HLA-A*3303限制性WT1肽和包含此肽的药物组合物制造技术

本发明专利技术公开了：包含由来自WT1蛋白的连续九个氨基酸残基组成的氨基酸序列的肽，其中在氨基酸序列中第2位的氨基酸残基选自Ala、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、Ser和Asp，并且在氨基酸序列中第9位的氨基酸残基是Arg；编码此肽的多核苷酸；包含此肽的药物组合物；以及其它。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及HLA_A*3303限制性肽，具体地说所述肽包含由来自WTl蛋白的9个连续的氨基酸组成的氨基酸序列，其中在氨基酸序列中第2位的氨基酸选自Ala、He、Leu、Val、Phe、Tyr> Ser和Asp,并且在氨基酸序列中第9位的氨基酸是Arg。此外,本专利技术还涉及编码此肽的多核苷酸和包含此肽的用于治疗或预防癌症的药物组合物等等。专利技术背景 WTl基因(Wilms肿瘤I基因(Wilms' tumor Igene))被认为是导致Wilms肿瘤即儿童肾癌的基因(非专利文献I和2)。WTl是具有锌指结构的转录因子。WTl基因起初被认为是肿瘤阻抑基因。然而随后的研究(非专利文献3、4、5和6)表明WTl基因在造血肿瘤和实体癌中起癌基因的作用。WTl基因在许多类型的恶性肿瘤中高水平表达。对作为自体蛋白的未突变WTl基因产物在活体中是否具有免疫原性已做了验证。这些结果表明了在肿瘤细胞中高水平表达的WTl基因所表达的蛋白经过在细胞内的加工而被片段化。产生的肽和MHC I类分子形成复合体，该复合体被呈递到细胞表面，通过肽的接种可以诱导识别该复合体的CTL(非专利文献7、8和9)。同样表明用WTl肽或WTl的cDNA免疫小鼠，被移植的表达WTl基因的肿瘤细胞被高几率地排斥(非专利文献7和10);而生理性地表达WTl基因的正常组织没有受到被诱导的CTL的破坏(非专利文献7)。体外人类细胞的实验表明当具有结合HLA-A*0201分子(人类MHC I类分子之一)的高能力的Dbl26肽或WH187肽(SEQ ID No I的第187-195位的氨基酸，SLGEQQYSV)用于刺激具有HLA_A*0201的人类外周血单核细胞时，WTl-特异性CTL被诱导。被诱导的CTL具有对高水平地内源表达WTl基因的肿瘤细胞特异的细胞毒活性，该CTL的细胞毒活性是HLA-A2限制性的(非专利文献11)。人类细胞的体外实验表明使用匹配HLA-A*2402 (其是HLA-A等位基因之中最频繁地出现在日本人中的)的WTl肽(WTl235 ；SEQ ID No 1的第235-243位的氨基酸，CMTWNQMNL)，可以诱导WTl特异性CTL(TAK-I)(非专利文献12)。被诱导的CTL并不阻抑部分地生理表达WTl基因的正常造血干细胞形成集落的活性。这些报道强烈地表明WTl特异性CTL不止可以在小鼠中诱导而且可以在人类中诱导。此CTL具有抗高水平表达WTl基因的肿瘤细胞的细胞毒活性，但不具有抗生理地表达WTl基因的正常细胞的细胞毒活性。(非专利文献7、10、11、12、13 和 14)。WTl基因产物作为核内蛋白被呈递并在细胞质内经蛋白酶体加工而片段化成肽。片段化的肽被TAP (与抗原加工有关的转运体)转运到内质网腔中，与MHC I类分子形成复合体并呈递到细胞表面。出于CTL前体细胞经由TCR而识别WTl肽-MHC I类分子复合体的结果，WTl特异性CTL被诱导，从而施加细胞毒的作用于通过MHC I类分子呈递WTl基因产物的肿瘤细胞(非专利文献7、8和9)。那么，定靶WTl基因产物的癌症免疫疗法中所使用的WTl肽至少需要是在活体中结合MHC I类分子的形式。然而MHC I类分子是多种多样的而且结合各自的MHC I类分子的WTl肽的氨基酸序列也是互不相同的。因此，需要提供与各自的MHC I类亚型匹配的肽。然而，迄今仅知道HLA-A*2402分子限制性肽、HLA_A*0201分子限制性肽和HLA-A*2601分子限制性肽是HLA分子限制性的WTl肽(分别见专利文献I、非专利文献11和专利文献2)。HLA-A*3303以紧随HLA_A*2402之后的最高百分比出现在日本人中。因此，有必要找出HLA-A*3303限制性的WTl肽。专利文献I :W0 2003/106682专利文献2 W0 2005/095598非专利文献I =Daniel A. Haber 等 ，Cell. 1990Jun 29 ；61 (7) :1257-69. 