靶向CD163受体的偶联物制造技术

技术编号:7790760 阅读:256 留言:0更新日期:2012-09-22 03:55
本发明专利技术涉及一种用于医药中的治疗剂,其包含对CD163受体的SRCR域1具有结合特异性的结合部分。本发明专利技术还涉及包含所述治疗剂的方法、用途、试剂盒和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向CD163受体的偶联物本专利技术涉及用于医药中的治疗剂,其包含对⑶163受体的SRCR域I具有结合特异性的结合部分(binding moiety)。本专利技术还涉及包含所述治疗剂的方法、用途、试剂盒和组合物。⑶163是在巨噬细胞上表达的膜受体分子,其作为血红蛋白-触珠蛋白复合物的胞吞受体发挥功能。通过这种在生理学上非常重要的功能,⑶163每天摄取约Ig的血红蛋白,因此,该蛋白质可能是巨曬细胞上表达最闻的受:体。巨噬细胞是先天免疫防御的一部分,并且在很多感染性、自身免疫性和恶性疾病中发挥核心作用。在自身免疫性/炎性疾病(例如类风湿性关节炎)中,巨噬细胞是已知在疾病进 程中至关重要的炎性分子(例如TNF-α)的的主要来源。在很多感染性疾病(例如TB和HIV)中,巨噬细胞藏匿感染因子。少数恶性疾病来源于单核细胞/巨噬细胞系的细胞,例如组织细胞肉瘤。因此,药物对巨噬细胞的直接靶向(例如,下调炎性细胞因子的产生,杀死细胞内生物,或杀死恶性细胞)能够对某些疾病产生显著影响,而不影响体内的其他细胞。因此,靶向性能够提高药物的治疗指数。第一方面,本专利技术提供了用于医药中的治疗剂,其包含对⑶163受体的SRCR域I具有结合特异性的结合部分。⑶163的高表达和在巨噬细胞上的近乎专ー表达使其成为使药物特异靶向巨噬细胞时的理想靶标。此外,CD163的胞吞性质还确保了连接于所述受体的药物可被细胞摄取并带至细胞内的溶酶体。⑶163是由九个细胞外清道夫受体的富半胱氨酸(SRCR)B型域组成的清道夫受体。其介导触珠蛋白-血红蛋白(Hp-Hb)复合物的清除并且參与炎症过程的调控,所述复合物是在血管内溶血期间血红蛋白被释放到循环系统中时形成的。CD163被认为专门表达 于单核细胞系表面。其由循环系统中的驻留单核细胞表达,并且在向巨噬细胞成熟期间上调。其在驻留组织的巨噬细胞上以及替代性活化的巨噬细胞(M2)和TIE2+巨噬细胞上高度表达,并显示由造血干细胞/造血祖细胞的⑶34+亚群表达,并且还提出其表达于髓系树突细胞亚类。根据对该分子的公知分子表征,“SRCR域I”是指⑶163的九个细胞外清道夫受体富半胱氨酸(SRCR)B型域中的I号域。所述“治疗剂”包括包含ー个或多个分子的任何纯化或分离的天然或化学合成的部分。优选地,此术语包括一种或多种多肽和/或ー种或多种小化学分子,其中所述多肽和/或小化学分子可经或未经化学基团离子性和/或疏水性和/或共价加成的修饰。术语“结合部分”包括能够通过共价和/或离子性相互作用与一种或多种其他分子的ー个或多个区域可逆和/或不可逆地结合的本专利技术治疗剂的ー个或多个区域。或者,可通过重组DNA技术产生作为融合化合物的所述治疗剂,从而使一段DNA包含编码本专利技术治疗剂的所述两个部分的各区域,所述区域彼此相邻,或由编码连接肽的区域分隔,所述连接肽不破坏所述治疗剂的期望性质。可信地,所述治疗剂的两个部分可完全或部分重叠。所述对⑶163受体的SRCR域I的“结合特异性”是指能够与⑶163受体的SRCR域I结合的结合部分。优选所述结合部分能够与CD163受体的SRCR域I在体内結合,即在CD163受体在体内存在的生理条件下结合。此结合特异性可通过本领域熟知的方法确定,例如,使用表达⑶163受体的SRCR域I的转染细胞通过ELISA、免疫组织化学、免疫沉淀法、Western印迹,以及流式细胞术(參见后附的实施例)。在另ー个实施方式中,所述结合部分能够选择性地结合CD163受体的SRCR域I。所述“能够选择性地结合”包括源自抗体的结合部分,其对CD163受体的SRCR域I的结合強度是对其他蛋白质的结合強度的至少10倍,例如至少50倍,或至少100倍。所述结合部 分能够在生理条件,例如在体内,选择性地结合⑶163受体的SRCR域I。用于测量相对结合强度的适合方法包括免疫分析,例如其中所述结合部分是抗体的免疫分析(參见Harlow& Lane, “Antibodies A Laboratory,,, Cold Spring Habor Laboratory Press, New York,该文献通过引用并入本文)。或者,可使用竞争性分析或使用Biacore 分析(BiacoreInternational AB, Sweden)评估结合。在其他实施方式中,所述抗体或其抗原结合片段,或它们的变体、融合物或衍生物专门结合⑶163受体的SRCR域I。优选地,本专利技术提供了ー种治疗剂,其中对CD163受体的SRCR域I具有特异性的结合部分选自以下组成的组(a)抗体或其抗原结合片段,或保留了对CD163受体的SRCR域I的结合特异性的所述抗体或其抗原结合片段的变体、融合物或衍生物或所述变体或衍生物的融合物;(b)抗体模拟物(例如,基于非抗体骨架);(c) RNA 适体;(d)小分子;和(e) CovX 体。