一种苦马豆素的酶法提取工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种苦马豆素的酶法提取工艺，包括以下步骤：（1）将茎直黄芪晾干，粉碎后过40-80目筛；（2）以pH为4.5的水作为溶剂，在水中加入纤维素酶和步骤（1）制备的茎直黄芪；纤维素酶加入量为茎直黄芪重量的1%-5%，茎直黄芪与溶剂的重量体积比为1:10-50g/ml；（3）50℃下反应1-5h，得到苦马豆素的提取液。本发明专利技术提出的苦马豆素的酶法提取工艺具有提取率高、能耗低、提取时间短的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种植物提取物，具体地，涉及ー种苦马豆素的酶法提取エ艺。
技术介绍
莖直黄苗(Astragalu s strictus )为豆科黄苗属多年生植物。在西藏各地均有分布，毎年在其密集生长的牧区都有大批的家畜中毒死亡，是我国西藏牧区危害最严重的毒草之一。茎直黄芪中的主要有毒成分为苦马豆素，是ー种大极性的吲哚里西丁类生物碱，水溶性极好，经动物肠道吸收后，在溶酶体酸性环境下解离，因其阳离子结构与α -甘露糖阳离子结构近似，使得竞争结合α-甘露糖甘酶，不仅抑制了 α-甘露糖甘酶酶活性，同时造成溶酶体内甘露糖不能代谢而蓄积，从而导致细胞特别是神经细胞的空泡性，从而引起动物中毒。苦马豆素同时还具有抗肿瘤活性，能特异性地抑制高尔基氏体α -甘露糖甘酶II的活性，同时抑制了肿瘤细胞表面糖蛋白的表达，从而抑制肿瘤的生长和转移，并能缓解化疗和放疗中产生的骨髓抑制作用。国家知识产权局于2007. 10. 10公开了ー项申请号为200710017844. 7，名称为“ー种从疯草中提取苦马豆素的新方法”的专利技术专利，其提供了一种从疯草中提取苦马豆素的新方法，将疯草粉与こ醇按I : 6 I :10的比例热回流提取3次，每次4 h，过滤，回收こ醇，残留物用3 5倍こ醇反复溶解回收こ醇，得到浸膏加入浓度为2%醋酸至pH为4. 5 6之间，再加入浸膏重量50 100倍的氯仿，回收氯仿层；酸水部分用50倍氯仿萃取2次回收氯仿，酸水经50 60で干燥，得到粗生物碱加入浓度为I mol/L氨水至完全溶解，按每45 75 g粗生物碱加入lmL10% NaOH，5 mL甲醇后，用ニ氯甲烷反复萃取至液体颜色变淡，加氨水至残余物完全溶解，ニ氯甲烷萃取，回收ニ氯甲烷，得到苦马豆素粗品用甲醇溶解，挥干甲醇，升华即得白色针状晶体。如上述专利所述，植物有效成分提取常用的传统方法有水煎法、渗流法、回流提取法、连续回流提取法等，但这些方法均存在有效成分提取率低、能耗高、提取时间长等缺点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种提取率高、能耗低、提取时间短的苦马豆素的酶法提取エ艺。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案 一种苦马豆素的酶法提取エ艺，包括以下步骤 (1)将茎直黄芪晾干，粉碎后过40-80目筛； (2)以PH为4.5的水作为溶剂，在水中加入纤维素酶和步骤(I)制备的茎直黄芪；纤维素酶加入量为茎直黄芪重量的1%_5%，茎直黄芪与溶剂的重量体积比为l:10-50g/ml ； (3)50°C下反应l_5h，得到苦马豆素的提取液。具体地，步骤(I)所述茎直黄芪在自然条件下晾干，粉碎后过80目筛。具体地，步骤(2)所述纤维素酶加入量为茎直黄芪的3. 5%，茎直黄芪与溶剂的重量体积比为I :40g/ml。具体地，步骤(2)所述反应时间为3h。本专利技术具有以下有益效果 生物酶解提取法是利用酶反应的高度专ー性，将细胞壁的组成水解或者讲解，破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。