治疗基底细胞样基因型癌症制造技术

本文提供治疗患有癌症的受治疗者的方法，包括对所述受治疗者施用死亡受体激动剂。本文还提供筛选乳腺癌细胞对DR5激动剂的反应性的方法。本文还提供与DDX3的N端CARD、缺乏N端CARD的DDX3和80kDa杆状病毒IAP重复序列(BIR)选择性结合的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗基底细胞样基因型癌症相关申请的交叉引用本申请要求2009年11月5日提交的美国临时申请No. 61/258，274的权益，其全部内容以引用的方式并入本文。背景三阴性乳腺癌(TNBC)代表相当比例(约20-25% )的乳腺癌患者。TNBC以缺乏HER2、雌激素受体(ER)和孕酮受体(PR)为特征。TNBC具有不良预后，并且迄今没有发现治 疗的祀向途径。概述提供了治疗患有癌症的受治疗者的方法。所述方法包括选择患有乳腺癌的受治疗者，其中乳腺癌是基底细胞样基因型癌症并且其中乳腺癌是HER2非扩增的，和对受治疗者施用死亡受体激动剂。任选地，所述方法包括选择患有乳腺癌的受治疗者，其中乳腺癌具有选自由管腔细胞、HER2扩增的或基底细胞样基因型组成的组的ー种或多种特征；对受治疗者施用IAP抑制剂；和对受治疗者施用死亡受体激动剂。也提供筛选乳腺癌细胞对DR5激动剂的反应性的方法。所述方法包括检测癌细胞中的基底细胞样表型；检测癌细胞是HER2非扩增的；和检测与对照相比癌细胞中降低水平的 DR5/DDX3/cIAPl 复合物。也提供筛选三阴性乳腺癌细胞对DR5激动剂的反应性的方法。任选地，所述方法包括检测细胞中的DR5/DDX3/cIAPl复合物的水平并将其与对照进行比较。与对照相比，细胞中较低水平的复合物表明反应性。任选地，所述方法包括检测乳腺癌细胞中缺乏N端半胱天冬酶相关募集结构域(CARD)的DDX3。缺乏N端CARD的DDX3表明乳腺癌细胞对DR5激动剂有反应性。任选地，所述方法包括检测乳腺癌细胞中包含SOkDa杆状病毒IAP重复序列的IAP蛋白。SOkDa杆状病毒IAP重复序列表明乳腺癌细胞对DR5激动剂没有反应性。还提供与DDX3的N端CARD选择性结合的抗体。也提供与缺乏N端CARD的DDX3选择性结合的抗体。也提供与包含80kDa杆状病毒IAP重复序列(BIR)的IAP蛋白选择性结合的抗体。附图描述图I示出显示用TRA-8处理后三阴性乳腺癌细胞系经历细胞凋亡的图。在体外用TRA-8处理三阴性乳腺癌细胞系24小吋。使用基于荧光素酶的测定来测定细胞成活力以测量ATP水平。相对于未处理的对照细胞，将值表示为平均值和标准差(η = 6次重复)。图2Α和2Β示出用TRA-8和化学治疗药物的组合的处理引起对基底细胞A和基底细胞B乳腺癌细胞系的附加或协同作用。图2Α示出显示用TRA-8抗体和化学治疗剂(顺钼、卡钼和阿霉素)的组合处理的三阴性基底细胞B SUM159乳腺癌细胞中増加的细胞凋亡的图。图2Β示出显示用TRA-8抗体和化学治疗剂(顺钼、卡钼和阿霉素)的组合处理的三阴性上皮基底细胞A HCC1937乳腺癌细胞中増加的细胞凋亡的图。用化学治疗剂预处理SUM159和HCC1937乳腺癌细胞24小时并且然后用TRA-8抗体再处理24小时。用单独TRA-8抗体、単独化学治疗化合物或用TRA-8加化学治疗化合物的组合处理细胞。通过测量ATP水平来測定细胞成活力。将值表示为平均值和标准差(η = 4次重复)。图3示出DR5/DDX3/IAP细胞凋亡抑制性复合物的模型。图4示出DDX3的siRNA介导的敲低逆转对DR5介导的细胞凋亡的抗性。图4A示出蛋白质印迹的图像，其显示用针对DDX3 mRNA的siRNA处理的细胞中降低的DDX3蛋白表达。图4B示出显示用TRA-8抗体处理的DDX3表达降低的细胞中增加的细胞凋亡的图。图5示出DR5缔合的DDX3通过DDX3 CARD募集cIAPl并且抑制细胞凋亡。