病毒整合酶抑制剂和使用方法技术

本文描述抑制HIV整合酶活性的组合物和方法。还描述鉴别可抑制HIV整合酶以用于治疗或预防HIV的药剂的方法。还公开鉴别可抑制对整合酶抑制剂具有抗性的HIV病毒突变体的药剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
根据公开的统计数字，估计全球有超过4千万人被人类免疫缺乏病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)/ 获得性免疫缺乏综合症(Acquired ImmunodeficiencySyndrome, AIDS)感染并且约2千2百万人已死于AIDS (CDC，2000国际统计数字)。为了对抗此流行病，深入研究已集中于抑制此病毒的分子机制或治疗与其相关的症状。尽管AZT为首个针对此疾病开具的先锋药物，但近年来诸如蛋白酶抑制剂、其它核苷类似物转录酶抑制剂或非核苷逆转录酶抑制剂等众多药物已变得可用。由于其效用提高，所以此等药物标志着治疗HIV和AIDS方面的巨大进步。尽管此等药物已显示有希望控制病毒感染，但受感染细胞的储液囊会保留并且有可能产生抗性变异体。举例来说，许多这些药物不能有效跨越血液/脑屏障，这允许在脑中的整个下列细胞中进行不经检查的复制和传导毛细血管内皮细胞(capillary endothelial cell)、星形胶质细胞(astrocyte)、巨曬细胞(macrophage)(小胶质细胞(microglia))、少突胶质细胞(oligodendrocyte)、脉 络丛(choroid plexus)、神经节细胞(ganglion cell)、神经母细胞瘤细胞(neuroblastomacell)、胶质瘤细胞(glioma cell)和神经元(neuron)。CNS感染的后果包括神经和精神并发症，诸如痴呆、认知病症、重性抑郁症、精神病和多发性神经病。除以上提及的药物之外，许多研究已集中于抑制HIV整合酶(IN)，一种促进HIVDNA整合入基因组中的酶。然而，因为活体外反应发生在聚集而非可溶性系统中，所以已证明对IN进行研究相当成问题。推论在细胞内，IN执行(I)HIV DNA的3'端加工步骤，其中2个核苷酸从病毒DNA的3'端裂解和(2)链转移反应，其中病毒DNA的3'端连接于目标DNA。为了适当地起作用，认为IN必须与病毒DNA、宿主DNA、和其它病毒和宿主蛋白质因子一起装配成复合物。迄今为止，已发现IN的众多链转移抑制剂，其包括雷特格韦(raltegravir)(也称为艾生特(Isentress)或MK 0518) ;二酮类似物，诸如S-1360、L-870、810 和 GS-9137 ;和萘啶酮(naphthyridione) GSK 36473(菲利普科特(PhilippeCotelle),关于抗感染药物发现的新近专利(Recent Patents on Anti-Infective DrugDiscovery), I : 1_15 (2006))。然而，归因于IN突变，HIV可能变得对这些药物具有抗性，从而导致高失败率和无效治疗。尽管已鉴别出治疗HIV和AIDS的药物，但对会抑制HIV整合酶的新颖药物和允许快速筛选会相互作用并抑制或降低IN活性的肽或小分子的药物筛选方法存有需要。
技术实现思路
根据如本文中体现并广泛描述的本专利技术的目的，本专利技术涉及抑制HIV整合酶活性的组合物和方法。还描述鉴别可抑制HIV整合酶以用于治疗或预防HIV的药剂的方法。公开的组合物和方法的其它优点将部分阐述于随后描述中，并部分地将根据描述而了解，或可通过实践公开的组合物和方法来探悉。公开的组合物和方法的优点将借助于在随附权利要求书中特定指出的要素及组合来实现并获得。应了解，上文的概括性描述和下文的详细描述均为示范性和说明性的，并且对如所主张的本专利技术不具有限制性。附图说明被并入并构成本说明书的一部分的附图说明公开的方法及组合物的若干实施例并且连同描述一起用于说明公开的方法和组合物的原理。图I显示酵母双杂交体筛选，其中在腺嘌呤板上的生长表明可选择报告基因(reporter)的活化。图2显示环状目标DNA的半位点整合与协同整合两者的模型。图3显示在不脱去蛋白质的情况下对协同DNA整合的分析。图4显示在脱去蛋白质的情况下对协同DNA整合的分析。 图5显示本文所述的肽在添加DNA之前抑制IN。图6显示本文所述的肽可结合缺乏N端的IN并且也可结合缺乏C端的IN。具体实施例方式公开的方法和组合物可通过参考对特定实施例和其中所包括实例的以下详细描述并参考图式和其先前及以下描述而得以更容易地了解。在公开并描述本专利技术化合物、组合物和/或方法之前，应了解，下述方面不限于特定化合物、合成法或用途，因为它们当然可能变化。也应了解，本文中使用的术语仅出于描述特定方面的目的并不希望具有限制性。公开的物质、组合物和组分可用于公开的组合物和方法、可连同公开的组合物和方法使用、可用于制备公开的组合物和方法或作为公开的组合物和方法的产品。本文中公开这些和其它物质，并且应了解，当公开这些物质的组合、子组、相互作用、群组等时，尽管可能未明确公开这些化合物的每一个各种个别和集合组合与排列的特定内容，但各自皆明确地涵盖并描述于本文中。举例来说，如果公开并论述一种肽并论述可对包括所述肽的许多分子做出的许多修饰，则除非相反地加以明确指示，否则明确涵盖肽和可能修饰的每一个组合与排列。因此，如果公开一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F，并公开组合分子A-D的一实例，则即使未个别地叙述每一个，每一个也个别地及共同地被涵盖。因此，在本实例中，组合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F的每一个皆明确地被涵盖并且应视为根据A、B和C ;D、E和F ;和例示性组合A-D的公开内容而公开。