本发明专利技术涉及生物科学领域，特别涉及一种诊断试剂盒及BFAR在制备胃癌早期诊断试剂中的应用。本发明专利技术的诊断试剂盒，用于胃癌早期的诊断，所述诊断试剂盒包括酶标板、人蛋白质BFAR、标准血清、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液，其中，所述人蛋白质BFAR包被于所述酶标板上。与现有技术相比，本发明专利技术有以下优点：1、提供一种灵敏、安全、可靠、易操作的商品化试剂盒，定性测定人血清中抗蛋白质BFAR的IgA抗体的水平，有助于辅助早期诊断胃癌；2、提供的血清生物标志物人蛋白质BFAR的特异性为84%，敏感性为85%，具有高特异性和高敏感性的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物科学领域，特别涉及一种诊断试剂盒及BFAR在制备胃癌早期诊断试剂中的应用。
技术介绍
胃癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤，根据世界卫生组织(WHO) 2008年的统计(世界卫生组织年度统计，2008)，在全世界范围，胃癌病人的死亡率高居第二。在2006年WHO的统计中显示有接近950，000个新发病例，同时有约700，000人死于这一种疾病。在我国，每年胃癌新发患者数超过30万，死于胃癌的人数约16万，病死率居恶性肿瘤之首，严重威胁人民生命健康(陈竺，全国第三次死因回顾抽样调查报告，2008)。为降低死亡率，提高胃癌的疗效，关键是胃癌的“三早”工作，即早期发现、早期诊断及早期治疗。然而，由 于绝大多数胃癌患者缺乏特异性的临床症状，故早期胃癌诊断率很低，手术率不足10% (吴云林外科理论与实践，2005，10:401);术后病人的生存期也较短。目前，我国胃癌总体5年生存率为43. 4%，术后病理分期(pathological M，pTNM) I、II、III、IV期患者的术后5年生存率分别为75. 65%,58. 73%,28. 01%和8. 42% (刘炳亚中华胃肠外科杂志，2010，13:163)。因此，提高胃癌的早期诊断率非常重要。而一般体检和影像学检查作用有限，待能够发现和明确诊断时，往往已到了中、晚期，缺少预警价值。因此，从长远角度看，应致力于发现敏感性和特异性均较好的肿瘤标志物。此外，胃癌异质性大，预后及对治疗的反应性差别较大，对于临床评估预后以及对治疗反应性的预测与评价，均需良好的肿瘤标志物。理想的肿瘤标志物应符合以下条件(1)敏感性高；(2)特异性高；(3)肿瘤标志物浓度和肿瘤大小、转移、恶性程度有关，能协助肿瘤分期和判断预后；(4)半衰期短，有效治疗后浓度很快下降，能较快反映体内肿瘤的实际情况；(5)存在于体液，特别是血液中，易于检测(刘炳亚中华胃肠外科杂志，2010，13:163)。肿瘤血清标志物的研究一直是本领域的研究重点。现已有多种胃癌肿瘤标识物如癌胚抗原(CEA)，存在于胃癌及其它腺癌患者的血清中，但对早期胃癌的诊断意义较小，主要用于胃癌治疗前后的动态观察(Lipkin M:Cancer Research, 1988, 48:235 ；Lipkin: JBC Supplymental, 1992，16:1) ;CA125、CA 19-9, CA50、CA724 以及 CA242 等部分糖抗原在部分胃癌患者中可升高，但其敏感性仅20 40 % (Kodera Y:The Americanjournal of gastroenterology, 1996，91:49 ；Chou M:Disease Markers, 2000，16:105 ；Lai IR etal:Hepato—gastroenterology，2002，49:115 Edip U et al!Advances inTheray, 2008, 25:1075);还有研究发现肿瘤相关糖蛋白抗原_72 (TAG-72)对胃癌的敏感性为69%，特异性为84% (刘军等实用医学杂志，1999，15:4);糖蛋白抗原MG7_Ag在血清中有40% -60%的阳性检出率，在胃癌组织中有80% -94%的阳性检出率(Ren J:Cancer，2000,88 :280);核小体组蛋白类抗原(IP0 — 38)作为胃癌诊断的敏感性为57. 4%，特异性超过90% (Hao Y etal: J Proteome Res, 2008，7:3668)以上这些指标均有利于早期胃癌的诊断。某些肿瘤基因，如DDC、C-myC、C-erb-2、p53以及nm23等对胃癌的发生、转移也有一定意义，但广泛应用于临床仍受限制(刘倩等，人民卫生出版社，2004)。由于现有的胃癌生物标识物在灵敏度和特异性上的缺陷，虽然在疗效监测、提示复发、判断预后和高危人群的普查中具有一定的价值，但目前仍不能用于胃癌的确诊。为了实现对胃癌的早期高灵敏性，高特异性的诊断，急需在分子水平上寻找到更敏感、更特异的胃癌生物标志物。我们在前期研究中利用人蛋白质组芯片高通量、快速分析的优势，分析了胃癌病人相关血清101份(胃癌病人37份、高危病人14份、健康人血清50份)，在较短时间内比较了患者和健康人样品中的不同，给出了候选血清生物标志物，以期早期诊断和有效治疗胃癌。 