CovX体通过将药效基团(pharmacophore)经由连接子与专门设计的抗体的结合位点共价连接而产生,有效地对抗体进行重编程(Tryder et al. , 2007, Bioorg. Med. Chem.Lett. ,17 :501-66)。所得到的是新型的化学实体,所形成的化学实体中,每个组分均对完整的CovX体提供期望的特性,特别地,所述实体具有肽的生物作用和抗体的长半衰期。优选地,所述CD163受体是人蛋白,但其可来自任何哺乳动物,例如家养哺乳动物(优选具有农业或商业上的重要性的家养哺乳动物,包括马、猪、牛、羊、犬和猫)。所述“哺乳动物蛋白”包括见于、源自和/或分离自ー种或多种哺乳动物细胞的任何蛋白,例如术语“人蛋白”包括见于、源自和/或分离自ー种或多种人细胞的蛋白。优选地,所述CD163受体选自数据库登录号CAB45233 ;AAY99762 ;AAH51281 ;EAW8862 ;EAW8863 ;EAW8864 ;EAW8865 ;EAW8866 ;NP_004235 ;NP_98161 ;Swiss-Prot.Q86VB7. I所定义的蛋白质组成的组。在优选的实施方式中,所述⑶163受体是人⑶163受体。数据库登录号AAH51281、NP 004325 和 Swiss-Prot. Q86VB7. I > sp|Q86VB7|C163A_人清道夫受体的富半胱氨酸I型蛋白M1300S =AGN =CD163PE= ISV = IMSKLRMVLLEDSGSADFRRHFVNLSPFTITVVLLLSACFVTSSLGGTDKELRLVDGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICNQLGCPTAIKAPGWANSSAGSGRIWMDHVSCRGNESALWDCKHDGWGKHSNCTHQQDAGVTCSDGSNLEMRLTRGGNMCSGRIEIKFQGRWGTVCDDNFNIDHASVICRQLECGSAVSFSGSSNFGEGSGPIWFDDLICNGNESALWNCKHQGWGKHNCDHAEDAGVICSKGADLSLRLVDGVTECSGRLEVRFQGEWGTICDDGWDSYDAAVACKQLGCPTAVTAIGRVNASKGFGHIWLDSVSCQGHEPAVWQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.09.29 GB 0917044.01.一种用于医药中的治疗剂,其包含对CD163受体的SRCR域I具有结合特异性的结合部分。2.如权利要求I所述的治疗剂,其中所述对CD163受体的SRCR域I具有结合特异性的结合部分选自以下组成的组 (a)抗体或其抗原结合片段,或保留了对CD163受体的SRCR域I的结合特异性的所述抗体或其抗原结合片段的变体、融合物或衍生物、或所述变体或衍生物的融合物; (b)抗体模拟物(例如,基于非抗体骨架);(c)RNA 适体; (d)小分子;和(e)CovX 体。3.如权利要求I或2所述的治疗剂,其中所述CD163受体是人CD163受体。4.如权利要求1-3中任一项所述的治疗剂,其中所述CD163受体选自由数据库登录号CAB45233、AAY99762、AAH51281、EAW8862、EAW8863、EAW8864、EAW8865、EAW8866、NP_004235、NP_98161和Swiss-Prot Q86VB7. I限定的蛋白质组成的组。5.如权利要求1-4中任一项所述的治疗剂,其中所述⑶163受体的SRCR域I包含以下任一序列或由以下任一序列组成LVDGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICNQLGCPTAIKAPGWANSSAGSGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHDGffGKHSNCTHQQDAGVTCS[SEQ ID NO 1]LVDGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICNQLGCPTAIKATGWANSSAGSGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHDGffGKHSNCTHQQDAGVTCS[SEQ ID NO 2]LVDGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICNQLGCPTAIKATGWANSSAGSGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHDGffGKHSNCTHQQDAGVTCS[SEQ ID NO 3]LTGGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWDMDVVSVVCRQLGCPTAIKATGWANFSAGSGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHDGffGKHNCTHQQDAGVTCS[SEQ ID NO 