抗人mCRP蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞系和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人mCRP蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO：C201243的杂交瘤细胞系（Hybridomacelllines）所分泌，其识别位点为mCRP的C端199~206八肽的表位；所述mCRP的C端199~206八肽的氨基酸序列为Phe-Thr-Lys-Pro-Gln-Leu-Trp-Pro。该单克隆抗体经酶联免疫法筛选，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和免疫印迹分析等方法鉴定了其与抗原结合的特异性和亲和力等特性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种抗人mCRP蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞系和试剂盒。
技术介绍
C-反应蛋白(CRP)有两种存在形式五聚体CRP (pCRP)和CRP异构体(monomeric CRP，mCRP)。pCRP由肝细胞分泌，作为炎症反应的一个重要标志，它还参与并加重了动脉粥样硬化形成、粥样斑块破裂及心肌梗死等炎症反应的过程。mCRP是由pCRP转变而来，这一转变过程出现在急性心梗、不稳定心绞痛等一些局部缺血缺氧导致的低PH和氧自由基富集或血小板活化等情况，具体过程如下细胞损伤或血小板活化后其局部胞膜内侧磷脂酰胆碱外翻暴露于细胞膜表面，pCRP随后与PC结合。在短时间内(<处)，结合的？0^迅速解聚形成mCRP,其空间构象发生改变,N端35 47位氨基酸(与公认的胆固醇结合序列一致)和C端199 206位氨基酸暴露形成新的抗原识别位点。研究发现，pCRP与细胞膜结合后经过空间构象改变形成mCRP是pCRP发挥生物学功能的先决条件，PCRP的致炎及致细胞损伤作用可能均来源于mCRP的形成。最近研究指出pCRP与活化的血小板膜表面结合后迅速转变为mCRP，mCRP的出现促进了血小板的进一步 聚集以及其与动脉内皮细胞的相互作用，加重了局部血管的炎症反应，加速了动脉粥样硬化斑块不稳定过程。研究还发现mCRP可以促进巨噬细胞吞噬低密度脂蛋白，这对于动脉粥样硬化过程中泡沫细胞的形成极为关键。此外，mCRP还可以作用于中性粒细胞、单核细胞和内皮细胞，促进IL-8，MCP-I及细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素等的表达升高，进而加重局部细胞和组织的炎症状态。因此，mCRP不但可以作为炎症反应的标志，它也作为重要参与者参与了炎症反应过程及血小板的活化。在pCRP转变为mCRP过程中，mCRP分子C端199 206表位8个氨基酸暴露形成新的抗原识别位点是mCRP发挥生物学作用的重要靶点。该抗原识别表位只出现在mCRP 上，而在pCRP分子中它被包裹在分子结构内部不能被识别，因而，针对该抗原表位的单克隆抗体不但可以特异性识别mCRP，还可以为我们正确识别及区分mCRP和pCRP功能提供方便。因此，如果可以成功制备得到针对mCRP C端199 206氨基酸表位并且具有中和mCRP 不良生物学作用的功能性抗人mCRP单克隆抗体，不仅可以更好的研究mCRP的生物学功能及其具体致病机制，还可以为mCRP抗原检测试剂盒的开发和应用提供便利。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种抗人mCRP的单克隆抗体以及能产生所述抗体的杂交瘤细胞株，本单克隆抗体识别序列为mCRP的C末端199 206八肽氨基酸表位。它是一种具有中和功能的高亲和力功能性抗人mCRP单克隆抗体；可用于检测游离mCRP抗原水平定量及定性检测试剂盒的开发，并用于临床疾病诊断和病情预后判断。为了解决现有技术中的这些问题，本专利技术提供的技术方案是一种杂交瘤细胞系(Hybridoma cell lines)，该细胞系的保藏编号为CCTCC NO: C201243，其具有分泌抗人mCRP蛋白的单克隆抗体的能力。本专利技术的另一目的在于提供一种所述的杂交瘤细胞系(Hybridoma cell lines) 的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤(I)合成人mCRP C末端199 206八肽，将人mCRP C末端199 206八肽分别与血蓝蛋白KHL及BSA偶联形成抗原肽，分别作为免疫原免疫BALB/c小鼠；(2)获取融合细胞生长克隆步骤从免疫合格小鼠无菌取其脾脏细胞作为抗原致敏的B细胞，按常规方法将B细胞与骨髓瘤细胞SP2/0株融合，利用常规的HAT筛选方法筛选，获取融合细胞生长克隆；(3)经常规ELISA或竞争ELISA或免疫印迹技术筛选和鉴定，获取杂交瘤细胞系。