本发明专利技术公开了一种抑制PDCD4基因表达的siRNA及其应用，所述的siRNA的正义链序列为：5'-GGAGCGGUUUGUAGAAGAA-3'，反义链序列为：5'-UUCUUCUACAAACCGCUCC-3'。本发明专利技术抑制PDCD4基因表达的siRNA为研究PDCD4基因的功能提供了新的技术方案，用该siRNA沉默PDCD4后可显著降低白血病细胞对化疗药物的敏感性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及ー种抑制H)⑶4基因表达的siRNA及其在研究TOCD4基因功能中的应用。
技术介绍
程序性细胞死亡因子4(Programmed cell death4, F1DOM)是近年来发现的一种新的抑癌基因，研究报道其在肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巣癌、神经胶质瘤和肝细胞癌等多种恶性肿瘤细胞中表达缺失或低表达。Chen等(Chen Y,Knosel T, KristiansenG. J Pathol, 2003, (5) :640-646.)通过研究124例不同亚型的原发性肺癌样本，结果显示，83%的肿瘤样本中H)⑶4蛋白表达缺失，相对于肺部正常组织中H)⑶4mRNA的表达，肺癌组 织中F1DOMmRNA的表达水平比正常肺部组织中显著降低。Afonja等(Afonja O, Juste D, DasS，et al. Oncogene, 2004, 23:8135.)在对乳腺癌细胞系的研究中发现，通过转染H)CD4到T-47D和MDA-MB-231乳腺癌细胞系，可以诱导细胞凋亡的发生。Zhang等(Zhang H, OzakiI, Mizuta T，et al. Oncogene, 2006, 25(45) :6101-6112.)发现 PDCD4 也可以诱导肝癌细胞系Huh7的凋亡。H)⑶4的表达产物可调节细胞的程序性死亡，也可通过抑制凋亡相关基因的转录或翻译从而抑制肿瘤的生成或肿瘤细胞的生长。肿瘤细胞中TOCD4的表达水平与药物对细胞的敏感性之间存在一定的关系。通过转染反义TOCD4可以明显减弱肾癌细胞系U0-31对药物葛尔德霉素的敏感性，说明细胞中下调 F1DCDA 的表达会减弱药物的细胞毒性(Bohm, M. , Sawicka, K. , Siebrasse, J. P. , Brehmer-Fastnacht, A. , Peters, R. , & Klempnauer, K. H. (2003). Oncogene, 22 (31), 4905-4910.)。此外，通过转染全长I3D⑶4cDNA的质粒到人胃腺癌细胞系BGC-823中，增强I3D⑶4蛋白在细胞中的表达，发现其可相应的增强BGC-823细胞对药物羟基喜树碱(HCPT)的敏感性(王汉卿，孙震晓。世界华人消化杂志，2009，(7) :647-651. )。Jansen等(Jansen, A.P. , Camalier, C. E. , Stark, C., & Colburn, N. H. Mol Cancer Ther, 2004, 3(2)，103-110.)。研究发现rocD4的表达可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，肿瘤细胞中rocD4的表达水平与细胞对抗肿瘤药物的敏感性正相关，上调TOCD4的表达会增加细胞对某些化疗药物的敏感性，反之，下调TOCD4的表达则会引起某些药物对细胞毒性的减弱。然而TOCD4在白血病中的功能研究较少，最近的研究发现，在急性髓性白血病(Acute myelogenous leukemia, AML)中，]3DOM的表达可促进维A酸诱导的粒细胞分化(Ozpolat B, Akar U, Steiner M, et al. Mol Cancer Res, 2007, 5:95.)。近期的报道表明，在白血病中H)⑶4基因直接被miRNA-21调控，抑制miRNA-21可以导致H)⑶4的表达水平显著升高，并展不出显著的抗白血病作用(①Yumin Li, Xujiao Zhu, et al. Cancer Science. 201O, 101(4):948-954;②Haiyan Hu, Yumin Li,Jingyi Gu, et al. Leuk Lymphoma. 2010, 51(4):694-701;③ Jingyi Gu, Xujiao Zhu, Yumin Li, et al. Med Oncol. 2011，28 (I):211-218.)，这提示抑癌基因H)CD4在白血病中也有重要作用。近年RNA干扰技术迅速发展，不仅广泛用于肿瘤基因治疗，而且也是研究基因功能的有用工具。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供一种抑制ro⑶4基因表达的siRNA。本专利技术的另一目的在于提供上述抑制ro⑶4基因表达的siRNA的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种抑制ro⑶4基因表达的siRNA，其序列为正义链5’-GGAGCGGUUUGUAGAAGAA-3’，反义链5’-UUCUUCUACAAACCGCUCC-3’； 优选为，所述的抑制ro⑶4基因表达的siRNA序列(包括正义链和反义链)的3’端垂悬有dTdT，dTdT结构有利于保护RNA免受酶解；所述的抑制F1D⑶4基因表达的siRNA以GenBank基因库中F1D⑶4已知序列(GeneID :27250, NM_145341, NM_014456)为基础，按照siRNA设计原则，结合Ambion公司提供的在线设计工具siCatch siRNA Design针对编码区的siRNA靶点位置设计。上述的抑制ro⑶4基因表达的siRNA在研究ro⑶4基因功能中的应用，特别是用于进行TOCD4基因与白血病细胞对抗白血病化疗药物敏感性的相关性研究。本专利技术具有如下的优点(I)本专利技术提供的抑制ro⑶4基因表达的siRNA能有效沉默ro⑶4基因，下调PDCD4基因的表达量，为研究TOCD4基因的功能提供了新的技术方案。(2)通过研究白血病K562细胞中⑶4对抗白血病化疗药物敏感性的影响，发现在白血病细胞中下调H)CD4的表达可以降低抗白血病化疗药物对白血病细胞的敏感性，减弱细胞毒性，从而恢复白血病细胞生长。这为进一步研究roCD4在白血病中的功能及关系提供理论依据。附图说明图I是Real-time PCR检测K562细胞内H)CD4 mRNA的相对表达水平图，*P< 0. 05。图2是Western bloting检测K562细胞内F1DCD^:和P-actin蛋白的表达水平图。图3是Western bloting检测K562细胞内F1DQM蛋白相对内参P -actin的相对表达水平图，*P < 0. 05。具体实施例方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。使用的材料白血病K562细胞购自中国科学院上海细胞所；新生牛血清购自杭州四季青生物工程科技有限公司；1640培养基购自GIBCO公司；Lipof ectamine 2000购自Invitrogen公司；MTT及二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma公司；Trizol试剂购自天根生物公司；Real-time PCR相关试剂购自Takara公司，引物由上海生工合成；细胞裂解液(RIPA)和Bradford蛋白定量试剂盒购自碧云天生物技术研究所，PVDF膜购自Millipore公司，0-actin—抗购自武汉博士德公司，F1DOM—抗购自Cell SignalingTechnology公司，二抗分别购自北京博奥森公司和Asbio Technology公司；三氧化二砷购自北京双鹭药业股份有限公司，小本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种抑制ro⑶4基因表达的siRNA，其序列为 正义链5’ -GGAGCGGUUUGUAGAAGAA-3’， 反义链5’ -UUCUUCUACAAACCGCUCC-3’。2.根据权利I所述的抑制TOCD4基因表达的siRNA，其特征在于所述的抑制T...
【专利技术属性】
技术研发人员：费嘉，谷景义，朱雪娇，骆小闯，李育敏，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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