烟草黑胫病病原菌的两侧，28°C恒温培养，连续观察两菌落生长情况及其菌落间的相互影响，以两菌之间拮抗带的大小来判断拮抗作用大小。6.寄生现象观察 挑起上述对峙培养4天后的菌落交界处的菌丝块，于普通光学显微镜下观察，进而判明拮抗菌抑制病原菌的作用方式和机理。经筛选，得到Ty-3菌种。经鉴定,关于该菌株的信息包括黑曲霉菌{Aspergillus质地绒状,分生包子头深褐色至黑褐色，菌落背面浅褐色，无水溶性色素。Ty-3对烟草黑胫病的拮抗机理为Ty_3菌的菌丝可附着并缠绕在黑胫病菌丝之上，该菌可通过寄生在黑胫病病原菌上进行生长，通过长时间的寄生生长可把病原菌杀死并将其分解，从而对病原菌的生长产生强烈抑制作用。Ty-3菌发酵条件如下种子培养基以葡萄糖为碳源，蛋白胨为氮源，发酵初始pH为5. 5-6. 5，250 mL三角瓶装瓶量为150 mL，28°C摇床转数为150 r/min，发酵时间为48小时，以10%的接种量接种到麸皮固体培养基培养96小时，产生大量孢子后，烘干或自然晾干，至水分含量小于30%。本专利技术从烟草黑胫病原位土壤中筛选分离到一株拮抗菌Ty-3，通过寄生和营养竞争抑制黑胫病病原菌的生长，与其它类似产品相比，有如下优点 1)Ty-3从烟草黑胫病发病的原位土壤中分离出来，制成菌剂后施入土壤，有利于拮抗菌的定殖，能快速繁殖成为优势菌；2)Ty-3通过寄生和营养竞争，抑制黑胫病病原菌的生长，从而有效防治烟草黑胫病； 3)Ty-3为霉菌，产孢子能力较强，这一方面有利于产品的保存，另一方面有利于菌种在土壤中抵抗不良环境，环境适宜即可大量生长繁殖。通过寄生和营养竞争，抑制黑胫病病原菌的生长，从而有效防治烟草黑胫病。该菌种从烟草黑胫病发病的原位土壤中分离出来，制成菌剂后施入土壤，有利于拮抗菌的定殖，能快速繁殖成为优势菌。Ty-3为霉菌，产孢子能力较强，这一方面有利于产品的保存，另一方面有利于菌种在土壤中抵抗不良环境，环境适宜即可大量生长繁殖。附图说明图I为接种黑胫病病原菌后30天烟草发病情况； 图2为从原位土壤中分离得到的真菌菌株Ty-I ； 图3为从原位土壤中分离得到的真菌菌株Ty-2 ； 图4为从原位土壤中分离得到的真菌菌株Ty-3 ； 图5为从原位土壤中分离得到的真菌菌株Ty-4 ； 图6为从原位土壤中分离得到的真菌菌株Ty-5 ； 图7为从原位土壤中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黑曲霉菌（Aspergillus？niger）Ty？3，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2011年7月8日，保藏号：CCTCC？NO:M2011241？。
【技术特征摘要】
1.一种黑曲霉菌fliger)Ty-3，保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏日期2011年7月8日，保藏号CCTCC N0:M201124...
【专利技术属性】
技术研发人员：王岩，李红丽，郭夏丽，李玉红，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：
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