RSV-特异性结合分子制造技术

本发明专利技术提供能够特异性结合RSV的抗体和其功能等同物。还提供编码所述抗体的核酸序列，以及产生所述抗体的抗体产生细胞和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物学和医学领域。
技术介绍
呼吸道合胞病毒(RSV)为属 于副粘病毒家族的感冒病毒。RSV为毒性的、容易传染的并且是2岁以下儿童下呼吸道疾病最常见的病因。在一个RSV感染季上至98%的日托儿童将会被感染。O. 5%和3. 2%之间的RSV感染儿童需要住院治疗。报道美国医院每年接收大约90，000例，4500例死亡。由于RSV而住院治疗的主要风险因素为早产、慢性肺疾病、先天性心脏病、受损的免疫力，在其他情况下健康的为小于6周的年龄的儿童中。除了充足营养形式的维持疗法和氧疗法外，对RSV阳性毛细支气管炎没有可用的有效治疗。抗病毒疗法诸如利巴韦林未被证明在RSV感染中有效。一种单克隆抗体，帕利珠单抗(也称为Synagis),注册用于对RSV感染的预防。帕利珠单抗为针对RSV融合蛋白(F蛋白)遗传设计(人源化)的单克隆抗体。RSV的F蛋白为病毒膜蛋白并且负责附着后病毒粒子与宿主细胞的融合。另外，F蛋白促进相邻细胞通过形成合胞体的感染并且认为其功能取决于所述蛋白质最初的寡聚结构。然而，帕利珠单抗并不总是有效的。因此，本领域有针对RSV的替代和/或补充抗体以及疗法的需求。
技术实现思路
本专利技术的一个目的为提供针对RSV的改进的抗体或所述抗体的功能等同物。另外的一个目的为提供针对RSV的补充的抗体，其结合已有的RSV-特异性抗体，提供协同效应。另一个目的为提供针对RSV F蛋白的人或人源化抗体或功能等同物，其针对不同于已知RSV-特异性抗体所针对的表位。因此，本专利技术提供分离的、合成的或重组的抗体或能够特异性结合呼吸道合胞病毒的功能部分、衍生物和/或类似物，并且其包括-重链⑶Rl序列，其包括与序列KLSIH至少70%相同的序列，和/或-重链⑶R2序列，其包括与序列GYEGEVDEIFYAQKFQH至少70%相同的序列，和/或-重链⑶R3序列，其包括与序列LGVTVTEAGLGIDDY至少70%相同的序列，和/或-轻链⑶Rl序列，其包括与序列RASQIVSRNHLA至少70%相同的序列，和/或-轻链CDR2序列，其包括与序列GASSRAT至少70%相同的序列，和/或-轻链⑶R3序列，其包括与序列LSSDSSI至少70%相同的序列。本专利技术提供命名为“AM22”的抗体，其具有如图2所述的重链和轻链序列。尤其关乎AM22抗原-结合特性的AM22的⑶R序列也在图2中描述。抗体AM22完全为人的，能够特异性结合RSV (图3)并且因此优选用于人个体的预防和/或治疗用途。如上所述唯一已有的临床使用抗-RSV抗体为帕利珠单抗。其为针对RSV F蛋白抗原位点中表位的人源化单克隆抗体。人源化抗体还包含鼠抗体的一部分并且虽然相比完全鼠抗体其免疫原性特性减弱，但在应用于人时还可能出现人源化抗体的副作用。然而本专利技术人成功地获得和培养产RSV-特异性抗体的人B细胞，以提供人RSV-特异性抗体，其具有作为完全人序列结果的强烈降低的“即使有的”免疫原性活性。如实施例所示，根据本专利技术的抗体具有相比帕利珠单抗更优的特性(图I和表I)。本专利技术人已表明通过肌内注射给予本专利技术抗体随后用RSV-X鼻内激发(challenge)的棉鼠(Sigmodon hispidus)具有比给予帕利珠单抗随后用RSV-X激发的棉鼠更低的病理学指数(图4C和表2)。本文所用的病理学指数为用以区分肺损伤的三个独立标志的得分总数。这三个标志为支气管和细支气管上皮肥大、支气管和细支气管周围的炎症(支气管和细支气管周炎)和肺泡中的炎症(肺泡炎)。另外，通过TCID50 (50%组织培养感染剂量)测定法测定的，用本专利技术抗体肌内注射且随后RSV-X激发的棉鼠具有比给予帕利珠单抗随后 用RSV-X激发的棉鼠更低的肺病毒效价。因此，AM22优于帕利珠单抗。除了帕利珠单抗外，还已知一些其他的RSV-特异性抗体。WO 2008/147196公开了 RSV结合分子，即抗体D25、AM14、AM16和AM23的序列。如本申请实施例I所详述的，RSV特异性抗体AM22获自与抗体D25、AM14、AM16和AM23相同的供体。然而很明显的是，AM22比获自相同供体的所有其他抗体更有效地识别RSV。