革兰氏阳性细菌特异性结合化合物制造技术

本发明专利技术提供改良的结合化合物，其能够特异性结合革兰氏阳性细菌。本发明专利技术还提供完全人的结合化合物，其能够在人个体中进行治疗性应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】革兰氏阳性细菌特异性结合化合物本专利技术涉及生物学、免疫学和医学领域。革兰氏阳性微生物引起多数系统感染。这些革兰氏阳性病原体的ー个重要成员是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)。约20%的群体是金黄色葡萄球菌的长期携帯者。金黄色葡萄球菌能引起一系列病，从局部的皮肤感染，诸如丘疹、脓疱病(也可由酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)引起)、市、蜂窝织炎、毛囊炎、疔疮、痈、皮肤烫伤综合征和脓肿，到危及生命的疾病，诸如肺炎、脑膜炎、骨髄炎、心内膜炎、中毒性休克综合征(TSS)、和败血症。金黄色葡萄球菌能够感染所有种类的器官和组织。金黄色葡萄球菌感染发生于免疫胜任的以及免疫受损的人。美国重症监护室中约50%的感染是由这种 病原体引起的。美国每年报告300，000例金黄色葡萄球菌感染，导致12，000例死亡(Moranet al.NEMJ 355，666-674 (2006))。ー个主要问题是金黄色葡萄球菌越来越强的抗生素抗性。甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)出现于二十世纪六十年代。它最初是在医疗环境中鉴定到的。然而，MRSA表现为存在于从未住院的社会中的人。MRSA的治疗是困难且昂贵的，原因在于MRSA对抗生素的有限敏感性。然而，可用的抗生素备选很少。常常使用万古霉素来治疗青霉素抗性MRSA。美国专利6，939，543记载ー种针对脂磷壁酸(LTA)的鼠抗体，其能够结合金黄色葡萄球菌。基于这种鼠抗体，生成了一种重组嵌合小鼠/人抗体，其含有人重链和轻链恒定域。然而，此类嵌合小鼠/人抗体具有存在鼠序列的缺点，这涉及施用于人时严重副作用的发现。本专利技术的ー个目标是提供用于抵抗和/或预防革兰氏阳性细菌相关疾病的手段和方法。本专利技术的又ー个目标是提供备选的和/或改良的针对各种革兰氏阳性细菌，优选葡萄球菌属物种，更优选的MRSA的结合化合物。本专利技术的又ー个目标是提供针对各种革兰氏阳性细菌，优选葡萄球菌属物种，更优选MRSA的人结合化合物。本专利技术提供能够特异性结合处于其天然背景中的葡萄球菌属物种的抗体、其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物。因此，它们可用于抵抗和/或预防和/或诊断与葡萄球菌属物种的存在有关的病症。优选地，抵抗金黄色葡萄球菌。在ー个特别优选的实施方案中，抵抗MRSA。抵抗的另ー种优选葡萄球菌属物种是表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis, b.epiaermidis)。表皮葡萄球菌通常是非致病性的，但是免疫系统受损的患者常常有风险发生感染。感染常常是医院和社区获得的，但是它们对住院患者更加构成威胁。对表皮葡萄球菌感染最易感的人是静脉内药物使用者、新生儿、老年人、和使用导管或其它人工矫正器的人。感染与血管内装置(心瓣膜假体、分流器、等)有夫，但是也常常发生于关节假体、导管、和大伤ロ。症状包括发热、头痛、疲劳、食欲缺乏和呼吸困难。在一个优选的实施方案中，本专利技术提供分离的或重组的能够特异性结合葡萄球菌属物种的人抗体、其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物。依照本专利技术的人抗体和功能性部分能够结合处于其天然背景中的葡萄球菌属物种，使得在施用所述抗体、其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物时抵抗各种葡萄球菌属物种。所述人抗体，其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物因此特别适合于治疗或预防此类葡萄球菌属物种所致感染。