本发明专利技术涉及一种变性蛋白粉及采用此蛋白粉制备的脑蛋白水解物。所述的变性蛋白粉的总含氮量为120mg/g以上；它是在新鲜的猪脑中加入溶菌酶，经过匀浆、加热、丙酮脱脂得到；然后以此蛋白粉为原料制备脑蛋白水解物。所得产物中各氨基酸含量符合脑蛋白水解物注射剂国家标准，分子量小于10000Da的小分子多肽含量占脑蛋白水解产物的25～35％；其制备方法主要包括前处理、匀浆、丙酮脱脂、双酶水解、离心、柱层析精制、超滤处理后得到脑蛋白水解物。本发明专利技术第一次公开了控制蛋白粉的总氮量指标和小分子多肽的含量的关键技术点，所得的脑蛋白水解物是真正的从猪脑中提取的生物活性物质，不人工添加有效成分，保证了药物的疗效和安全性；同时，经过动物药效实验证明，本发明专利技术脑蛋白水解物疗效优于现有产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生化药品制备
，涉及一种活性脑多肽类物质的制备方法以及采用该方法制备获得的活性脑多肽类产品，更具体地说是一种变性蛋白粉及采用此蛋白粉制备的脑蛋白水解物。
技术介绍
脑蛋白水解物类药物是近年应用最多的生化药物之一。在国内外相关研究领域及市场上占有重要地位。脑蛋白水解物作为健康、新鲜动物大脑组织经多酶酶解提取的一种活性脑多肽类物质，含有多种人脑必须氨基酸及脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等重要元素，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。它可以通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸环化酶催化其他激素系统，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。目前，临床上主要·采用脑蛋白水解物制成各种剂型，用于治疗痴呆和脑功能障碍、脑发育不全、脑萎缩、神经衰弱、脑外伤综合症、中枢神经系统感染、脑膜炎、老年性痴呆、抑郁症、精神病或脑血管代谢失调等多种疾病，同时能有效增强学习记忆力和机体应激能力，疗效显著且安全无毒副作用。因此，进一步开发和研究脑蛋白水解物类药物，对治病救人和改善患者的生存质量具有重要意义。脑蛋白水解物的以上显著疗效，除了其中含有的16种氨基酸以外，其他的组分，尤其是制备过程中蛋白质未完全水解得到的小分子多肽，同样发挥重要的药理作用，现在众多的研究表明，动物脑蛋白水解物类药物可显著增强大鼠对缺氧的耐受能力，而同质的多种氨基酸的混合物则无此作用；实验证明脑蛋白水解物对神经细胞作用与神经生长因子(NGF)相似，但不同的是NGF为巨分子肽，而脑蛋白水解物是小分子多肽，相比之下，后者能通过血脑屏障，更好的发挥治疗作用，也就是说，小分子多肽的疗效是氨基酸不可替代的，它们共同保证了脑蛋白水解物的临床疗效。因此脑蛋白水解物的具体组成成分极大影响它的疗效，控制脑蛋白水解物的质量是保证该产品临床使用安全有效的基础。脑蛋白水解物质量控制方法主要是测定药品中小分子多肽(分子量小于IOOOODa)和多种氨基酸的含量(其注射剂的国家标准为Ws1-(X-Ois)-ZOOlzh生产出的产品既需要控制水解后16种氨基酸含量，还需要控制不完全水解产物小分子多肽的含量，以到达合理的含量和配比，从而保证药物的疗效和安全性。产品之所以规定了 16种氨基酸的含量范围，完全是基于开发这种药物时进行的大量临床试验，证明这种含量和相互配比是科学合理，能够起到最好的治疗效果，同时，临床使用基本没有不良反应。