同样，这些的任何子组或组合亦明确地被涵盖和公开。因此，举例来说，A-E、B-F和C-E的子群明确地被涵盖并且应视为根据A、B和C ;D、E和F ;和例示性组合A-D的公开内容而公开。这个概念适用于本申请案的所有方面，包括(但不限于)制备和使用公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果有可执行的多种其它步骤，则应了解，这些其它步骤的每一个皆可与公开的方法的任何特定实施例或实施例的组合一起执行，并且每一个所述组合皆明确地被涵盖并应视为被公开。浓度、量和其它数值数据在本文中可以范围格式表述或呈现。应了解，所述范围格式仅为方便和简洁起见而使用并因此应灵活地解释为不仅包括明确叙述为范围的界限的数值，而且也包括涵盖在范围内的所有个别数值或子范围，就如同每一个数值和子范围被明确叙述一样。作为一说明，“约I至5”的数值范围应解释为不仅包括约I至约5的明确叙述值，而且也包括在指示范围内的个别值和子范围。因此，诸如2、3和4的个别值和诸如1-3、2-4和3-5等的子范围以及个别地I、2、3、4和5包括在此数值范围中。相同原则适用于仅叙述I个数值作为最小值或最大值的范围。此外，无论所述范围或特征值的宽度如何，所述解释也应适用。仅使用常规实验，所属领域的技术人员将认识到或能够确定本文所述的组合物和方法的特定实施例的许多等效物。希望所述等效物由随附权利要求书涵盖。应了解，公开的组合物和方法不限于所述特定方法、方案和试剂，因为它们可能变化。也应了解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，并且不希望限制将仅受随附权利要求书限制的本专利技术的范围。如本文所用，多个项目、结构要素、组成要素和/或物质为方便起见可以通用列表呈现。然而，这些列表应解释为似乎列表的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.19 US 61/161,4691.ー种病毒整合酶抑制肽，其包含与SEQ ID NO USEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3、SEQ IDNO 4和其变异体具有至少65%序列同源性的氨基酸序列。2.根据权利要求I 所述的肽，其与 SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3、SEQ IDNO 4和其变异体具有至少90%氨基酸序列同源性。3.根据权利要求2所述的肽，其包含所述氨基酸序列SEQID N0U SEQ IDNO :2、SEQID NO :3、SEQ ID NO 4 和其变异体。4.根据权利要求I和3中任ー权利要求所述的肽，其中氨基酸独立地选自D-氨基酸和L-氨基酸。5.根据权利要求I和3中任ー权利要求所述的肽，其中氨基端、羧基端或所述氨基端与羧基端两者经修饰。6.根据权利要求5所述的肽，其中修饰为こ酰化或酰胺化。7.ー种经分离聚核苷酸，其包含编码与SEQ ID NO USEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3或SEQID NO 4具有至少65%序列同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。8.ー种经分离聚核苷酸，其包含编码与SEQ ID NO USEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3或SEQID NO 4具有至少90%序列同源性的氨基酸序列的核酸序列。9.ー种抑制整合酶活性的方法，其包含使整合酶与根据权利要求I和6中任一权利要求所述的肽接触。10.一种治疗或预防个体HIV的方法，其包含向所述个体投予根据权利要求I和6中任ー权利要求所述的肽。11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述肽包含内化序列。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述个体处于HIV感染的风险中。13.根据权利要求10所述的方法，其中所述个体患有HIV。14.ー种鉴别结合逆转录病毒整合酶的候选药剂的方法，其包含 (a)使逆转录病毒整合酶的至少ー个域与根据权利要求I和6中任ー权利要求所述的肽在允许所述肽与所述整合酶结合的条件下接触； (b)使所述整合酶与候选药剂接触；和 (c)确定所述候选药剂是否替代了所述肽， 其中替代所述肽指示所述候选药剂与所述整合酶结合。15.根据权利要求14所述的方法，其中使用酵母双杂交筛选系统鉴别所述候选药剂，其中酵母中的转录活化指示所述肽正结合所述整合酶。16.根据权利要求14所述的方法，其中使用酵母双杂交筛选法鉴别所述候选药剂，其中报告基因在酵母中表达的变化指示所述候选药剂正破坏所述肽与所述整合酶的结合。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述整合酶的所述至少ー个域包含药物抗性突变。18.根据权利要求14所述的方法，其中使所述肽突变以针对与野生型或药物抗性整合酶的结合进行筛选。19.根据权利要求9、14和18中任ー权利要求所述的方法，其中所述逆转录病毒整合酶选自由以下组成的群组正逆转录病毒亚科(Ort...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·仙德洛，R·佳治，
申请(专利权)人：因特葛莱泰克蛋白质组学有限责任公司，美国卫生和公共服务部，
类型：发明
国别省市：