本发明专利技术涉及一种均相测定的组成步骤：1)至少与2个分子接触，每个分子都由一个识别组件和一个样本的部分信息组成，其中的识别组件和样本的接触会使得这个部分信息形成一个连续的信息；2)将连续消息放大形成一个直接或间接地产生催化活性的催化实体；3)提供一个允许在至少两个分子和样本之间，通过催化活性检测识别事件的基质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术是关于一种通过催化活性的产生来探查一种已知事件的测定。
技术介绍
分析测定，例如，免疫测定作为探查和测定生物学及其他样本浓度的方法，在本专业领域众所周知。免疫测定方法利用抗体或其他识别分子与其抗原的特异性结合来探测一种分析物，其中分析物可以包括或抗体或抗原或两者都包括。然后可以通过对抗原或抗体中一种或两者的存在进行测定来量化确定分析物的浓度。通过这种方式使探查测定浓度极低的分析物成为可能。 免疫测定可以采用不同的方式和形式来进行。在应用免疫测定的所有不同形式之中，最广泛使用的可能是使用固定的抗体和/或抗原、应用固相分离的那些免疫测定。在专业领域中这种技术被称为一种异相免疫测定。只有在确认检测材料中含有兴趣分析物时， 才需要分离固定的抗体和/或抗原，来有效地测量，其中固定相作为一个物理耦合位点允许通过洗涤步骤来去除非靶材料。这种洗涤过程将组成这种样本的混合物中的分析物从其它成分中分离出来。为了在免疫测定中探查和测定分析物的浓度，需要一个检测系统。例如，可以使用一种酶学分析，其中通过酶学作用将不可探测的绑定分析物变成一种可探测的量化检测信号。探测抗体和/或抗原的其它方法可以通过使用可检测的标签标记抗体或/或抗原而实现，这样的标签包括胶体金标记、放射性同位素标记、磁标记和荧光标记。异相免疫测定已经是，并将继续是，探查和测定分析物的极其重要的方法。这种测定每年完成的相当数量反映了这一点。但是，虽然作为一种常规的检测方法，这种方法是已经得到了确认并且确实可靠，它们也有缺陷。例如，使用固相分离技术需要多个步骤和物理操作。许多这种过程的复杂性可以通过应用计算机驱动的仪器来降低，但某些问题仍然存在。随着操作过程复杂性的增加，可靠性等问题也将成为一种挑战。具体地说，不精确的水平对于高灵敏度检测将变得十分显著，其中现有流程的多级属性使精密性受损，包括液体的补充和去除以及多重洗涤步骤。在这些多阶段过程中的错误积累导致了这种不精确性。 更进一步来说，这些过程的这种复杂性和劣势的后果是增加了需要完成该测试的仪器和软件的复杂性，导致了成本的增加、可靠性的下降，并增加了在这样一个系统中试图添加新检测的开发时间和困难度。用于克服一些这样与异相免疫检测有关的问题的一种替代方法，是所谓的均相免疫测定。这种均相免疫测定可以在水溶液中使用一种或多种添加试剂却不需要分离和洗涤步骤来完成。这些均质免疫测定已经被认为得益于较高的测定精度和灵敏度，并在分析物检测领域做出极其宝贵的贡献。然而，为了检测兴趣分析物，均质免疫检测需要抗体与其特定抗原结合事件的自我汇报，称为生物分子识别事件。这种自我汇报或结合事情的转导可以通过不同的方法来实现，例如，酶倍增免疫技术工艺(EMIT)依赖于分析物介导的溶液酶活性的抑制，而克隆酶供体免疫测定(CEDIA)通过从非活性组件中重建一个工作酶而形成酶活性来实现混合物样本中分析物的检测。在这方面有用的其它更近期的技术包括福斯特共振能转移(FRET) 和其它的荧光扩增技术，如时间分辨荧光免疫测定。此外，还有使用具非常灵敏潜力的化学或生物发光报告的成功方法。另一项在均相免疫测定中用于生物识别事件自我汇报的技术是邻位连接技术 (PLA)系统。在这个系统中，对同一样品的不同表位具有亲和力的至少两个抗体被单链DNA 的特定序列所标记。在与兴趣分析物结合后，两个抗体被聚集互相靠近。所吸附DNA序列的近端属性允许互补的一个或多个重叠的单链DNA探针结合。在添加的特定酶的帮助下，这种探针的末端可以接合或捆扎形成一个连续的环形DNA单链。通过对该序列的仔细设计， 并添加聚合酶试剂，可以按照等温滚环扩增的过程出现DNA序列的扩增。这一操作的结果是在每个组合的分析物-抗体复合物表面发出一个不断增长的重复序列DNA链。将荧光标记加入不断增长的DNA聚合链可以对被结合引物总量进行定量测定，也因此测定了样本中分析物的含量。均相免疫测定可能有潜力用于临床免疫分析。均相免疫测定相对于异相免疫测定有其优势，但也有局限性。均相免疫测定的一个局限是得到首次结果的需要时间。对于一个可靠的测试来说，通常需要显著的分析时间来产生足够的可探测分析物，然而为达到在现代临床实验室的最佳应用，理想的检测时间需要在可 行的范围内尽可能地短。这种方法的更进一步，并且可能是更重要的局限性与临床实验室常用的仪器不能够轻易地测量荧光信号有关。在诊断的应用中得到了验证的现有临床实验仪器，往往要么可用于异质免疫测定，要么以临床化学分析仪的形式可用于光度法检测。这些分析仪的吸收光谱测量能力极为有限，并通常不适用于当前均相免疫测定所需要的汇报系统。因此需要提供一个检测分析物的方法，它具有均相免疫测定技术的优点和光度法检测的方便及简易性，并允许一个适当短暂的操作时间。