所以，一旦产品中这些有效成分含量不符，比例不符，都会影响药物的治疗效果和安全性。由于脑蛋白水解物产物是个多组分的生化药物，其生产工艺十分复杂，不同工艺生产的脑蛋白水解物的最终组成各不相同，例如猪脑水解所用的蛋白酶种类、酶量及水解温度、时间等都对脑蛋白的水解程度有很大影响，从而影响终产品的组成成分。由于技术门槛的原因，即使是已经批准生产的许多厂家仍然不能生产出合格产品，许多生产者不得不放弃生产。有的企业因为自身技术不成熟，产品达不到注射剂的国家标准，但出于利益驱使，为了得到检验合格产品，就直接向产品中添加相应的氨基酸，调配含量至符合规定，这种人工添加有效成分做法本身违反药品生产法律规定(GMP规定)，更严重的后果是没有经过真正的提取生产步骤，得到的脑蛋白水解物有效成分小分子多肽将减少甚至丧失，进一步导致药品疗效的下降，不但起不到治疗作用，甚至耽误病人及时治疗，导致更严重的临床后果。为此，2008年12月15日国家发文国食药监办 734号“关于加强脑蛋白水解物注射液监督检查的通知”文件特别提出了这个问题，同时也停止了国内所有脑蛋白水解物注射液一百多个批准文号的生产，至今未恢复生产。近年来国内外可查到脑蛋白水解物相关报道有很多，在国内外相关报道中有关生产工艺的具体内容却较少。现行的制备工艺还不十分完善，无法得到符合注射剂国家标准的产品。许多专利描述的工艺得到的脑蛋白产品本身也都不能达到注射剂的国家标准，例如专利94104516. I ；200910071802. O ；200410073403. 5，另外一些专利甚至直接注明提取后的脑蛋白水解产物还需额外添加氨基酸成分，才能达到注射剂的国家标准，例如专利200710055421. 4 ；200610065169. O ；200410022091. 5 等等，这几个专利的特点都是前处理、 匀浆、脱脂(丙酮、乙醚、正丁醇)、单酶或双酶水解、离心、超滤、柱层析精制、灭菌得到；其存在的主要问题是根据这些工艺得到的脑蛋白水解物并不符合脑蛋白水解物注射剂国家标准中对氨基酸的含量要求。由于脑蛋白水解物中小分子多肽的含量是与氨基酸含量有关联的，在总氮量和氨基酸含量一定的情况下，小分子肽的含量也是确定的。人工添加氨基酸后更是无法确定活性成分小分子多肽的含量。其结果会导致对产品中小分子多肽这种有效成分完全失控。从脑蛋白水解物制备工艺上看现有报道的方法都有胶匀浆、酶水解的步骤，有的还加上层析精制的工艺步骤，但采用的工艺条件均各不相同，因此导致得到的脑蛋白水解物产品组分各不相同，国内报道的产品也没有对其中的小分子多肽含量进行明确。国外同类产品奥地利依比威大药厂是最早开发本产品的厂家，其产品名为施普善，但至今无相关工艺报道。综上所述，从已公开的脑蛋白水解物生产工艺的专利中可看出，该产品的生产技术难度极大，目前脑蛋白水解物存在的关键问题是如何能保证所制备的脑蛋白水解物氨基酸含量在脑蛋白水解物注射剂国家标准规定范围内，同时小分子多肽的含量在氨基酸含量合格的如提下尽可能的闻，以确保广品的安全性及疗效，甚至提闻其疗效。目前要解决上述的问题，关键在于通过控制制备过程中变性蛋白总氮含量(120mg/g以上)，以及探索合适的制备工艺和条件，从而得到氨基酸含量符合注射剂的国家标准、多肽含量高的脑蛋白水解物，而这方面的相关文献尚未见报道。本专利技术第一次提出了控制蛋白粉的总氮量指标和分子量小于IOOOODa小分子多肽含量的关键技术指标。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供变性蛋白粉及采用此蛋白粉制备脑蛋白水解物。