本发明专利技术涉及一种用于固相萃取－毛细管电泳在线联用的毛细管微柱的制备方法，具体为采用商品化的具有特征粒径尺寸和孔隙度的二氧化硅微球置于毛细管内，微球粒径要略大于毛细管的内径，基于二氧化硅微球与毛细管内壁的基石效应这种纯物理作用使得单个微球可以固定于毛细管孔道内充当柱塞，将固相萃取的填充材料固定于毛细管的一端。该制备方法简便、快速、高重现，可以精确的控制柱长的长度，解决了传统的烧结法和原位聚合法制备柱塞的操作过程繁琐、可控性差，难以在毛细管柱的末端获得特定长度的填充床等问题，在痕量样品以及复杂基体样品的分离分析方面有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
—种用于固相萃取-毛細管电泳在线联用的毛細管微柱的制备方法
本专利技术涉及一种毛细管微柱的制备方法，尤其涉及一种用于固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱的制备方法。背景技木固相萃取(SPE)是ー种基于色谱分离的重要的样品前处理方法。在样品处理过程中，液体样品在一定的外力作用下通过装有固体吸附剂的固相萃取装置，由于固体吸附剂具有不同的官能团，特定的化合物会被吸附并保留在SPE柱上，从而实现对目标化合物的分离纯化、浓缩、溶剂转换等功能。目前，固相萃取技术已经在环境保护分析、食品分析、司法鉴定、药物分析、生命科学等领域得到了广泛的应用。毛细管电泳(CE)是ー种快速、高效、 低消耗的液相分离技术，尤其适合于生物样品中带电分子的分离。然而，毛细管电泳较小的进样体积(I - IOOnL)和较短的光程(25 — 100 μ m)导致其灵敏度相对较低，限制了其在生化分析中的应用范围。将固相萃取技术与毛细管电泳结合可以充分发挥两种技术的优势固相萃取前处理后可以脱除样品基体并对样品进行富集，降低基体效应并提高毛细管电泳分析的灵敏度，降低其检出限；经前处理后的复杂样品可以得到毛细管电泳快速、高效的分离分析。固相萃取与毛细管电泳联用主要有离线和在线联用两种模式。离线联用操作繁琐、耗时且重现性较差，而在线联用由于其易实现自动化操作，较低的死体积和较少的溶剂消耗等优点被广泛采用。固相萃取与毛细管电泳在线联用所使用的固相萃取柱主要有带有涂层的开管毛细管萃取柱、填充床固相萃取柱以及聚合整体柱床的固相萃取柱等。其中，填充床固相萃取柱因为其可选择的填充材料种类多、方法强健以及相对较大的柱容量而最为常见。填充床固相萃取一毛细管电泳在线联用所使用的毛细管微柱类似于毛细管电色谱柱，所不同的是这种微柱只在柱子的一端填充一定长度的填充材料用于复杂样品的前处理，剰余部分为毛细管电泳的分离通道用于对复杂的混合物进行分离分析。填充床固相萃取一毛细管电泳在线联用所使用的毛细管微柱制备的关键技术在于如何在毛细管微柱的一端固定一定长度的固相萃取填料，现有的文献中主要有两种解决方案。其ー是基于传统的烧结法制备入ロ柱塞和出ロ柱塞将萃取填料固定在毛细管内，烧结法是使用裸硅胶颗粒或硅基质的填料在高温下烧结制备成多孔的柱塞，这种柱塞的制备方法需要在高温下操作容易造成填充材料表面官能团性质的改变，不适用于聚合物基质的填充填料，与此同时高温操作使毛细管表面涂层灰化脱落，毛细管柱的強健性降低。除此之外，烧结法制备的柱塞重现性差、成功率低，诸多的缺陷限制了其大規模用于制备固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱。其ニ是使用原位聚合法在毛细管内原位聚合多孔的整体材料将填料固定在毛细管内，这种方法需要通过较为复杂的化学反应来实现，操作繁琐且重现性差，这种方法比较适合于制备出口柱塞而难以用于制备入口柱塞，这些缺陷也同样限制了其在制备固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱中的应用。如何快速、有效的在毛细管柱末端固定特定长度的填充床一直是制备固相萃取一毛细管电泳微柱的一个技术瓶颈。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供ー种简便、快速、高重现地制备填充床固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱的制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供的制备方法为，采取的技术方案是采用商品化的具有特征粒径尺寸和孔隙度的ニ氧化硅微球置于毛细管内，微球粒径要略大于毛细管的内径，基于ニ氧化硅微球与毛细管内壁的基石效应这种纯物理作用使得单个微球可以固定于毛细管孔道内充当柱塞，将固相萃取的填充材料固定于毛细管的一端。制备步骤具体为匀浆的制备将所要填充的固相萃取填料加入适当的溶剂中制备成匀浆，振荡使 溶液初歩混合均匀，然后在超声波振荡器中振荡，使填料能均匀分布于溶剂中；本专利技术适用的固相萃取填料为无机基质和有机聚合物基质的色谱填料。