蛋白BFAR (bifunctional apoptosis regulator)双功能凋亡调节子最早是由Zhang等人发现的一种多结构域的膜整合蛋白(Zhang H et al :PNAS, 2000, 97:2597),它含有450个氨基酸。BFAR主要分布在内质网，少量分布在线粒体膜(Roth W et al =CellDeath Differ, 2003, 10:1178)，包括4个可识别结构域N末端锌指结合RING环结构域，可结合泛素连接酶E2s ；SAM结构域，能促进Bcl-2和Bcl-X的相互作用，抑制Bax诱导的细胞凋亡；DED结构域,与procaspases-10的死亡效应结构域DED序列同源，有报道称其直接或间接与caspase8和caspaselO前体相关,阻碍Fas介导的凋亡信号通路；以及C末端跨膜结构域TM，BFAR通过TM定位在内质网膜上(李红梅等中国科学，2011，41:1140 )。有研究发现，BFAR的组织表达谱有高度特异性，仅在脑组织中高表达(Roth W et al =Cell DeathDiffer,2003, 10:1178)。目前，未见有将BFAR蛋白质作为胃癌生物标志物的报导。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种诊断试剂盒，以解决现有技术中的胃癌诊断试剂盒不能实现对胃癌的早期高灵敏性、高特异性的诊断的技术性问题。本专利技术的第二目的在于提供一种BFAR在制备胃癌早期诊断试剂中的应用，以解决现有技术中的胃癌诊断试剂不能实现对胃癌的早期高灵敏性、高特异性的诊断的技术性问题。本专利技术目的通过以下技术方案实现一种诊断试剂盒，用于胃癌早期的诊断，所述诊断试剂盒包括酶标板、人蛋白质BFAR、标准血清、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液，其中，所述人蛋白质BFAR包被于所述酶标板上。优选地，所述人蛋白质BFAR是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到，浓度为10u g/mL0优选地,所述标准血清包括0U/mL标准血清I和100U/mL标准血清2,所述0U/mL标准血清I为健康人血清稀释于样品稀释液中；所述100U/mL标准血清2为BFAR抗体为阳性的血清稀释于样品稀释液中。优选地，所述酶标试剂含HRP- 二抗0. 1-1 u g/mL。优选地，所述酶底物溶液为TMB溶液，所述TMB溶液包括显色剂A和显色剂B，显色剂A :500mL溶液中含有醋酸钠13. 6g、柠檬酸I. 6g和30%双氧水0. 3mL ;显色剂B :500mL溶液中含有TMB 350mg、DMS0 20mL和柠檬酸 H205. lg。优选地，所述封闭液为0. 5%BSA的0. 01mol/L pH 7. 4磷酸盐-NaCl缓冲液(PBS)溶液，即 I 升溶液中含 5g B本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种诊断试剂盒，用于胃癌早期的诊断，其特征在于，所述诊断试剂盒包括酶标板、人蛋白质BFAR、标准血清、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液，其中，所述人蛋白质BFAR包被于所述酶标板上。2.如权利要求I所述的ー种诊断试剂盒，其特征在于，所述人蛋白质BFAR是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到，浓度为IOy g/mL。3.如权利要求I所述的ー种诊断试剂盒，其特征在于，所述标准血清包括OU/mL标准血清I和100U/mL标准血清2,所述OU/mL标准血清I为健康人血清稀释于样品稀释液中；所述100U/mL标准血清2为BFAR抗体为阳性的血清稀释于样品稀释液中。4.如权利要求I所述的ー种诊断试剂盒，其特征在干，所述酶标试剂含HRP-ニ抗0.1-1μ g/mL05.如权利要求I所述的ー种诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液为TMB溶液，所述TMB溶液包括显色剂A和显色剂B，显色剂A 500mL溶液中含有醋酸钠13. 6g、柠檬酸1.6g和30%双氧水O. 3mL ;显色剂B :500mL溶液中含有TMB 350mg、DMS0 20mL和柠檬酸·Η205.丄g06.如权利要求I所述的ー种诊断试剂盒，其特征在干，所述封闭液为O.5%BSA的O.01mol/L pH 7. 4磷酸盐-NaCl缓冲液(PBS)溶液，即I升溶液中含5g BSA (牛血清白蛋白)、8...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽娜，陶生策，刘炳亚，王靖方，郭书娟，朱正纲，李建芳，燕敏，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：
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