为此本专利技术的一个目的在于公开了一种采用特定的条件得到的变性蛋白粉。本专利技术的另一个目的在于公开了一种变性蛋白粉的制备方法。本专利技术的再一个目的在于公开了变性蛋白粉在制备脑蛋白水解物药物中的用途。本专利技术还一个目的在于公开了一种采用变性蛋白粉制备的脑蛋白水解物。本专利技术还一个目的在于公开了一种采用变性蛋白粉制备脑蛋白水解物的方法。本专利技术还一个目的在于公开了脑蛋白水解物在制备治疗痴呆和脑功能障碍药物中的用途。本专利技术制备的脑蛋白水解物能达到氨基酸含量符合注射剂的国家标准，且小分子多肽含量高达25-35%。本专利技术的脑蛋白水解物是用一种特定的中间体变性蛋白粉获得的。本专利技术原创性地通过用溶菌酶在特定条件下处理猪脑，获得了一种总含氮量高于120mg/g的变性蛋白 粉，然后用该蛋白粉作为中间体，在特定条件下进行处理，从而最终获得了各氨基酸含量符合国家注射剂标准，小分子多肽含量高的脑蛋白水解物。本专利技术的一个实施方案涉及变性蛋白粉，该变性蛋白粉的总含氮量为120mg/g以上；它是通过在新鲜的猪脑中加入本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种变性蛋白粉，其特征在于该变性蛋白粉的总含氮量为120mg/g以上；它是通过在新鲜的猪脑中加入溶菌酶，经过匀浆、加热脱脂、丙酮脱脂得到。2.权利要求I所述变性蛋白粉，其总含氮量为120-140mg/g。3.权利要求I所述变性蛋白粉，其按照如下步骤制备 (1)制备初混物采用新鲜的猪脑组织适量，用水清洗干净去血水，每kg脑组织加入O. I I. Og溶菌酶一起混合搅拌、胶体磨或匀浆机匀浆，经过4 6次匀浆，得到初混物； (2)脱脂将初混物，加热煮沸O.5 lh，冷却至常温，然后加入10 20倍(重量)丙酮，搅拌O. 5 Ih ;过滤，常温干燥，得到总含氮量为120mg/g以上的变性蛋白粉。4.一种制备变性蛋白粉的方法，其特征在于按如下的步骤进行 (1)制备初混物采用新鲜的猪脑组织适量，用水清洗干净去血水，每kg脑组织加入O. I I. Og溶菌酶一起混合搅拌、胶体磨或匀浆机匀浆，经过4 6次匀浆，得到初混物； (2)加热脱脂将初混物，加热煮沸O.5 lh，冷却至常温，然后加入10 20倍(重量)丙酮，搅拌O. 5 Ih ;过滤，常温干燥，得到总含氮量为120mg/g以上的变性蛋白粉。5.权利要求1-3任一项所述变性蛋白粉在制备脑蛋白水解物中的用途。6.一种采用权利要求1-3任一项所述变性蛋白粉制备的脑蛋白水解物，其特征在于脑蛋白水解物中各氨基酸含量如下门冬氨酸2. 4-3. 6mg/ml，丝氨酸O. 21-0. 39mg/ml，谷氨酸 3. 2-4. 8mg/ml，甘氨酸 I. 2-1. 8mg/ml,组氨酸 I. 04-1. 56mg/ml,精氨酸 O. 3-1. lmg/ml,苏氨酸 O. 21-0. 39mg/ml,丙氨酸 2. 4-3. 6mg/ml,脯氨酸 I. 6-2. 4mg/ml,缴氨酸 I. 6-2. 4mg/ml,蛋氨酸 O. 35-0. 65mg/ml,赖氨酸 4. 8-7. 2mg/ml,异亮氨酸 I. 6-2. 4mg/ml,亮氨酸4....
【专利技术属性】
技术研发人员：刘衡，徐顺意，任保华，陈雪艳，汤兰芝，张敏，夏彤，
申请(专利权)人：河北智同医药控股集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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