松弛素肽合成制造技术

一种用于生产胰岛素型肽如松弛素的方法，包括氧化具有半胱氨酸残基的B链上的甲硫氨酸残基，以及使B链与具有半胱氨酸残基的A链结合以形成具有分子间二硫键和生物活性的肽。公开了新的合成松弛素1和甲硫氨酸氧化的松弛素以及溶解性提高的Met(O)B链。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肽合成，特别是肽激素的合成。本专利技术尤其涉及胰岛素家族肽的合成，特别是松弛素(relaxin)的合成。
技术介绍
松弛素(RLX)由FrederickHisaw[Hisaw, F. (1926) Experimental relaxation of the pubic ligament of the guinea pig. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 23,661-663]于 1926年发现，其作为能够松弛骨盆韧带并调节雌性生殖道功能的底物。松弛素家族的肽类包括松弛素-I (RLXl)、松弛素-2 (RLX2)和松弛素_3 (RLX3)。松弛素肽类属于较大家族的胰岛素样肽类(insulin like peptides，INSL)。该肽家族包括胰岛素和胰岛素样肽3、4、5和6。这些肽类具有高度的结构相似性。除雌性生殖道功能以夕卜，已知松弛素参与一系列的医疗病症(medicalconditions)，例如其参与心脏保护，如在 Samuel，C. S. and Hewitson，T. D. (2006)Relaxinin cardiovascular and renal disease ；Kidney Int.69，1498—1502 ;Bani， D. ， Nistri，S. ， Bani Sacchi, T.and Bigazzi, M. (2005)Basic progress and future therapeuticperspectives of relaxin in ischemic heart disease. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1041，423-430 ；SamueI, C. S.，Du，X. J.，Bathgate，R. A. D. and Summers, R. J. (2006) “Relaxin”thestiffened heart and arteries the therapeutic potential for relaxin in thetreatment of cardiovascular di sease.Pharmacol. Ther. 112，529—552 ;Dschietzig，T.，Bartsch，C.，Baumann，G. and Stangl, K. (2006) Relaxin-a pleiotropic hormoneand its emerging role for experimental and clinical therapeutics. Pharmacol.Ther. 112，38-56 中所公开的；其参与纤维变性，如在 Bathgate，R. A. D.，Hsueh，A. J. andSherwood，0. D. (2006)Physiology and molecular biology of the relaxin peptidefamily. In Physiology of Reproduction. (Knobil，E. and Neill, J. D.，Eds)，679-770.Elsevier, San Diego ；Sherwood, 0. D. (2004)Relaxins physiological roles and otherdiverse actions. Endocr. Rev. 25, 205-234 ；Samuel, C. S. (2005) Relaxin antifibroticproperties and effects in models of disease.Clin. Med. Res. 3,241-249 中所公开的；其参与过敏反应，如在 Bani, D. (1997) Relaxin apleiotropic hormone. Gen.Pharmacol. 28，13-22.中所公开的;其参与癌症，如在 Silvertown, J. D.，Summerlee,A. J. and Klonisch, T. (2003)Relaxin-Iike peptides in cancer. Int. J. Cancer 107，513-519 ；Kamat, A. A.，Feng, S.，Agoulnik，I. U.，Kheradmand，F.，Bogatcheva，N. V.，Coffey, D.，Sood，A. K.and Agoulnik，A. I. (2006)The role of relaxin in endometrialcancer. Cancer Biol. Ther. 5，71-77中所公开的；且其参与创伤愈合，如在Yamaguchi，Y. and Yoshikawa, K. (2001)Cutaneous wound healing an update. J. Dermatol. 