本发明专利技术涉及重组蛋白质生产领域，特别是涉及用于改善宿主细胞中表达的重组蛋白质的生产水平的组合物和方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于高效率蛋白质表达的分泌蛋白质生物标记物I.相关串请的交叉引用 本申请要求2009年11月9日提交的美国临时申请系列号NO. 12/259，527和2010年11月 8日提交的美国申请NO. 12/941，347的权益，通过完全引用将它们的公开内容通过引用合并在此。2.引言 本专利技术涉及蛋白质生产领域，特别是涉及用于改善宿主细胞中表达的蛋白质的生产水平的组合物和方法。3.
技术介绍
生物药物应用的重组蛋白质生产一般涉及使用具有可变蛋白质表达效率的细胞培养物。基因作图、生物成像和整体蛋白质组分析的技术发展提供了独特的机会来理解与使用细胞培养物大规模生产重组蛋白质相关的许多瓶颈。新近的会议(IBC-AntibodyDevelopment and Production, San Diego, Mar 12-14，2008)以及同行评审刊物(Gupta,P. and K. H. Lee (2007) , "Genomics and proteomics in process development:opportunities and challenges" Trends Biotechnol 25 (7): 324-30.)中的公开文献展现了这样的技术在生物药物产业中的实用性。许多这些研究的目的包括改善细胞生产力、改善细胞培养物存活和增殖、以及引入快速可靠的技术用于选择高产细胞系和实时监控细胞的生存力和生理机能。即使根据上述进展，本领域仍然需要鉴定与高效率蛋白质表达相关的生物标记物，特别是在用于商业生产的重组生物治疗剂的细胞培养过程的情境下。本专利技术通过提供与高效率蛋白质表达相关的分泌蛋白质生物标记物解决了这一需求。4.专利技术概沭 本专利技术涉及与高效率蛋白质表达相关的分泌蛋白质生物标记物，以及使用这样的生物标记物来促进宿主细胞中高效率的蛋白质表达、特别是重组蛋白质表达的方法。在某些实施方式中，分泌蛋白质生物标记物是居留于内质网部分的蛋白质。在某些实施方式，所述分泌蛋白质生物标记物是居留于高尔基体部分的蛋白质。在某些实施方式中，所述分泌蛋白质生物标记物来源于全细胞部分。在某些实施方式中，所述分泌蛋白质生物标记物在高效率细胞或细胞培养物中被增量调节。在某些实施方式中，所述分泌蛋白质生物标记物在高效率细胞或细胞培养物中被减量调节。在本专利技术的某些实施方式中，采用分泌蛋白质生物标记物来鉴定高效率细胞或细胞培养物。在某些实施方式中，采用多个分泌蛋白质生物标记物来鉴定高效率细胞或细胞培养物。在某些实施方式中，采用分泌蛋白质生物标记物的增量调节来鉴定高效率细胞或细胞培养物。在某些实施方式中，采用分泌蛋白质生物标记物的减量调节来鉴定高效率细胞或细胞培养物。在采用多个分泌蛋白质生物标记物来鉴定高效率细胞或细胞培养物的某些实施方式中，所有分泌蛋白质生物标记物是增量调节的。在涉及多个分泌蛋白质生物标记物的其他实施方式中，所有分泌蛋白质生物标记物是减量调节的。在涉及多个分泌蛋白质生物标记物的再进一步的实施方式中，一种或更多种分泌蛋白质生物标记物是增量调节的，而一种或更多种分泌蛋白质生物标记物是减量调节的。5.附图的简要描述 附图I描绘了不同的细胞培养处理对开发的生物反应器中产品滴度的影响。(IVC=活细胞密度的积分，Qp =单位生产率)。附图2描绘了纯化的ER和高尔基体部分的透射电子显微镜(TEM)图像。附图3描绘了总细胞溶胞产物对比分级的ER和高尔基体样品的2D-凝胶电泳。 附图4描绘了鉴定从2D凝胶上切下的差异表达的蛋白质斑点的质谱工艺流程图。附图5描绘了在小节7. 2. 2中描绘的细胞系I的培养过程期间获得的产品滴度的相对值(培养物I/培养物2)、单位生产率(qp)和活细胞密度的积分(IVC)。