β淀粉样蛋白的测定方法技术

本发明专利技术提供一种Aβ测定方法，即使在以极低浓度（数pM的程度）含有Aβ的样品中，也能够准确地测定Aβ浓度。本发明专利技术的β淀粉样蛋白的测定方法，包括：样品准备工序（101），在样品处理容器中加入可能含有β淀粉样蛋白的样品；浓缩工序（102），在上述样品处理容器中的上述样品中添加能够使β淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，降低上述样品中含有的溶剂的量；中和工序（103），中和在上述浓缩工序中获得的样品处理液中的上述增溶剂；和测定工序（104），基于抗原抗体反应，确定经过上述中和后的样品处理液中可能含有的β淀粉样蛋白的量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及0淀粉样蛋白(后文中以AP进行说明)的高灵敏度测定方法。
技术介绍
阿尔茨海默氏病是从刚进入老年期到老年期发生的以进行性的痴呆(认知症)为特征在疾病。目前，据说日本国内的患者数量达到100万人以上。可以预计在未来，伴随人口的老龄化，这一数字一定会增加。阿尔茨海默氏病的临床症状为记忆障碍、高级脑功能障碍(失语、失用、失认、结构性失用(constructional aparaxia))等。这些症状在其他痴呆症中也常见，仅通过临床症状确诊为阿尔茨海默氏病是非常困难的。 迄今为止，阿尔茨海默氏病没有根本治疗的方法，自1999年疫苗疗法在小鼠模型中成功以来，对于开发根本治疗的方法的期待不断增加(参见非专利文献I)。为了有效地利用这些根本治疗的方法，需要早期诊断阿尔茨海默氏病。作为阿尔茨海默氏病的特征性病理组织观察结果，有脑组织中的老年斑和神经元纤维变化。前者的主要构成成分是具有P折叠结构的AP的凝集体，后者的主要构成成分是过度磷酸化的微管聚合蛋白(tau蛋白)。目前，关于阿尔茨海默氏病的发病，AP蓄积是最初发生的病理变化，这一淀粉样蛋白假说是非常有力的(参见非专利文献2)。S卩，已知在阿尔茨海默氏病中，在出现临床症状之前，发生AP在脑内蓄积等上述病理上的组织变化。因此，作为标记检测脑内的AP肽，成为TAP蓄积的疾病、特别是阿尔茨海默氏病的早期诊断方法之一。作为阿尔茨海默氏病的体外诊断剂，广泛采用以使用对AP的特异性抗体的ELISA法为原理的诊断剂。根据ELISA法，基本确定了随着阿尔茨海默氏病的进行，脑脊液中由42个氨基酸构成的AP (A ￠42)减少(参见非专利文献3)。现有技术文献非专利文献非专利文献I :Schenk D, Seubert P et al. , Nature 400:173-177, 1999.非专利文献2:Hardy JA, Selkose DF, Science 297:353-356, 2002.非专利文献3 :Hansson 0, Mithon L et al. , Lancet Neurol 5:228-234, 2006.
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题但是，例如以将机体组织清洗而得到的清洗液这样的、以极低浓度(数PM的程度)含有AP的物质为样品，实施上述ELISA法等基于抗原抗体反应的定量测定时，由于浓度极低，所以存在不能精确测定的问题。本专利技术是为了解决上述问题而完成的，其目的在于提供一种AP测定方法，即使在以数PM程度的极低浓度含有AP的样品中，也能够准确地测定AP浓度。解决技术问题的手段为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种P淀粉样蛋白的测定方法，其包括样品准备工序，在样品处理容器中加入可能含有3淀粉样蛋白的样品；浓缩工序，在上述样品处理容器中的上述样品中添加能够使3淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低上述样品中含有的溶剂的量；中和工序，中和在上述浓缩工序中获得的样品处理液中的上述增溶剂；和测定工序，基于抗原抗体反应，确定经过上述中和后的样品处理液中可能含有的P淀粉样蛋白的量。本专利技术还提供一种3淀粉样蛋白的测定方法，其包括样品处理容器准备工序，在样品处理容器中加入用于使3淀粉样蛋白附着的添加剂；样品准备工序，在上述样品处理容器中加入可能含有3淀粉样蛋白的样品；第一浓缩工序，将上述样品处理容器内的上述样品浓缩；第二浓缩工序，在通过上述第一浓缩工序浓缩后的样品中，添加能够使P淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低上述样品中含有的溶剂的量；中和工序，中和在上述第二浓缩工序中获得的样品处理液中的上述增溶剂；和测定工序，基于抗原抗体反应，确定经过上述中和后的样品处理液中可能含有的P淀粉样蛋白的量。 专利技术效果根据本专利技术的0淀粉样蛋白的测定方法，即使在以极低浓度(例如数PM的程度)含有AP的样品中，也能够准确地测定AP浓度。