本发明专利技术公开了一株分离自口腔的短乳杆菌（Lactobacillus?brevis）BBE-Y52，保藏编号为CCTCC?M?2012162。这株短乳杆菌能够产生细菌素进而抑制变异链球菌及其他口腔致病微生物的生长；能够产生胞外多糖，为乳酸菌在口腔环境中与其他微生物共聚集及生物膜的形成提供了必要的条件；还能够产过氧化氢，不仅具有杀菌的作用，也可以起到漂白牙齿的作用。因此，这株短乳杆菌在代替抗生素解决口腔常见健康问题方面有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株短乳杆菌及其应用，特别是一株分离自口腔的具有益生特性的短乳杆菌，能产生保外多糖、过氧化氢及抑制口腔致病菌生长的短乳杆菌。
技术介绍
联合国粮农组织和世界卫生组织将益生菌定义为ー种具有生物活性的微生物，当给予人体适当剂量后对人体的健康有益。益生菌的种类繁多，最常见的两大类益生菌分别是乳酸杆菌类和双歧杆菌类。 随着抗生素过度使用和细菌耐药问题的日益加剧，益生菌在防治和缓解感染、炎症及过敏性疾病方面的优势越来越明显。大量的研究证实益生菌能用于治疗ロ咽感染、消化道疾病、泌尿生殖系统感染等疾病。近几年来益生菌疗法也逐渐应用到ロ腔医学领域。临床上常见的口腔疾病如龋齿、牙周炎和口臭等，都与某些致病菌或对口腔健康不利的微生物在口腔中的过量生长有夫。益生菌疗法不仅可以有效抑制致病菌的生长，同时还能帮助維持正常的口腔微生态菌群，保障口腔健康。有研究表明长期摄入添加鼠李糖乳杆菌牛奶的儿童，龋病发生率较低，这是由于具有益生性的鼠李糖乳杆菌能够抑制龋齿致病菌变异链球菌的生长，減少口腔环境中变异链球菌数量，降低龋病发生率。也有研究采用益生乳杆菌制备治疗牙龈出血及牙龈炎等药物来解决口腔问题。口腔环境中定植有各种各样的微生物，这些微生物通过共生竞争拮抗等作用，构成了复杂的生态系统。口腔益生菌在这个生态系统中发挥作用的前提之一是能够与口腔中其他微生物共聚集及形成生物膜。此外，通过分泌过氧化氢、细菌素、有机酸等多种抗菌物质来抑制病原菌的生长也是微生物作为口腔益生菌的筛选原则。
技术实现思路
本专利技术提供了一株短乳杆菌(Lactobacillusbrevis) BBE-Y52,于 2012 年 5 月 9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No M 2012162。本专利技术提供了一株口腔短乳杆菌，具有产胞外多糖、产过氧化氢和抑制变异链球菌及空肠弯曲杆菌生长的益生特性。所述短乳杆菌分离自口腔健康志愿者的牙菌斑。其培养和保藏条件如下从生长良好的平板上挑取单菌落接入MRS培养基中，在37° C(5%C02)培养24h后保藏于-80° C冰箱。所述短乳杆菌产胞外多糖的培养条件是将其接种于含有10% (w/v)蔗糖的MRS培养基中，在30° C静置培养48h。短乳杆菌所产游离的胞外多糖使用苯酚-硫酸法測定。短乳杆菌产过氧化氢的培养条件是将其接种到MRS培养基中，37° C 5% CO2培养24h，用过氧化物试纸条检测发酵液中过氧化氢的含量。研究短乳杆菌抑制变异链球菌和空肠弯曲杆菌的生长采用牛津杯法。本专利技术提供的短乳杆菌(Lactobacillus brevisBBE_Y52),能抑制变异链球菌及其他口腔微生物的生长；能产胞外多糖，为乳酸菌在口腔环境中与其他微生物共聚集及生物膜的形成提供了必要的条件；还能产过氧化氢，具有杀菌美白牙齿的作用。短乳杆菌可以用来解决常见的口腔问题，保障口腔健康。生物材料本专利技术获得一株短乳杆菌(Lactobacillus brevis)BBE_Y52，于2012年5月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No M 2012162。 具体实施方式 实施例I : ロ腔乳杆菌的分离将唾液和牙菌斑样品稀释涂布在MRS固体培养基上(pH 5. 5)，在37。C (5%C02)培养24h。挑选革兰氏阳性的杆菌进行划线分离和保藏。实施例2 口腔益生乳杆菌的筛选及其益生特性对口腔益生乳杆菌的筛选及特性考察包括产胞外多糖、产过氧化氢和抑制三株典型的口腔微生物的生长。