附图6描绘了在小节7. 2. 2中描述的细胞系I的培养过程第5、8和11天采集的内质网富集部分样品中，小于-0. 4或大于0. 4的相对表达(X-轴)对比蛋白质数(y_轴)。附图7描绘了在小节7. 2. 2中描述的细胞系I的培养过程第5、8和11天采集的高尔基体富集部分样品中，小于-0.4或大于0.4的相对表达(X-轴)对比蛋白质数(y-轴)。附图8描绘了在小节7. 2. 3中描绘的细胞系2的培养过程期间获得的产品滴度的相对值(培养物I/培养物2)、单位生产率(qp)和活细胞密度的积分(IVC)。附图9描绘了在小节7. 2. 3中描述的细胞系2的培养过程第8和11天采集的内质网富集部分样品中，小于-0. 4或大于0. 4的相对表达式(X-轴)对比蛋白质数(y_轴)。附附图说明图10描绘了在小节7. 2. 3中描述的细胞系2的培养过程第5、8和11天采集的高尔基体富集部分样品中，小于-0.4或大于0.4的相对表达(X-轴)对比蛋白质数(y-轴)。附图11描绘了在小节7. 2. 4中描绘的细胞系3的培养过程期间获得的产品滴度的相对值(培养物I/培养物2)、单位生产率(qp)和活细胞密度的积分(IVC)。附图12描绘了在小节7. 2. 4中描述的细胞系3的培养过程第5/6、8/9和11/13天采集的内质网富集部分样品中，小于-0. 4或大于0. 4的相对表达(X-轴)对比蛋白质数Cy-轴)。附图13描绘了在小节7. 2. 4中描述的细胞系3的培养过程第5/6、8/9和11/13天采集的高尔基体网状构造富集部分样品中，小于-0. 4或大于0. 4的相对表达(X-轴)对比蛋白质数(y-轴)。6.专利技术的详细说明 5. I定义 如在此使用的，术语“高效率蛋白质表达”是指细胞或细胞培养物的表型，其中所述细胞或细胞培养物以比其他可比较细胞更高的浓度表达目标蛋白质。这种表型可以在一般细胞培养条件观察到，或可能需要使用特定的细胞培养条件来引发所述表型。显现高效率蛋白质表达的细胞在此称为“高效率细胞”，所述细胞的培养物被称为“高效率细胞培养物”。如在此使用的，术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)是指其中已经导入重组表达载体的细胞。要理解的是，这种术语不仅仅意图指特定的主题细胞，还指这种细胞的子代。由于突变或环境影响在继承的代中可能出现某些改变，实际上，这种子代可能不与母细胞相同，但仍然包括在此处使用的术语“宿主细胞”的范围内。在某些实施方式中，在细胞培养的情境中采用宿主细胞。如在此使用的，术语“细胞培养”是指被采用以产生和维持能生产目标重组蛋白质的宿主细胞群体的方法和技术，以及优化目标蛋白质的生产和采集的方法和技术。例如，一旦表达载体被整合到合适的宿主中，宿主可以维持在适合于相关核苷酸编码序列的高水平表达、期望的重组蛋白质的采集和纯化的条件下。哺乳动物细胞对于本专利技术的重组体的表达和生产是优选的，然而其他真核细胞类型也可以在本专利技术的情境中采用。参见，例如，ffinnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N. Y. , N. Y. (1987)。用于表达根据本专利技术的重组蛋白质的适合的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括在 Urlaub and Chasin, (1980) PNAS USA 77:4216-4220 中描述的 dhfr-CHO 细胞，与例如在 Kaufma本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P霍斯勒，IR科雷亚，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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