附图说明图I是表不实施例I的各步骤的流程图。图2是表示实施例I中测得的AP浓度的结果的图。图3是表不实施例2的各步骤的流程图。图4是表示实施例2中测得的AP浓度的结果的图。图5是表不实施例3的各步骤的流程图。图6是表示由实施例3获得的AP回收率的结果的图。图7是表不实施例4的各步骤的流程图。图8是表示由实施例4获得的AP回收率的结果的图。图9是表示参考例的各步骤的流程图。图10是表示由参考例获得的AP回收率的结果的图。图11是表示本专利技术第一实施方式的AP测定方法各步骤的流程图。图12是表示本专利技术第二实施方式的AP测定方法各步骤的流程图。图13是表示由于有无增溶剂的差异带来的AP回收率的差异的图。具体实施例方式本专利技术的AP测定方法中的AP是凝集性和吸附性高的物质。这是因为构成A 3的氨基酸大多由疏水性高的氨基酸构成。“凝集性高”意味着AP本身容易缔合而凝集的性质。这里，将不凝集而以一个分子游离的々0称为AP单体。另外，将两个分子以上的AP凝集、但是能够溶解在生理盐水中等水溶液中的AP称为可溶性AP多聚体或可溶性AP低聚物(以下统称为可溶性A3低聚物)。此外，将从上述可溶性A3低聚物的状态继续凝集、不溶于上述水溶液的AP称为不溶性々0多聚体或不溶性々0聚合物(以下统称为不溶性AP聚合物)。一般而言，疏水性强的AP在水溶液中以凝集物存在更为稳定是凝集性高的原因。“吸附性高”意味着A P容易被吸附于A P以外的物质的性质。AP以外的物质例如为容器表面，或者为机体组织。在任何情况下都可以认为AP以外的物质的疏水性区域与AP的疏水性区域的疏水相互作用是原因之一。在八0单体中，尤为重要的是由42个氨基酸构成的AP单体(将其称为A￠42)和由40个氨基酸构成的AP单体(将其称为AM0)。可以认为，已知作为阿尔茨海默氏病的特征现象的、在脑组织中形成老年斑，是由上述AP 42和AP 40的凝集性和吸附性引起的。目前，在临床实践中，髓液中的A P 42和A P 40视为测定指标。对A P 42和A P 40进行比较，A342的凝集性和吸附性都相对较强。在本专利技术中，在没有特别说明的情况下，“AP ”一并 表示AP单体、可溶性々0低聚物和不溶性々0聚合物。此外，在没有特别说明的情况下，“A3单体”表示A3 42和A3 40。本专利技术的AP测定方法中的样品是从阿尔茨海默氏病患者或怀疑患有阿尔茨海默氏病的被检测者采集的体液(例如，脑脊液、血清、泪液、鼻涕、唾液等)。或者是通过利用棉棒或药签等采集工具从上述被检测者的鼻粘膜采集鼻粘液而获得的鼻涕或鼻腔内粘膜摩擦物。或者，上述样品还可以是利用生理盐水等对可能凝集或吸附有上述A3的机体组织(例如脑组织或粘膜等)进行清洗而获得的清洗液。在本专利技术中，可以将通过利用棉棒或药签等采集工具从上述被检测者的鼻粘膜采集鼻粘液而获得的鼻涕或鼻腔内粘膜摩擦物作为样品。这是因为发现了脑内的々0在鼻粘膜周围的组织蓄积的倾向。具体而言，可以使用药签或棉棒(例如，荣研化学株式会社生产的Y灭菌铝轴棉棒)进行采集。通过将药签或棉棒等在鼻粘膜上擦拭，采集鼻粘液，将该采集的鼻粘液本身作为样品，或者将利用规定的提取液从该棉棒提取的鼻粘液作为样品。其中，作为规定的提取液，可以列举生理盐水、含有表面活性剂的溶液、有机溶剂等。在本专利技术中，特别是可以将利用生理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.01.28 JP 2010-0165591.一种0淀粉样蛋白的测定方法，其特征在于，包括 样品准备工序，在样品处理容器中加入可能含有3淀粉样蛋白的样品； 浓缩工序，在所述样品处理容器中的所述样品中添加能够使3淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低所述样品中含有的溶剂的量； 中和工序，中和在所述浓缩工序中获得的样品处理液中的所述增溶剂；和测定工序，基于抗原抗体反应，确定经过所述中和后的样品处理液中可能含有的P淀粉样蛋白的量。2.如权利要求I所述的P淀粉样蛋白的测定方法，其特征在于 还包括在所述样品准备工序之前，在样品处理容器中加入用于使3淀粉样蛋白附着的添加剂的样品处理容器准备工序。3.—种P淀粉样蛋白的测定方法，其特征在于，包括 样品处理容器准备工序，在样品处理容器中加入用于使P淀粉样蛋白附着的添加剂； 样品准备工序，在所述样品处理容器中加入可能含有3淀粉样蛋白的样品； 第一浓缩工序，将所述样品处理容器内的所述样品浓缩； 第二浓缩工序，在通过所述第一浓缩工序浓缩后的样品中，添加能够使3淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低所述样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：南条俊文，福原崇臣，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：