口腔乳杆菌产胞外多糖初步鉴定采用菌落拉丝的方法。将革兰氏阳性杆菌点种到添加10% (w/v)蔗糖的MRS固体培养基上，30° C培养48h，挑选菌落有拉丝的革兰氏阳性杆菌并测定其产胞外多糖的含量。将挑出的短乳杆菌接种于含有10% (w/v)蔗糖的MRS液体培养基中，30° C培养48h，取IOml发酵液，加入2ml 80% (w/v)三氯こ酸，冰浴搅拌处理30min，4° C 15000rpm离心20min除去菌体和蛋白，向上清液中加入3倍体积冰冻无水こ醇，4° C冷藏过夜，多糖呈絮状沉淀析出。于4° C 15000rpm离心20min，用IOmL蒸馏水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法对发酵液中游离胞外多糖含量进行測定。先制作标准曲线，准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg，定容到500mL，分别吸取O. 4,0. 6,0. 8、I. O、I. 2、I. 4、I. 6、I. 8mL，各以水补至2. OmL，然后加入6%苯酚I. OmL及浓硫酸5. OmL，静止lOmin，摇匀，室温放置20min后于490nm测光密度，以2. OmL水按同样显色操作作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。再对样品中游离胞外多糖进行測定。吸取样品液I.OmL，按上述步骤操作，测光密度，以标准曲线计算多糖含量。口腔乳杆菌产过氧化氢的测定是用过氧化物试纸条Peroxide 25 (德国MN公司，产品目录号为91319)检测革兰氏阳性杆菌发酵液中过氧化氢的含量。挑选产过氧化氢的菌株。口腔乳杆菌对变异链球菌和空肠弯曲杆菌的抑制作用采用牛津杯法。实验使用双层培养基，底层为I. 5%琼脂培养基。上层培养基为0. 75%的BHI(Brain Heart Infusion,脑心浸膏培养基)的琼脂培养基。将温度为42° C左右的上层培养基，与上述指示菌过夜培养物混合(终浓度为107CFU/mL)，倾倒于底层培养基上。凝固后向牛津杯形成的井中加入100 μ L的乳杆菌发酵上清液，培养过夜观察抑菌作用，挑选对三株指示菌均有抑制作用的乳杆菌。根据三方面的益生性筛选到一株短乳杆菌(Lactobacillus brevis) BBE-Y52,于2012年5月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No M 2012162。短乳杆菌BBE-Y52能够产生胞外多糖，发酵液中游离胞外多糖含量为106. 63mg/L，有利干与其他口腔微生物实现共聚集及形成生物膜。其在发酵过程中产过氧化氢，含量在2-5mg/L之间，具有杀菌美白牙齿的作用。此外，筛选获得的短乳杆菌能抑制变异链球菌和空肠弯曲杆菌的生长。实施例3 口腔保健产品开发开发含有所述菌种的牙膏、漱ロ药和液体牙齿清洁剂等保健品，保证在添加短乳杆菌后不会给产品带来感官上不利影响。 可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本专利技术所附的权利要求的保护范围。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株短乳杆菌(Lactobacillus brevis)BBE_Y52，于2012年5月9日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CCTCC No M 2012162。2.权利要求I所述的短乳杆菌应用于维...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，杨娟，方芳，堵国成，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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