4]LTDGEDNCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWGMDEVSVICRQLGCPTAIKAAGWANSRAGSGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHDGffGKHNCSHQQDAGVTCS[SEQ ID NO 5]LAGGENNCSGRVELKIHEKWGTVCGNGWSMNEVSVVCQQLGCPTLIKAPGWANASAGS⑶IWMDKVSCTGNESALffDCKHEGffGKHNCTHEQDAGVTCA[SEQ ID NO 6]LAGGENNCSGRVELKIHKWGTVCSNGWSMNEVSVVCQQLGCPTSIKALGWANSSAGSGYIWMDKVSCTGNESALffDCKHDGffGKHNCTHEKDAGVTCS[SEQ ID NO 7]LVAGQTKCSGRVEVKVQEEffGTVCNTGWDLAAVSVVCKQLGCPSVIKATGWTNSSAGTGRIWMDHVSCRGNESALffDCKHEGffGKHNCTHQQDVGVTCS[SEQ ID NO 8]。6.如权利要求1-5中任一项所述的治疗剂,其中所述结合部分能够结合以下共有序列SEQ ID NO 26 - K-X1-VKVQEE-X2-R 其中 X1代表Xaa5_8 (其中Xaa代表任意氨基酸);和 X2缺失或代表Xaa38_42 (其中Xaa代表任意氨基酸)。7.如权利要求1-6中任一项所述的治疗剂,其中所述结合部分能够结合如下序列SEQ ID NO 27-KCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICNQLGCPTAIKAPGWANSSAGSGRo8.如权利要求1-7中任一项所述的治疗剂,其中所述CD163受体定位在细胞表面上。9.如权利要求8所述的治疗剂,其中所述细胞是表达CD163受体的恶性细胞、免疫调控细胞、发炎细胞或感染细胞。10.如权利要求8或9所述的治疗剂,其中所述细胞是单核细胞和/或源自单核细胞的细胞。11.如权利要求10所述的治疗剂,其中所述细胞单核细胞和/或源自单核细胞的细胞选自以下组成的组单核细胞、巨噬细胞、源自单核细胞的树突细胞、活化的巨噬细胞亚型(例如,Ml、M2)。12.如权利要求8-11中任一项所述的治疗剂,其中所述细胞是巨噬细胞,例如Kuppfer细胞。13.如权利要求8-12中任一项所述的治疗剂,其中当所述治疗剂结合CD163受体时被内化至细胞中。14.如权利要求1-13中任一项所述的治疗剂,其中所述结合部分显示出在钙存在下对CD163受体SRCR域I的结合亲和力高于钙不存在吋。15.如权利要求2-14中任一项所述的治疗剂,其中所述结合部分包含抗体或其抗原结合片段,或保留了对CD163受体SRCR域I的结合特异性的所述抗体或其抗原结合片段的变体、融合物或衍生物、或所述变体或衍生物的融合物。16.如权利要求15所述的治疗剂,其中所述抗体或其抗原结合片段,或它们的变体、融合物或衍生物包含完整抗体,或由完整抗体组成。17.如权利要求15或16所述的治疗剂,其中所述抗体或其抗原结合片段或它们的变体、融合物或衍生物包含选自Fv片段(例如单链Fv、ニ硫键键合的Fv)、Fab样片段(例如,Fab片段、Fab'片段和F(ab)2片段)、域抗体组成的组中的抗原结合片段,或由选自Fv片段(例如单链Fv、ニ硫键键合的Fv)、Fab样片段(例如,Fab片段、Fab'片段和F(ab)2片段)、域抗体组成的组中的抗原结合片段组成。18.如权利要求17所述的治疗剂,其中所述抗原结合片段是scFv。19.如权利要求15-18中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体是IgG抗体。20.如权利要求19所述的治疗剂,其中所述IgG抗体是IgG2或IgG4抗体,例如241位的丝氨酸被脯氨酸残基取代的IgG4抗体。21.如权利要求15-20中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体是重组抗体。22.如权利要求15-22中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体是单克隆抗体。23.如权利要求1-13中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体或其抗原结合部分是人的或人源化的。24.如权利要求23所述的治疗剂,其中所述抗体包含由SEQID NO :9或SEQ ID NO 10组成的框架区序列。25.如权利要求1-24中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物是分离和/或纯化的形式。26.如权利要求25所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含重链可变区,所述重链可变区包含选自以下序列组成的组中的ー个或多个CDR序列SEQ ID NO 11 - GYSITSDYSEQ ID NO 12 - YSGSEQ ID NO: 13 - CVSGTYYFDYWG。27.如权利要求1-25中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含轻链可变区,所述轻链可变区包含选自以下序列组成的组的ー个或多个⑶R序列SEQ ID NO 14 - ASQSVSSDVSEQ ID NO 15 - YASSEQ ID NO 16 - QDYTSPRT。