本专利技术的又一目的在于提供一种抗人mCRP蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞系(Hybridoma cell lines)所分泌,其识别位点为mCRP 的C端199 206八肽的表位；所述mCRP的C端199 206八肽的氨基酸序列为Phe-Thr -Lys-Pro-Gln-Leu-Trp-Pro。 本专利技术的又一目的在于提供一种mCRP抗原检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含有效量的所述的抗人mCRP蛋白的单克隆抗体。本专利技术的又一目的在于提供一种所述的mCRP抗原检测试剂盒在检测mCRP抗原方面的应用。优选的，所述检测mCRP抗原包括定量检测和定性检测。优选的，所述检测mCRP抗原方法为酶联免疫吸附检测法。本专利技术的又一目的在于提供一种治疗或预防mCRP升高所导致疾病的药物，其特征在于所述药物包含药学上有效量的所述的抗人mCRP蛋白的单克隆抗体。本专利技术中抗人mCRP蛋白的单克隆抗体，其特征是它是由保藏号为CCTCC NO C201243的抗人mCRP单克隆抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞系，优选的是杂交瘤细胞株2C7所分泌，其识别位点为mCRP的C端199 206八肽氨基酸序列表位。本专利技术提供了该单克隆抗体在制备治疗或预防mCRP升高所导致疾病的药物中的应用。优选的，本专利技术还提供了该单克隆抗体在制备定量和定性mCRP抗原检测试剂盒及含有权利要求I所述的单克隆抗体在mCRP抗原检测中的应用。所述的抗人mCRP单克隆抗体制备的治疗或预防mCRP升高所导致疾病的药物，抗mCRP单克隆抗体具有中和mCRP不良生物学作用的功能。所述的抗mCRP单克隆抗体在制备mCRP抗原检测试剂盒及含有所述的单克隆抗体在定量和定性检测mCRP抗原的试剂盒中的应用，所述检测mCRP抗原方法为酶联免疫吸附检测法。分泌所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞，是保藏号为CCTCC NO C201243的抗人 mCRP单克隆抗体的杂交瘤细胞系，优选的是杂交瘤细胞株2C7。本专利技术抗人C反应蛋白异构体(mCRP)单克隆抗体制备方法及其应用涉及生物医学领域，具体涉及一种能识别人mCRP的单克隆抗体的制备及其应用。本专利技术的杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤(I)合成人mCRP C末端199 206八肽氨基酸，与血蓝蛋白KHL及BSA偶联形成抗原肽作为免疫原免疫BALB/c小鼠；(2)获取融合细胞生长克隆从免疫合格小鼠无菌取其脾脏细胞作为抗原致敏的B细胞，按常规方法，将B细胞与骨髓瘤细胞SP2/0株融合，利用常规的HAT筛选方法筛选，获取融合细胞生长克隆；(3)应用常规及竞争ELISA以及免疫印迹技术筛选和鉴定，获取高分泌抗体的杂交瘤细胞株。BALB/c小鼠腹腔内接种上述高分泌抗体杂交瘤细胞株，收获小鼠腹水后分离纯化得到所需单克隆抗体。本专利技术得到的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系的保藏信息为保藏单位是中国典型培养物保藏中心；保藏地址是湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心；保藏日期是 2012年4月20日；保藏号是CCTCC No :C201243。杂交瘤细胞系的分类命名为杂交瘤细胞株2C7。具体的可以是杂交瘤细胞株1D9，杂交瘤细胞株2C7或杂交瘤细胞株1D6都能满足分泌类似抗体的要求。本专利技术得到的所述抗人mCRP单克隆抗体可以定量和定性检测人mCRP抗原，方便研究与mCRP相升高关疾病如急性心梗、不稳定性心绞痛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞系(Hybridoma cell lines)，该细胞系的保藏编号为CCTCC No:C201243，其具有分泌抗人mCRP蛋白的单克隆抗体的能力。2.一种权利要求I所述的杂交瘤细胞系(Hybridoma cell lines)的制备方法,其特征在于所述方法包括以下步骤 (1)合成人mCRPC末端199 206八肽，将人mCRP C末端199 206八肽分别与血蓝蛋白KHL及BSA偶联形成抗原肽，分别作为免疫原免疫BALB/c小鼠； (2)获取融合细胞生长克隆步骤从免疫合格小鼠无菌取其脾脏细胞作为抗原致敏的B细胞，按常规方法将B细胞与骨髓瘤细胞SP2/0株融合，利用常规的HAT筛选方法筛选，获取融合细胞生长克隆； (3)经常规ELISA或竞争ELISA或免疫印迹技术筛选和鉴定，获取杂交瘤细胞系。3.一种抗人mCRP蛋白的单克隆抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊宏，唐波，吴鑫，郭妍，许迪，杜攀，卢新政，
申请(专利权)人：王俊宏，唐波，吴鑫，郭妍，许迪，杜攀，卢新政，
类型：发明
国别省市：