黑素瘤中的GNA11突变制造技术

本发明专利技术提供了在黑素细胞瘤中检测GNA11基因的突变的方法，用于诊断和预后目的。本发明专利技术还提供了通过调节突变的GNA11基因的活性治疗这种黑素细胞瘤的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】黑素瘤中的GNA11突变相关申请的交叉引用本申请要求于2009年10月30日提交的美国临时申请61/256，885的权益，该申请被通过引用并入本文。关于在联邦政府资助的研究或开发中完成的专利技术的权利声明本专利技术的完成得到了在国立卫生研究院授予的ROl CA131524-01A1号基金下的政府支持。政府享有本专利技术的某些权利。
技术介绍
黑素瘤形成的现有模式是黑素细胞通过关键性黑素瘤基因的累积突变从正常状态发展为恶性状态。參见 Meier, F.，et al. (1998) Frontiers in Bioscience3:D1005-1010o黑素瘤能够自发地发生或发生在已有的疲(nevus)或痦子(mole)内。疲具有已知的黑素瘤基因的突变，因此是发展为黑素瘤的危险因素。參见，例如，Pollock, P.M. , et al, (2003) Nat. Genet. 33 (I) : 19-20; Kumar, R. et al, (2004) J. Invest. Dermatol122(2):342-348;Chin, L. , (2003)Nat. Rev. Cancer 3(8):559-570。已经表明，人黑素瘤和黑素细胞痣的大多数具有BRAF、NRAS, C-KIT或HRAS基因的活化突变。而且，最近的研究已经证明黑素瘤从遗传学角度分为不同的组，这些组在MAP-激酶通路活化频率方面具有显著差异。參见，Curtin，J.A.，et al, (2005) N EnglJ Med. 353(20): 2135-47。ー种类别为葡萄膜黑素瘤，其起源于眼部的脉络膜丛内的黑素细胞，并且在生物学上与特征为细胞遗传改变的皮肤黑素瘤明显不同。參见，Horsman etal. (1993)Cancer 71 (3) :811。另ー类别是皮内黑素细胞增殖，其可以是先天性的或后天性的，并且以从离散的蓝色痦子(蓝痣)到大蓝灰色斑块的不同方式存在，所述斑块影响结膜和眶周皮肤(太田痣(nevus of Ota))、肩部(伊藤痣(nevus of Ito))和下背部(蒙古斑(Mongolain spot))。參见，Zembowicz, et al. (2004) Histopathology 45(5) :433。这些皮内黑素细胞增殖不包含BRAF或NRAS突变，并因此与其他痣和黑素瘤比较时具有独特的病因学。參见，Ariyanayagam-Baksh SM, et al, (2003)Am J Dermatopathol. 25(1) :p. 21-7 葡萄膜黑素瘤是起源于眼部的脉络膜丛、睫状体或虹膜上皮中的黑素细胞的黑素细胞瘤(例如，Singh, et al, Ophthalmol Clin North Aml8:75-84，viii, 2005)。在侵袭性更强的亚型中，有诸如单体3、三体8的进ー步的基因改变以及向肝脏转移的强倾向性(Singh, et al, Ophthalmol Clin North Am 18:75-84,viii, 2005, Horsman&ffhite, Cancer71:811-9, 1993)。葡萄膜黑素瘤侵袭性強，5年疾病特异性生存率约为70%(例如，Chang etal, Cancer 83:1664-78，1998)。葡萄膜黑素瘤的一个危险因子是存在于结膜和眶周皮肤中的蓝灰色色素沉着过度，称为太田疲(Singh et al, Ophthalmology 105:195-8, 1998).(1998)Am J Dermatopathol. 20:109-110)。最近，小鼠中的大規模诱变筛选鉴定了几种黑皮肤(Dsk)突变体。參见VanRaamsdonk CD, et al, (2004) Nat Genet. 36:961-968。这些突变体中的ー些具有黑素细胞表型，具有类似蓝痣的皮内黑素细胞的稀疏的细胞増殖。该突变已被证明是G-蛋白a亚単位突变的結果。、G蛋白代表在哺乳动物中发现的异源三聚体蛋白的一大家族，其由阿尔法(a)、贝它(￠)和伽玛(Y )亚单位组成。參见，Wettschureck, N. A. 0. S.，(2005) Physiol.Rev. 85(4) :1159-1204。G-a q是多种G-a亚单位中的ー种，其通过结合和水解GTP介导对磷脂酶C3 的刺激。參见，Markby, D.W.，et al, (1993) Science 262 (1541) : 1895-1901。已假设G-a q的活化促进黑素细胞在皮肤中的存活。參见，Van Raamsdonk, C. D. , et al, (2004)。这与在小鼠中的以下观测是一致的G-aq的多度活跃增加成黑素细胞，即不成熟的黑素细胞迁移到皮肤中的数目，而不增加它们的有丝分裂率。參见，Van Raamsdonk, C. D. , etal, (2004)。GNAQ(—种异源三聚体G蛋白a亚单位)的体细胞致癌性突变已经在多种黑素细胞瘤，包括蓝痣和葡萄膜黑素瘤(W0 2008/098208)等中被鉴定。