AM22的IC5tl值，I. 15ng ml-1,比帕利珠单抗、D25、AM14、AM16或AM23更低。因此，使用AM22用于RSV-相关病症的治疗和/或预防比使用其他的RSV特异性抗体更有优势。相比其他抗体，获得类似的效果只需要更少的AM22抗体。因此，给予个体更少的AM22用于RSV-相关病症的治疗和/或预防。或者，相比其他抗体，用类似量的AM22可以获得更有效的RSV-相关病症的治疗和/或预防。此外，本专利技术的RSV-特异性抗体识别不同于如前公开的RSV结合分子的表位。AM22与之前鉴定的抗体(W02008/147196)类似，能够结合RSV F蛋白(图3A)。然而，AM22不结合单体RSV F蛋白(图3B的左和右组)。与AM22相反，已知抗体帕利珠单抗和AM16(W02008/147196和图3B中公开)能够结合F蛋白的单体形式。重要的是表达抗原特异性B细胞受体(BCR)的AM22B细胞系不识别F蛋白的重组形式(图3C)。因此AM22结合与帕利珠单抗、D25、AM23和AM16不同的F蛋白表位。当重组F蛋白在包含具有8个HIS-标签(ILZ-8xHIS)的异亮氨酸拉链三聚基序的载体中表达时，AM22识别该三聚体，其为构象依赖型结构(图3D)。相反AM14不识别F蛋白的单体形式或所述ILZ-8xHIS F蛋白。因此AM22结合同样与AM14不同的F蛋白表位。此外人们发现AM22不妨碍D25或帕利珠单抗结合RSV感染的H印2细胞。因此相比D25、AM14、AM16、AM23和帕利珠单抗，AM22结合不同的F蛋白表位。因此，本专利技术的RSV-特异性抗体或其功能等同物优选与已知的RSV-特异性抗体，诸如帕利珠单抗、D25、AM14、AMl6和AM23联用。通过将本专利技术的抗体与已知的RSV-特异性抗体联用，在同样的疗法期间可以识别两个或更多不同的RSV表位。因此获得对RSV更强的免疫原性应答。此外，可通过已知的RSV-特异性抗体与本专利技术的AM22抗体联用而实现对RSV更高的抗体特异性。随着对RSV更强的免疫原性应答和更高的特异性，所述联用将产生更有效的RSV-相关病症的治疗和/或预防。最后，如通过其约I. 15ng/ml的低IC5q值所示，由于相比帕利珠单抗、D25、AM14、AM16和AM23，AM22具有对F蛋白更强的结合力，因此需要较低的总抗体剂量。因此一个实施方案提供在体外中和测定法中具有小于I. 25ng/ml的IC5tl值的本专利技术抗体或功能等同物，该测定法中HEp-2细胞被RSV-A2病毒感染。所述抗体或功能等同物优选具有小于I. 2ng/ml的IC50值,优选在O. 5ng/ml和I. 2ng/ml之间。另外，本专利技术的抗体或功能等同物在其中HEp-2细胞被RSV-A2病毒感染的体外中和测定法中优选具有比帕利珠单抗IC5tl值低至少120倍，更优选至少130倍的IC5tl值。所述抗体或功能等同物优选具有约I. 15ng/ml的IC5tl值。因此本专利技术的RSV-特异性抗体或其功能等同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.能够特异性结合呼吸道合胞病毒的分离的、合成的或重组的抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，并且其包括 -重链⑶Rl序列，其包括与序列KLSIH至少70%相同的序列，和/或 -重链⑶R2序列，其包括与序列GYEGEVDEIFYAQKFQH至少70%相同的序列，和/或 -重链⑶R3序列，其包括与序列LGVTVTEAGLGIDDY至少70%相同的序列，和/或 -轻链⑶Rl序列，其包括与序列RASQIVSRNHLA至少70%相同的序列，和/或 -轻链⑶R2序列，其包括与序列GASSRAT至少70%相同的序列，和/或 -轻链⑶R3序列，其包括与序列LSSDSSI至少70%相同的序列。2.权利要求I的抗体、功能部分、衍生物或类似物，具有包含与序列QVQLVQSGAEVKKPGATVKVSCKISGHTLIKLSIHWVRQAPGKGLEWMGGYEGEVDEIFYAQKFQHRLTVIADTATDTVYMELGRLTSDDTAVYFCGTLGVTVTEAGLGIDDYWGQGTLVTVSS至少70%相同的序列的重链序列和/或具有与序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQIVSRNHLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPVRFSGSGSGTDFTLTINGLAPEDFAVYYCLSSDSSIFTFGPGTKVDFK 至少 70% 相同的轻链序列。