非专利文献2 Call KM 等 ，Cell. 1990Feb 9 ；60 (3) :509-20.非专利文献3 =Menke AL 等 ，Int Rev Cytol. 1998 ；181 :151-212.综述.非专利文献4 :Yamagami T 等 ，Blood. 1996Apr I ；87(7) :2878-84.非专利文献5 :Inoue K 等 ，Blood. 1998Aprl5 ；91 (8) :2969-76.非专利文献6 =Tsuboi A 等 ，Leuk Res. 1999May ；23(5) :499-505.非专利文献7 0ka Y 等 ，J Immunol. 2000Feb 15 ；164(4) :1873-80.非专利文献8 =Melief CJ 等 ，Immunol Rev. 1995Jun ；145 :167-77.非专利文献9 Ritz J, J Clin Oncol. 1994Feb ；12(2) :237-8.非专利文献10 =Tsuboi A 等 ，J Clin Immunol. 2000May ；20(3) :195-202.非专利文献11 0ka Y 等 ，Immunogenetics. 2000Feb ；51 (2) :99-107.非专利文献12 0hminami H 等 ，Blood. 2000Jan I ；95(1) :286-93.非专利文献13 Gao L 等 ，Blood. 2000Apr I ；95(7) :2198-203.非专利文献14 0hminami H 等 ，Blood. 2000Jan I ；95(1) :286-93.专利技术公开本专利技术要解决的问题本专利技术要解决的问题是提供HLA_A*3303限制性的WTl肽和编码此肽的多核苷酸以及包含此肽和此多核苷酸的用于治疗/预防癌症的药物组合物等等。解决问题的方法本专利技术人针对以上描述的情况做了深入的研究，结果发现具以下特征的肽能够高效诱导WTl特异性CTL :包含由来自WTl蛋白的9个连续的氨基酸组成的氨基酸序列，其中在氨基酸序列中第2位的氨基酸选自Ala、lie、Leu、Val、Phe、Tyr> Ser和Asp并且在氨基酸序列中第9位的氨基酸是Arg。因此，本专利技术已被完成。本专利技术提供(I)包含由来自WTl蛋白的9个连续的氨基酸组成的氨基酸序列的肽，其中在氨基酸序列中第2位的氨基酸选自Ala、He, Leu, Val, Phe, Tyr, Ser和Asp并且在氨基酸序列中第9位氨基酸的是Arg;(2) (I)中的肽，其中氨基酸序列选自Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg(SEQ ID No :2)、Phe Ser Arg Ser Asp Gln Leu Lys Arg (SEQ ID No :3)、Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg(SEQ ID No :4)和Thr Ser Glu Lys Pro Phe Ser Cys Arg(SEQ ID No :5)；(3) (2)中的妝，其中氨基酸序列是 Ser Asp Gl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
2006.02.22 JP 2006-0452871.一种肽，其由其中1-5个氨基酸被其他氨基酸代替的Ser AspGln Leu Lys Arg HisGln Arg (SEQ ID No :4)的氨基酸序列组成，其中所述肽能结合HLA_A*3303分子并能诱导CTL。2.用于治疗或预防HLA-A*3303阳性受试者的癌症的药物组合物，其包含权利要求I的肽。3.权利要求I的肽在制备治疗或预防HLA-A*3303阳性受试者的癌症的药物中的应用。4.编码权利要求I的肽的多核苷酸。5.包含权利要求4的多核苷酸的表达载体。6.用于治疗或预防HLA-A*3303阳性受试者的癌症的药物组合物，其包含权利要求4的多核苷酸或包含所述多核苷酸的表达载体。7.权利要求4的多核苷酸或包含所述多核苷酸的表达载...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，
申请(专利权)人：株式会社癌免疫研究所，
类型：发明
国别省市：