本发明专利技术涉及一种调控血管内皮细胞中血管细胞粘附分子-1表达的方法。具体地，本发明专利技术提供了通过血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)来调控血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的方法。本发明专利技术还提供了用ANGPTL4蛋白用于制备促进(VCAM-1)表达的促进剂的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤学领域。更具体地，本专利技术涉及一种通过血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)调控血管内皮细胞中血管细胞粘附分子_1表达的方法。
技术介绍
ANGPTL4基因(最初该基因被专利技术人的实验室命名为ppll58)[朱洪新等，中华肿瘤杂志(2002)24(2) =123-125]就是利用此功能筛选技术平台从人胎盘cDNA文库中克隆到的新基因，该基因cDNA全长为1943bp，开放阅读框含1218bp，编码406个氨基酸，预计分子量为45.2kDa。N端有一疏水信号肽和卷曲(Coiled-Coil)结构域，C端有一纤维蛋白原样 (Fibrinogen-like)结构域。并于2000年首先将该基因(原基因名为ppll58)的cDNA序列在GenBank上登录(登录号为AF202636)。现已同Yoon等克隆的PGAR[Mol. Cell. Biol.，Jul 2000 ；20 :5343-5349]和 Kim 等克隆的 HFARP [Biochem. J，2000，346 :603-610]由 HUGO统一正式命名为 ANGPTL4 (angiopoietin-like 4)。ANGPTL4在肿瘤转移中的作用越来越引起人们的关注。目前的研究表明ANGPTL4对肿瘤转移的影响是非常复杂的，在不同的肿瘤中有不同的作用对Lewis肺癌细胞和黑色素瘤细胞B16R)的研究表明ANGPTL4能够通过对血管和肿瘤细胞的双重影响，即改变血管的渗透及肿瘤细胞的运动和侵润能力，来抑制肿瘤细胞的转移。与此相反，在乳腺癌的最新研究表明，TGFP I在乳腺癌中诱导ANGPTL4的上调，乳腺癌细胞分泌的ANGPTL4能够破坏内皮细胞之间的连接，增加肺毛细管的渗透性，促进肿瘤细胞的跨血管内皮细胞的迁移，与TGFP I共同启动了乳腺癌的肺转移。VCAM-I在内皮细胞上表达，通过与整合素a 43 I介导细胞黏附。整合素a 43 I/VCAM-I通路能够介导多种粘附反应，例如介导淋巴瘤细胞粘附到肝窦内皮细胞，在肝转移过程中起到非常重要的作用；整合素a 40 I可以促进肿瘤细胞和HUVEC之间的粘附。然而，迄今为止，对于如何调控血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)的表达或活性，本领域知之甚少。因此，本领域迫切需要开发参与血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)表达或活性调节的物质。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种参与血管细胞粘附分子-I(VCAM-I)表达调节的物质。在本专利技术的第一方面，提供了一种血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)或其激动剂的用途，它们被用于制备促进血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)表达的组合物或促进VCAM-I表达的促进剂。在另一优选例中，所述的ANGPTL4蛋白是人ANGPTL4。在另一优选例中，所述的ANGPTL4蛋白是重组蛋白。在本专利技术的第二方面，提供了一种血管生成素样蛋白4拮抗剂的用途，它被用于制备抑制血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)表达的组合物。 在另一优选例中，所述的ANGPTL4拮抗剂包括针对ANGPTL4的siRNA、反义RNA、抗体、或其组合。在另一优选例中，所述拮抗剂是单克隆抗体。在本专利技术的第三方面，提供了一种体外(非治疗性)促进血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子-I的方法，包括步骤向血管内皮细胞的培养体系中，添加血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)或其激动剂。在另一优选例中，所述的血管内皮细胞是人的血管内皮细胞。 在本专利技术的第四方面，提供了一种体外(非治疗性)抑制血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子-I的方法，包括步骤向血管内皮细胞的培养体系中，添加血管生成素样蛋白4的拮抗剂。