28,521-534 ；113 Wyatt, T. A. , Sisson, J. H. , Forget, M. A. , Bennett, R. G. , Hamel, F. G. andSpurzem,J. R. (2002)Relaxin stimulates bronchial epithelial cell PKA activation,migration, and ciliary beating, Exp.Biol. Med. (Maywood)227,1047-1053 ；Casten,G. G. and Boucek, R. J. (1958)Use of relaxin in the treatment of scleroderma. J. Am.Med. Assoc. 166,319-324 中所公开的。RLX2其他的治疗应用被认为与它控制胶原更新(collagen turnover)的能力有关，如在 Samuel CS, Hewitson TD, Unemori EN, Tang ML, Cell Mol Life Sci. 2007,64,1539-57. Drugs of the future :the hormone relaxin 中所公开的。RLX2潜在地具有宽范围的治疗应用，对于其在研究和用于治疗目的的应用，存在着显著的需求。由于对生产或分离其他松弛素存在着困难，因此它们的治疗潜能没有得到普遍研究。RLX具有两个肽链，通常称为A链(RLXA)和B链(RLXB)。这些链(A链和B链)通过两个分子间半胱氨酸桥连接，并且链A包含另外的分子内二硫键。链的构象排布是松弛素，尤其是RLXl和RLX2的重要特征，并且两个链必须通过适当的二硫键连接，以显示出适当的生物活性。此外，RLXB通常在水溶液中高度不溶。RLXB的不溶性和确保形成适当二硫键的需要意味着通过随机链结合的合成是非常困难的，并且使得RLXB如通过色谱方法的纯化非常困难，如在 J.-G. Tang et al, Biochemistry 2003，42，2731-2739 ；ffade, J. D.,和 Tregear, G. ff. (19本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.06.01 GR 200901003101.一种用于生产具有至少两条肽链，A和B，的胰岛素型肽的方法， 链A和链B通过至少一个二硫键连接，所述方法包括 提供肽链A和链B，其中，每条链包含至少一个半胱氨酸残基且每条链可选地具有分子内二硫键，并且链B包含氧化的甲硫氨酸残基； 在使得形成至少一个分子间二硫键的条件下，使链A和链B结合，以使链A和链B连接在一起；以及 使所述氧化的甲硫氨酸残基还原以产生所述胰岛素型肽。2.根据权利要求I所述的方法，其中，所述胰岛素型肽为松弛素。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述松弛素为松弛素I或松弛素2，并且链A为松弛素A链且链B为松弛素B链,并且其中,在与链A结合后 链B的至少一部分不具有分子内二硫键；或 存在还原剂，以还原链B的分子内二硫键。4.根据权利要求3所述的方法，其中，存在还原剂且所述还原剂选自具有游离半胱氨酸残基的链A和具有游离半胱氨酸残基的链B。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述还原剂包含具有游离半胱氨酸残基的链B。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，链B具有游离半胱氨酸基团且链A具有分子内二硫键。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述肽为选自松弛素I和松弛素2的松弛素，并且链A具有两个分子内二硫键，且链B的至少一部分不具有分子内二硫键。8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中，所述松弛素为人松弛素1，且所述B链为Met (O) 24RLXlB或人松弛素2，且所述B链为Met (0) 25RLX2B。9.一种用于生产松弛素的方法，包括 提供具有至少一个分子内二硫键的松弛素A链，以及松弛素B链，其中所述B链的至少一个甲硫氨酸残基被氧化，所述B链可选地包含分子内二硫键； 在使得所述A链和所述B链之间形成至少一个分子间二硫键的条件下，使所述A链和所述B链结合，以将所述链连接在一起；以及 使所述氧化的甲硫氨酸残基还原，以产生所述松弛素。10.一种合成生产的、分离的人松弛素1，和其药用盐、衍生物或前药。11.一种用于生产具有至少两条肽链，A和B，的胰岛素型肽的方法，链A和链B通过至少一个二硫键连接并且链B具有至少一个氧化的甲硫氨酸残基，所述方法包括 提供肽链A和链B，每条链包含至少一个半胱氨酸残基并且链B包含氧化的甲硫氨酸残基; 在使得链A中的至少一个半胱氨酸残基和链B中的至少一个半胱氨酸残基结合的条件下，使链A和链B结合，以使所述链连接在一起，从而产生具有氧化的甲硫氨酸残基的所述胰岛素型肽。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述包含甲硫氨酸氧化物的松弛素，通过使以下链结合 线性松弛素A链和线性松弛素B链； 线性松弛素A链和环状松弛素B链；或单环或双环松弛素A链和线性松弛素B链；以及 氧化得到的产物而产生。13...

【专利技术属性】
技术研发人员：科尔奥梅尼斯·K·巴洛斯，
申请(专利权)人：帕特拉斯化学与生物制药实验室，
类型：发明
国别省市：