目前，中药提取方面研究较多的酶是纤维素酶，大部分中药材的细胞壁主要是由纤维素类物质构成的 ，植物的有效成分往往包裹在细胞内部，用纤维素酶酶解可以使植物细胞壁破坏，有利于有效成分的提取。与传统提取方法相比，具有设备简单、使用范围广、提取效率高、重现性好、节约时间、节省试剂、污染小、适用于エ业化生产等特点。在本专利技术提供的エ艺參数范围内，针对茎直黄芪中苦马豆素的提取效率高，提取速度快，节省试剂，节省时间，耗能少，成本低，污染少，优于采用传统提取技术提取茎直黄芪中的苦马豆素。在更进ー步的优选条件下，也就是在，茎直黄芪粉碎过80目筛，用水(PH=4. 5)作为溶剂，纤维素酶量为茎直黄芪的3. 5%，50°C下进行提取3h，得到提取液；所述的茎直黄芪原料与提溶剂的重量体积比为I :40g/ml的參数条件下，提取效果最佳。实验分析 用上述方法提取的茎直黄芪中苦马豆素的含量用气相色谱内标法进行分析。试验过程如下 I、材料及方法 1.1仪器与试剂材料 气相色谱仪(VARIAN CP-3380);瓦里安毛细色谱柱CP-SIL5 CB (15 mX0.25mmXO. 33 u m);茎直黄芪原料由西藏农牧科学院提供；苦马豆素标准品采购自西安杨凌天力生物技术有限公司，纯度为98. 42%，D-甘露醇(分析纯)、双(三甲基硅烷基)三氟こ酰胺BSTFA、(三甲基氯硅烷)TMCS采购自百灵威公司，纤维素酶为エ业级别(140万活性单位)，吡啶等化学试剂均为分析纯。I. 2提取方法 1.2. I茎直黄芪原料处理 将茎直黄芪自然条件下户外晾干，粉碎后过40 80目筛，备用。1.2.2苦马豆素提取 精密称取适量茎直黄芪干草粉于烧瓶中，进行酶法提取，滤液浓缩成浸膏，甲醇溶解，过滤，滤液浓缩成浸膏，用碱性正丁醇溶解浸膏，过滤，回收正丁醇，并用吡啶溶解残留物作为供试样品。I. 2. 3标准品、提取样品衍生化处理 由于苦马豆素含有3个羟基，为大极性生物碱，不能直接进行气相分析。所以通过与N-O-双(三甲硅烷基)三氟こ酰胺(BSTFA )进行衍生化，获得的产物热稳定性好，挥发性强，容易气化。准确量取标准溶液和提取样品溶液各100// L，分别加入10// L内标溶液和100// L BSTFA+TMCS (体积比为 99:1)。 1.2. 4苦马豆素检测样品溶液的制备 准确称取D-甘露醇2mg，溶于IOml吡啶中，配成质量浓度为O. 2g/l的溶液。准确称取Img苦马豆素标准品，用吡啶配成质量浓度为O. lg/Ι的标准溶液，并将其分别稀释为O. 05g/l、0. 025 g/l、0. 0125 g/l、0. 00625g/l、0. 003125g/l 和 0. 0015625g/l 的标准溶液。 2、试验结果 2.I提取率影响条件的优化结果 选用了对提取率有影啊4个因素(粉碎目数、固液比、酶量、时间)考虑三个水平，以L9(34)正交表进行试验影响因素优化。优化结果见表I、表2、表3。表I正交试验影响因素水平表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苦马豆素的酶法提取エ艺，其特征在于，包括以下步骤 (1)将茎直黄芪晾干，粉碎后过40-80目筛； (2)以PH为4.5的水作为溶剂，在水中加入纤维素酶和步骤(I)制备的茎直黄芪；纤维素酶加入量为茎直黄芪重量的1%_5%，茎直黄芪与溶剂的重量体积比为l:10-50g/ml ； (3)50°C下反应l_5h，得到苦马豆素的提取液。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝宝成，梁剑平，杨贤鹏，王学红，陶蕾，王保海，刘建枝，刘宇，郭文柱，尚若锋，郭志廷，华兰英，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：