制备匀浆所采用的试剂通常为密度和黏度较大的有机溶剤。如ニ氧六环、环己烷、四氯化碳等；出口柱塞的制备截取所需长度的毛细管1，将商品化的单个ニ氧化硅多孔微球压入毛细管一端，然后使用细外径的毛细管2将微球推至适当的位置作为出口柱塞；其中单个ニ氧化硅多空微球的外径略大于毛细管I的内径，细外径的毛细管2的外径小于毛细管I的内径。毛细管I适用于25 — 100 μ m内径的弾性石英毛细管。在具体的实施例中，毛细管I的内径为100 μ m,多孔娃胶小球的直径110 μ m,毛细管2的外径为90 μ m。其中毛细管I为弹性石英毛细管，毛细管2为石英毛细管。柱床填充通过一定的外力(压力、重力、离心カ等)驱使匀浆通过毛细管柱，溶剂被多孔的ニ氧化硅微球滤过而填充材料会被微球所充当的柱塞固定在毛细管内以获得一定长度的填充床；填充床长度可低至1_，上至几十个厘米。本专利技术所适用的填充模式为高压填充、离心填充和重力填充。入口柱塞的制备将填充完的毛细管柱的入口端压入ー个同样的ニ氧化硅多孔微球作为入口柱塞，通过两个柱塞可以将固相萃取填充材料限制在毛细管的一端完成固相萃取-毛细管电泳在线联用微柱的制备。本专利技术采用单个ニ氧化硅多孔微球作为柱塞。制备匀浆中所采用的试剂为密度和黏度较大的有机溶剂，如ニ氧六环、环己烷、四氯化碳；柱床填充中勻衆通过高压、离心和重力通过毛细管柱；填充床的长度1_至几十个厘米。图I即是在线固相萃取一毛细管电泳微柱结构原理图。本专利技术的制备方法解决了传统的烧结法和原位聚合法制备柱塞的操作过程繁琐、可控性差，难以在毛细管柱的末端获得特定长度的填充床等问题。本专利技术的制备方法操作简便，所制备的填充床重现性好并且可以精确地控制填充床的长度。本专利技术的制备方法基于单颗粒多孔微球柱塞法可简便、快速、高重现地制备填充床固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱并且可以精确的控制柱长的长度。本专利技术的实施例提供了固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱用于微量蛋白质酶解产物的分离分析，将未经固相萃取样品前处理和经过固相萃取样品前处理的牛血清白蛋白酶解产物的电泳分离谱图进行对比，可以看出未经过富集处理的样品的响应值较低，且有很大一部分的组分被背景所掩盖，而通过固相萃取前处理的样品的响应值较高，ー些含量较低的组分也有较高的响应值，复杂的混合样品也得到电泳的有效的分离。本专利技术的另外ー个实施例提供了固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱用于微量的药物心得安祥品的分离分析，将未经固相萃取样品前处理和经过固相萃取样品前处理的药物心得安祥品的电泳分离谱图进行对比，可以看出未经毛细管固相萃取微柱富集的微量心得安药物样品的电泳分离谱图，由于药物的浓度较低导致检测的信号响应值较小。而经毛细管固相萃取微柱富集后的心得安药物的电泳分离谱图，吸光度值得到较大提升，富集倍数约为10倍。本专利技术的固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管柱在痕量样品以及复杂基体样品的分离分析方面有较好的应用前景。附图说明图I为在线固相萃取一毛细管电泳微柱结构原理图。图2为未经固相萃取样品前处理(CE)和经过固相萃取样品前处理(SPE-CE)的牛血清白蛋白酶解产物的电泳分离谱图。图3为未经毛细管固相萃取微柱富集的微量心得安药物样品的电泳分离谱图。图4为经毛细管固相萃取微柱富集后的心得安药物的电泳分离谱图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于固相萃取一毛细管电泳在线联用的毛细管微柱的制备方法，所述制备方法步骤如下 匀浆的制备将所要填充的固相萃取填料加入适当的溶剂中制备成匀浆，振荡使溶液初步混合均匀，然后在超声波振荡器中振荡，使填料能均匀分布于溶剂中； 出口柱塞的制备截取所需长度的毛细管1，将单个二氧化硅多孔微球压入毛细管一端，然后使用细外径的毛细管2将微球推至毛细管I内适当的位置作为出口柱塞； 柱床填充通过一定的外力驱使匀浆通过毛细管1，溶剂被多孔的二氧化硅微球滤过而填料会被微球所充当的柱塞固定在毛细管I内以获得一定长度的填充床； 入口柱塞的制备将填充完的毛细管柱的入口端压入一个同样的二氧化硅多孔微球作为入口柱塞，通过两个柱塞可以将固相萃取填充材料限制在毛细管I的一端。2.权...
【专利技术属性】
技术研发人员：严丽娟，张博，肖志良，张峰，吴敏，张洁，
申请(专利权)人：严丽娟，
类型：发明
国别省市：
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