与嵌合抗体相比，所述依照本专利技术的人抗体、其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物更加适合于人个体的治疗和/或预防用途，原因在于非人序列的缺失。这显著降低不利副作用的风险。依照本专利技术的一种特别优选的抗体是称作“F1”的抗体，其具有图I所示重链和轻链可变域序列。如本文中使用的，术语“F1”涵盖所有Fl抗体，例如分离的或重组生成的Fl0重组生成的Fl在本文中也称作“rFl”。Fl的⑶R序列对Fl的抗原结合特性做出特别贡献，它们也描绘于图I。抗体Fl是完全人的，能够特异性结合葡萄球菌属物种诸如金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，而且因此是人个体的治疗用途优选的。重要地，抗体Fl能够在体内以及在体外结合完整细菌。因此进ー步提供一种分离的或重组的能够特异性结合金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的人抗体或其功能性部分。另外，抗体Fl能够结合已经在例如动物的受感染组织中生长的细菌。因此提供ー种分 离的结合体内生长的金黄色葡萄球菌的抗体，其中“体内生长”定义为在金黄色葡萄球菌感染期间在动物的受感染组织中生长。还提供一种分离的、重组的或合成的免疫球蛋白链或其功能性等同物，其包含对金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌特异性的人免疫球蛋白可变区的至少ー种⑶R序列。抗体的功能性部分定义为在性质上，不必在数量上，与所述抗体具有至少ー种共享持性的部分。所述功能性部分能够与所述抗体结合相同抗原，虽然不必以相同的程度。抗体的功能性部分优选包含单域抗体、单链抗体、纳米抗体、unibody、单链可变片段(scFv)、Fab片段或F (ab' )2片段。抗体的功能性部分也可以这样制备，即通过改变抗体，使得所得化合物的至少ー种特性(优选抗原结合特性)，在性质上，不必在数量上，基本相同。这以多种方式进行，例如经由保守氨基酸替代，其中一个氨基酸残基用另ー种具有大体相似特性(大小、疏水性、等)的残基替代，使得总体功能很可能没有受到严重影响。如技术人员公知的，抗体的重链是构成免疫球蛋白分子的两类链中较大的。重链包含多个恒定域和一个可变域，该可变域涉及抗原結合。抗体的轻链是构成免疫球蛋白分子的两类链中较小的。轻链包含一个恒定域和一个可变域。该可变域与重链的可变域一起參与抗原結合。互补决定区(CDR)是重链可变域和轻链可变域中存在的高变区。抗体的重链和所连接的轻链的CDR —起形成抗原结合位点。免疫球蛋白链的功能性等同物在本文中定义为包含免疫球蛋白链的至少ー种CDR序列的人造结合化合物。由于本专利技术认识到图I所示⑶R序列提供期望结合特征，因此技术人员完全能够生成包含至少ー种改变的CDR序列的变体。例如，应用保守氨基酸替代。也可能改变图I所示至少ー种CDR序列以生成与Fl相比具有至少ー种改变的特性的变异抗体或其功能性部分。优选地，提供如下抗体或功能性部分，其包含与图I所示⑶R序列至少70%相同的⑶R序列，使得Fl的有利结合特征至少部分維持或甚至改迸。优选改变图I所示CDR序列，使得所得抗体或功能性部分包含至少ー种与Fl相比改良的特性，诸如例如改良的结合亲和力、选择性和/或稳定性。包含与图I所示CDR序列至少70%相同的氨基酸序列的变异抗体或其功能性部分因此也在本专利技术的范围内。本领域中有多种方法可用于改变氨基酸序列。例如，人工合成具有期望⑶R序列的重链或轻链序列。优选地，突变编码⑶R序列的核酸序列，例如使用随机或定点诱变。在一个实施方案中，本专利技术因此提供ー种抗体或其功能性部分或免疫球蛋白链或其功能性等同物，其包含-重链⑶Rl序列，其包含与序列RFAMS(SEQID NO 1)具有至少70%序列同一性的序列，和/或-重链CDR2序列，其包含与序列SINNGNNPYYARSVQY(SEQID NO 2)具有至少70% 序列同一性的序列，和/或-重链CDR3序列，其包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T博蒙特，MJ克瓦肯博斯，EJ布朗，JH莫里萨基，WLW哈曾博斯，S马里亚撒桑，K卡吉哈拉，Y夏，
申请(专利权)人：AIMM医疗股份公司，基因泰克公司，
类型：发明
国别省市：