图5A示出蛋白质印迹的图像，其显示全长DDX3通过向DR5募集cIAPl来抑制细胞凋亡。如通过FADD募集所示，用TRA-8处理后，表达CARD截短的DDX3 (DN)的细胞已恢复死亡结构域诱导信号复合物(DISC)功能。图5B示出显示表达缺乏CARD的DDX3的DR5抗性肿瘤细胞对TRA-8诱导的细胞凋亡变得更加敏感。图6示出可在TRA-8敏感和抗性细胞中定量的DR5/DDX3/cIAPl复合物。图6A示出显示TRA-8敏感MDA231P和UL-3CP细胞系中DR5缔合的DDX3和cIAPl低于TRA-8抗性MDA231R和UL-3CR细胞系的图。图6B示出显示与ー组TRA-8敏感细胞系相比，TRA-8抗性细胞系表达较高水平的DR5缔合的DDX3和cIAPl蛋白的柱形图。图7示出三阴性和非三阴性乳腺癌细胞系中DR5/DDX3/cIAPl复合物的差异。图7A示出显示三阴性乳腺癌细胞系(SUM149、SUM159、SUM102、2LMP、HCC38、BT20)中DR5缔合的DDX3和cIAPl较低的图。图7B示出蛋白质印迹的图像，其显示在一些三阴性乳腺癌细胞系中，由于N端CARD的丧失，与DR5共免疫沉淀的DDX3的分子量低于非三阴性乳腺癌细胞系。图8示出识别杆状病毒IAP重复序列(BIR)的新型抗体(3H4)的特征。图8A示出3H4与cIAPl、cIAP2、XIAP和生存素(survivin)的结合特征。图8B示出被3H4识别的共用表位的序列。上部序列是cIAPl (SEQ ID NO 31)的第二 BIR结构域；中间序列是cIAP2 (SEQID NO :32)的第二 BIR结构域；底部序列是XIAP (SEQ ID NO 33)的第二 BIR结构域。图8C示出用3H4对来自一组人胰腺癌细胞系的全细胞裂解物进行的蛋白质印迹分析。泳道I :MIAcapa ；2 BXPC3 ；3 Panc I ；4 =Panc 2. 03 ；5 S2013 ；6 :S2VP10。 图9示出DDX3/IAP复合物中IAP的下调。图9A示出用AT-406和TRA-8组合处理下调DR5细胞凋亡抗性胰腺细胞中IAP蛋白的表达。用对照介质(泳道I)或IOOOng/ml TRA-8 (泳道2)，或IOuM AT406 (泳道3)或两者(泳道4)处理两种人胰腺癌细胞系，S2013(左图)和S2VP10 (右图)，过夜。通过使用3H4抗体的蛋白质印迹分析全细胞裂解物中的IAP蛋白。图9B示出DDX3复合物中的IAP蛋白。使来自以上处理细胞的细胞裂解物与抗DDX3抗体(克隆3E4)免疫沉淀。对沉淀的蛋白质进行免疫印迹并且用3H4抗体检测IAP蛋白。附图说明图10示出AT-406对乳腺癌细胞系中IAP的体外作用。介用对照质(泳道I)或1000ng/ml TRA-8 (泳道2)或IOuM AT406 (泳道3)或两者(泳道4)处理人乳腺癌细胞系(MB436 和 2LMP (图 IOA) ,SUMl59 和 SUM149 (图 10B)、BT474 和 MB468 (图 10C)，过夜。使来自处理细胞的细胞裂解物与抗DDX3抗体(克隆3E4)免疫沉淀。对沉淀的蛋白质进行免疫印迹并且用3H4抗体检测IAP蛋白。图11示出通过TRA-8和AT406处理的组合治疗产生的细胞毒性。用AT-406处理细胞I小时，然后用TRA-8和AT-406处理24小时。在加入TRA-8后24小时通过测量ATP水平来测定细胞成活力。图12示出与阿霉素组合，AT-406增强TRA-8体外细胞毒性。TRA-8、AT_406和阿霉素以单独药剂使用或组合 使用。在AT-406之前24小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·J·布赫斯鲍姆，T·周，A·F·罗布格利奥，
申请(专利权)人：UAB研究基金会，
类型：发明
国别省市：