3.权利要求I或2的抗体、功能部分、衍生物或类似物，其偶联至PEG或白蛋白，和/或其包括 -补救受体结合表位，和/或； -确定参与Fe和FcRN受体之间相互作用的修饰的氨基酸残基，和/或 -非天然存在的氨基酸残基。4.权利要求1-3任何一项的抗体、功能部分、衍生物或类似物，包括Fe区，其包含选自如 Kabat 等阐述的 EU 索引编码的 234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、247、251、252、254、255、256、262、263、264、265、266、267、268、269、279280、284、292、296、297、298、299、305、313、316、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、339、341、343、370、373、378、392、416、419、421、440和443的一个或多个位点的修饰，所述修饰包括氨基酸取代和/或氨基酸插入和/或氨基酸缺失。5.能够特异性结合由抗体识别的表位的分离的、合成的或重组的抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包括 -重链⑶Rl序列，其包括序列KLSIH，和/或 -重链CDR2序列，其包括序列GYEGEVDEIFYAQKFQH，和/或 -重链⑶R3序列，其包括序列LGVTVTEAGLGIDDY，和/或 -轻链⑶Rl序列，其包括序列RASQIVSRNHLA，和/或 -轻链CDR2序列，其包括序列GASSRAT，和/或 -轻链CDR3序列，其包括序列LSSDSSI。6.权利要求1-5任何一项的抗体、功能部分、衍生物或类似物，其中所述抗体、功能部分、衍生物或类似物具有小于 I X 1(T2M、I X 1(Γ3Μ、I X 1(Γ4Μ、I X 1(Γ5Μ、I X 1(Γ6Μ、I X 1(Γ7Μ、I X 1(Γ8Μ、I X 1(Γ9Μ、I X 1(Γ10Μ、I X 1(ΓηΜ、I X 1(Γ12Μ、I X 1(Γ13Μ、I X KT14M 或小于 I X KT15M 的离解常数(Kd)。7.权利要求1-6任何一项的抗体、功能部分、衍生物或类似物，其为人抗体。8.权利要求1-6任何一项的抗体、功能部分、衍生物或类似物，其为人源化抗体。9.分离的、合成的或重组的核酸序列，或其功能等同物，其包括编码具有与序列KLSIH至少70%序列同一性，和/或与序列GYEGEVDEIFYAQKFQH至少70%序列同一性，和/或与序列LGVTVTEAGLGIDDY至少70%序列同一性，和/或与序列RASQIVSRNHLA至少70%序列同一性，和/或与序列GASSRAT至少70%序列同一性，和/或与序列LSSDSSI至少70%序列同一性，和 / 或与序列 QVQLVQSGAEVKKPGATVKVSCKISGHTLIKLSIHWVRQAPGKGLEWMGGYEGEVDEIFYAQKFQHRLTVIADTATDTVYMELGRLTSDDTAVYFCGTLGVTVTEAGLGIDDYWGQGTLVTVSS 至少 70% 序列同一性，和 / 或与序列 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQIVSRNHLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPVRFSGSGSGTDFTLTINGLAPEDFAVYYCLSSDSSIFTFGPGTKVDFK 至少 70% 序列同一性的氨基酸序列的序列。10...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒂姆·博蒙特，阿德里亚努斯·奎里纳斯·巴克，安田悦子，
申请(专利权)人：医学免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：