小鼠中GNAll在氨基酸水平与GNAQ有90% —致性，并且在色素沉着方面与GNAQ共享重叠功能。本专利技术部分基于以下发现，黑素细胞瘤包括葡萄膜黑素瘤中存在GNAll的突变。专利技术简述本专利技术提供了检测生物样品中黑素瘤细胞或痣细胞的方法。该方法包括检测生物样品中GNAll基因的活化序列突变，所述生物样品包含来自患者的疑似黑素瘤细胞或痣细胞，或者包含来自患者的已知为黑素瘤细胞或疲细胞的细胞。例如，本专利技术提供了通过检测GNAll基因或由该基因编码的产物中突变的存在，或者通过检测GNAll的过表达来检测黑素瘤的方法，或者检测痣的方法，所述黑素瘤例如原发性或转移性葡萄膜黑素瘤，所述痣例如诸如恶性蓝痣、细胞型蓝痣、普通型蓝痣的蓝痣、伊藤痣或太田痣。所述方法可以用于诊断和预后指示以及用于鉴定以下黑素瘤患者对靶向GNAll通路的各种处理疗法(诸如G-a拮抗剂)或者靶向下游信号组分的疗法(诸如蛋白激酶C抑制剂)的反应或者可能的反应。本专利技术还提供了治疗黑素瘤或痣的方法，包括给予患有来源于GNAll基因突变的黑素瘤(例如葡萄膜黑素瘤或恶性蓝痣)，或者痣(例如蓝痣)的患者GNAll抑制剂，例如小分子、抗体、或者诸如siRNA的核酸抑制剂。因此，本专利技术提供了检测生物样品如皮肤或眼部样品中黒素细胞瘤的方法，所述生物样品包含来自患者，例如患有或疑似患有黑素瘤的患者的黑素瘤细胞，该方法包括检测存在于生物样品中的黑素瘤或痣细胞的GNAll活化突变，其中GNAll活化突变的存在指示黑素细胞瘤的存在。在一些实施方案中，黑素细胞瘤是葡萄膜黑素瘤。在其他实施方案中，GNAll突变指示痣，诸如蓝痣或也称为恶性蓝痣的发生在蓝痣中的黑素瘤。在一些实施方案中，检测步骤包括检测核酸例如mRNA或基因组DNA中是否存在GNAll突变。在典型的实施方案中，这种检测步骤包括特异性扩增GNAll的扩增反应，诸如PCR或者RT-PCR，以及利用能与靶GNAll序列杂交的探针或者通过测序扩增的GNAll对突变进行检測。在其他实施方案中，检测步骤包括检测GNAll蛋白的突变，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.30 US 61/256,8851.检测来自患者的生物样品中的黑素细胞瘤细胞的方法，其中所述样品包含黑素细胞，所述方法包括 检测所述生物样品中是否存在GNAll基因的活化突变，由此如果存在所述活化突变，检测所述生物样品中存在黑素细胞瘤细胞。2.如权利要求I所述的方法，其中所述黑素细胞瘤细胞是葡萄膜黑素瘤细胞。3.如权利要求I所述的方法，其中所述黑素细胞瘤细胞是蓝痣细胞。4.如权利要求I至3中任一项所述的方法，其中序列突变位于GNAll的编码Gln209的密码子处。5.如权利要求4所述的方法，其中所述突变是Q209L或Q209P取代。6.如权利要求I至4中任一项所述的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述生物样品的核酸样品中是否存在所述突变。7.如权利要求6所述的方法，其中所述检测步骤包括扩增反应。8.如权利要求6或权利要求7所述的方法，其包括确定所述GNAll基因的突变区的序列。9.如权利要求6或权利要求7所述的方法，其中所述检测步骤包括使所述核酸样品与探针接触，以及检测杂交的探针的存在，由此检测所述序列突变，所述探针能与所述GNAll基因选择性杂交。10.如权利要求I至4中任一项所述的方法，其中所述检测步骤包括检测由所述基因编码的蛋白的突变。11.如权利要求I至10中任一项所述的方法，其中所述生物样品是眼部样品或皮肤样品。12.如利要求I至10中任一项所述的方法，其中所述生物样品来自淋巴结、肺脏、肝脏、肾上腺、软组织或骨。13.如利要求I至12中任一项所述的方法，其中所述生物样品来自己经被诊断为黑素瘤的患者。14.如利要求13述的方法，其中所述黑素瘤起源干葡萄膜。15.如利要求13述的方法，其中所述黑素瘤起源于蓝痣。16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括检测GNAQ基因中是否存在活化突变。17.监测经历治疗的患者中黒素瘤进展的方法，所述方法包括检测来自所述患者的生物样品中具有GNAll基因活化突变的黑素瘤细胞的数目变化，其中具有GNAll突变的细胞的数目变化指示患者对所述治疗的反应。18.如权利要求17所述的方法，其中所述生物样品来自眼部或皮肤。19.如权利要求17所述的方法，其中所述生物样品来自血液、淋巴结、肝脏、肺脏、肾上腺或骨。20.如权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。21.如权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述黑素瘤是恶性蓝痣。22.抑制具有GNAlI活化突变的黑素瘤细胞増殖的方法，所述方法包括使GNAl I拮抗剂与具有GNAll活化突变的黑素瘤细胞接触。23.如权利要求22所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍里斯·C·巴斯蒂安，凯瑟琳·D·万拉姆斯东科，格雷戈里·S·巴什，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，不列颠哥伦比亚大学，莱兰斯坦福初级大学评议会，
类型：发明
国别省市：