技术实现思路
本专利技术提供了一种均相免疫测定方法，包括a)至少与2个分子接触，每个分子都由一个识别组件和一个样本的部分信息组成，其中的识别组件和样本接触会使得这个部分信息形成一个连续的信息；b)将连续消息放大形成一个催化实体，再直接或间接地产生催化活性；c)提供一个允许在至少两个分子和样本之间，通过催化活性检测识别事件的基质。在催化实体/催化活性与识别事件之间存在的相关性形成了一个精确而灵敏的检测分析。本专利技术也使依赖于核酸序列的转录并随之通过体外蛋白质的合成而翻译成工作酶的系统的有关缺点得到解决。在那个系统中试剂的数量、时间安排和潜在试剂的不兼容性方面的可能复杂性将是不切合实际应用的。此外，该测定可以产生一种能被现在的诊所里随手可得的化学分析仪器测定的彩色产物。该测定的均质属性为其提供了较快速的分析过程，因为它不需要去除或分离任何的基质。进一步地，与依赖核苷酸扩增和荧光探针来生成信号(这可能需要长达2分钟的 20-40个周期，比如在实时的聚合酶链式反应(PLA)中，为达到一个预定的背景信号。)的 PLA和其他的方法不同，这种分析有一个额外的酶学步骤，由此认为可以使灵敏性增加若干倍，并因此需要更少的扩增周期就可以达到背景信号。该测定最好只包括2个分子，每个都包括一个识别组件和一个部分信息。这样进行检测，所需要的材料可以降至最低。很明显这种分子的适当数量可能将依赖于被检测样本的属性和被检测的对象。最好的识别组件选自蛋白质、抗体、抗体片段、分子印迹聚合物、互补性决定区、寡肽、低聚核苷酸、小分子有机化学物质、氨基酸肽、多肽、多核苷酸或适体。将很明显的是，在每个分子上的识别组件可以相同也可以不同。例如，它们可以是针对同一种蛋白质的相同抗体，比如多聚体复合物或分子表面组成的一部分；或者，如果识别组件不相同，它们可以是比如兴趣靶抗体的一个抗原，和针对兴趣靶抗体的抗体。由部分信息通过链接或某种方式的结合而产生连续的信息是可以理解的。部分信息的结合/链接可以直接或者也可能需要其他步骤来干预一个或多个信息分子也将是可以领会的。通过这种方式，由包含识别组件的分子的部分信息所促成的连续信息可以包括一个或多个链接的部分信息。因此，凭借增加一个或多个链接的部分信息可以选择性地形成连续信息。 通过核酸(例如DNA或RNA)可以方便地组成或形成部分信息，它们可以是相同或者不同的。部分信息可以很方便地由单链DNA形成，但也可以一种类似物如PNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.26 GB 0918712.11.一种均相測定，包括 a)至少与2个分子接触，每个分子由一个识别组件和一个样子的部分信息组成，其中识别组件和样本接触会使得这个部分信息形成一个连续的信息； b)将连续消息扩增形成ー个直接或间接地产生催化活性的催化实体； c)提供一种允许在至少两个分子和样本之间，通过催化活性检测识别事件的基质。2.根据权利要求I的測定，其中，每个识别组件由任何ー个抗体、抗体片段、蛋白质、分子印迹聚合物、互补决定区、寡肽、寡核苷酸、小分子有机化学物、肽、多肽、多核苷酸或适体组3.ー种根据权利要求I或2的測定，其中，连续信息的形成是依靠添加一种或多种连接的部分信息。4.一种依照之前所有权利要求的測定，其中，部分信息由单链DNA或一个其类似物组成或构成。5.一种依照之前所有权利要求的測定，其中，连续信息通过等温扩增方式扩增。6.ー种根据权利要求5的測定，其中，等温扩增采用滚环扩增方法。7.一种依照之前所有权利要求，在连续信息的扩增之前还包括一个连接步骤的測定。8.一种依照之前所有权利要求的測定，其中催化实体对基质的直接或间接作用产生了一种可见的检测产物。9.ー种根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·史密斯，P·戴安娜，L·G·I·赫金，
申请(专利权)人：安迅时特诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：
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