28.如权利要求1-25中任一项所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变 体、融合物或衍生物包含轻链可变区,所述轻链可变区包含选自以下序列组成的组中的ー个或多个⑶R序列SEQ ID NO 17 - ASQSVSHDVSEQ ID NO 18 - YTSSEQ ID NO 19 - QDYSSPRT。29.如权利要求26所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含重链可变区,所述重链可变区包含如下SEQ ID NO :20的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 20的氨基酸序列组成DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGITNYNPSLKSQISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVSGTYYFDYWGQGTTLTVSSo30.如权利要求27所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含轻链可变区,所述轻链可变区包含如下SEQ ID NO :21的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 21的氨基酸序列组成 SVVMTQTPKSLLISIGDRVT ITCKASQSVSSDVAffFQQKPGQSPKPLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTIS SVQAEDLAVYFCGQDYTSPRTFGGGTKLEIKRA。31.如权利要求26所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含重链可变区,所述重链可变区包含如下SEQ ID NO: 22的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 22的氨基酸序列组成DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGFISYSGITSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDSATYYCVSGTYYFDYWGQGTTLTVSSo32.如权利要求28所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含轻链可变区,所述轻链可变区包含如下SEQ ID NO :23的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 23的氨基酸序列组成SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSHDVSWFQQKPGQSPKLLIYYTSNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAIYFCQQDYSSPRTFGGGTKLEIKRA。33.如权利要求26所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含重链可变区,所述重链可变区包含如下SEQ ID NO 24的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 24的氨基酸序列组成QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCVSGTYYFDYWGQGTTLTVSSo34.如权利要求28所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含轻链可变区,所述轻链可变区包含如下SEQ ID NO :25的氨基酸序列,或由如下SEQ ID NO 25的氨基酸序列组成DIVMTQSPS SLSASVGDRVTITCRASQSVS SDVAWFQQKPGKSPKPLIYYASNRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDFAVYFCGQDYTSPRTFGGGTKLEIKR。35.如前述任一项权利要求所述的治疗剂,其中所述抗体、其抗原结合片段、它们的变体、融合物或衍生物包含权利要求29或31或33中定义的重链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员:尼尔斯·乔纳斯·海尔斯考·格拉弗森皮亚·斯文森彼得·阿斯楚普·克里斯滕森马切伊·波格丹·马涅克基索伦·克拉格·莫斯楚普霍尔格·乔恩·默勒加布里埃尔·安东
申请(专利权)人:赛托盖德公司奥胡斯大学医院
类型:发明
国别省市:

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