在另一优选例中，所述的ANGPTL4拮抗剂包括针对ANGPTL4的siRNA、反义RNA、抗体、或其组合。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图I显示了分泌性ANGPTL4蛋白上调HUVEC细胞中VCAM-I的表达。各图如下a.蛋白印迹检测C0S7-lenti-ANGPTL4和C0S7-lenti-control细胞裂解液中和条件性培养上清中ANGPTL4的表达。b.定量PCR检测CM-ANGPTL4处理HUVEC细胞后VCAM-ImRNA水平表达的变化；c.蛋白印迹检测CM-ANGPTL4处理HUVEC细胞后VCAM-I蛋白水平表达的变化；d.蛋白印迹检测整合素a 43 I在Huh7和SMMC-7721细胞中的表达情况。图2.显示了干扰VCAM-I或整合素P I对过表达ANGPTL4诱导的跨血管内皮细胞迁移的影响。各图如下a. siRNA实验中VCAM-I干扰效率的验证(HUVEC细胞裂解液中VCAM-I蛋白的表达)；b.在 HUVEC 中干扰 VCAM-I 后，SMMC-7 7 2 卜 I en t i-ANGPTL4 和 SMMC-7721-lenti-control跨血管内皮细胞迁移实验代表性图片(标尺为100 y m)(左图)，右图为迁移细胞数统计图；c. siRNA实验中整合素P I (ITGBl)干扰效率的验证(SMMC-7721细胞裂解液中ITGBl蛋白的表达)；d.在 SMMC-7721 中干扰整合素 ^ I (ITGBl)后，SMMC-7721-lenti_ANGPTL4 和SMMC-7721-lenti-control跨血管内皮细胞迁移实验代表性图片(标尺为100 y m)(左图)，右图为迁移细胞数统计图；*代表P<0. 05。图3显示了整合素P I抗体和ANGPTL4抗体抑制分泌性ANGPTL4诱导的跨血管内皮细胞迁移。各图如下a.跨血管内皮细胞迁移实验代表性图(标尺为100 ii m)。含ANGPTL4的条件性培养上清能明显促进SMMC-7721细胞的跨血管内皮细胞迁移，而同时加入整合素P I抗体处理，则能明显抑制SMMC-7721细胞的跨血管内皮细胞迁移，与同时加入ANGPTL4抗体有相同的影响。b.跨血管内皮细胞迁移的SMMC-7721细胞数统计图，*代表P < 0. 05。注在各图中，3-actin表示￠-肌动蛋白。具体实施例方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，分泌性ANGPTL4能够促进血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)在血管内皮细胞中的表达。在此基础上完成了本专利技术。ANGPTL4蛋白和基因 在本专利技术中，术语“本专利技术蛋白”、“ ANGPTL4蛋白”、“ ANGPTL4多肽”或“血管生成素样蛋白ANGPTL4”可互换使用，都指具有人血管生成素样蛋白ANGPTL4氨基酸序列AAG22490(gi =10732648)的蛋白或多肽。它们包括含有或不含起始甲硫氨酸的血管生成素样蛋白ANGPTL4。此外，该术语还包括全长的ANGPTL4及其片段。本专利技术所指的ANGPTL4蛋白包括其完整的氨基酸序列、其分泌蛋白、其突变体以及其功能上活性的片段。在本专利技术中，术语“ANGPTL4基因”、“ANGPTL4多核苷酸”或“血管生成素样蛋白基因ANGPTL4”可互换使用，都指具有人ANGPTL4核苷酸序列(AF20本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)或其激动剂的用途，其特征在于，用于制备促进血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)表达的组合物或促进VCAM-I表达的促进剂。2.如权利要求I所述的用途，其特征在于，所述的ANGPTL4蛋白是人ANGPTL4。3.如权利要求I所述的用途，其特征在于，所述的ANGPTL4蛋白是重组蛋白。4.血管生成素样蛋白4拮抗剂的用途，其特征在于，用于制备抑制血管细胞粘附分子-I (VCAM-I)表达的组合物。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的ANGPTL4拮抗剂包括针对ANGPTL4的siRNA、反义RNA、抗体、或其组合。6.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：李锦军，李红，葛超，顾健人，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：
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