氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒技术

本发明专利技术涉及利用酶比色法及酶联法技术的氨(氨离子)含量的测定方法、试剂的组成及成分，其测定的技术原理是依据氨激酶、生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2-加双氧酶的系列催化反应完成，本发明专利技术还涉及一种氨(氨离子)诊断/测定试剂盒。本发明专利技术的测定方法灵敏度高、误差小，因此本发明专利技术的测定方法与试剂盒可以广泛地应用于临床医学/食品检验。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学/食品检验測定
，更具体地，本专利技术涉及氨(氨离子)诊断/測定方法及其试剂盒。
技术介绍
氨测定的方法有微量扩散法、离子交換法、酶法和氨电极法等。目前应用最多的方法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。扩散法是标本碱化后，释放出NH3，用酸滴定释放出的氨，或用Nessler反应形成棕黄色碘化双汞胺进行比色。这些方法需要碱化，内源性的氨形成造成影响，使其准确性和精密度受到影响，目前已很少应用；离子交換法比扩散法更准确，CV为8% 13% ;离子选择电极法是利用NH3扩散到电极表面，引起电极的pH发生变化进行測定，该方法的CV为3.5% 4. 8%，回收率高。结合具体实际，应以酶法测定为实用。检索中国专利，仅查出87105593. 7专利申请公开了ー种血氨测定速冻杯，却未发现比较理想的血氨测定方法。
技术实现思路
[要解决的技术问题]本专利技术的目的是提供ー种氨(氨离子)的测定方法。本专利技术的另ー个目的是提供ー种氨(氨离子)诊断/測定试剂盒。[技术方案]本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术的方法是一种采用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)与酶(偶)联法(Couple Reaction)的联用技术，利用测定还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处的吸光度变化测定氨(氨离子)的方法。本专利技术氨(氨离子)測定方法的的技术原理是根据下述氨激酶、生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2_加双氧酶的系列催化反应完成氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷ニ磷酸+磷酰胺腺苷ニ磷酸+磷酸根+羧基生物素-羧基-携帯蛋白生物素羧化酶腺苷三磷酸+生物素-羧基-携帯蛋白+ ニ氧化碳ニ氧化碳+儿茶酚+辅酶+氯氯苯甲酸-1，2_加双氧酶2-氯苯甲酸 +还原型辅酶+氧本专利技术的方法利用氨激酶(ammonia kinase ；EC 2. 7. 3· 8)酶(偶)联生物素羧化酶(biotin carboxylase ；EC 6.3.4. 14)、氯苯甲酸-1, 2_ 加双氧酶(f Chlorobenzoatel,2-dioxygenase ；EC I. 14. 12. 13)酶促反应比色终点法。氨激酶酶解氨反应产生腺苷ニ磷酸，再通过(偶)联合生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2_加双氧酶的作用，最終将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度，这样可以通过測量340nm处吸光度上升的程度，可以测算氨(氨离子)的浓度大小。本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术涉及ー种氨(氨离子)的测定方法。该氨(氨离子)测定方法的步骤如下A、样品准备 A. I标准样品的制备将一定量的氨盐溶于水或缓冲液中，再将氨浓度调整到100微摩尔/升，得到的溶液作为标准样品；A. 2待测样品的制备待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中；A. 3空白样品所述的水或缓冲液作为空白样品，其氨(氨离子)浓度为O微摩尔/升；B、试剂溶液的制备分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶、氨激酶、生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2_加双氧酶、腺苷三磷酸、羧基生物素-羧基-携帯蛋白、单价磷酸盐、儿茶酚与氯，然后将它们混合均匀，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、O. 001-7mol/L、0. l_2mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-lOOmmol/し 1 -1 OOmmol /し 1 ~1 OOmmol /し 1 ~1 OOmmol /I,与 1 ~1 OOmmol /T,；C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45°C下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm (如果受仪器限制可以不设副波长)下进行測定，測定其吸光度随时间的变化；D、在与步骤C)同样的条件下測定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化；E、在与步骤C)同样的条件下測定在步骤A)空白样品的吸光度随时间的变化；F、数据处理由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到氨的含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ー种利用酶比色法及酶联法技术的氨(氨离子)浓度測定方法，其測定的技术原理是根据下述氨激酶、生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2-加双氧酶的系列催化反应完成 氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷ニ磷酸+磷酰胺 腺苷ニ磷酸+磷酸根+羧基生物素-羧基-携帯蛋白生物素羧化酶 腺苷三磷酸+生物素-羧基-携帯蛋白+ ニ氧化碳 ニ氧化碳+儿茶酚+辅酶+氯氯苯甲酸-1，2_加双氧酶2-氯苯甲酸 +还原型辅酶+氧2.ー种氨(氨离子)的測定方法，其特征在于该方法的步骤如下 2. I样品准备 2. I. I标准样品的制备 将一定量的氨盐溶于水或缓冲液中，再将其浓度调整到100微摩尔/升； 2. I. 2待测样品的制备 待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一祥溶于水或缓冲液中； 2. I. 3空白样品 所述的水或缓冲液作为空白样品，其氨(氨离子)浓度为O微摩尔/升； 2. 2试剂溶液的制备 分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶、氨激酶、生物素羧化酶、氯苯甲酸-1，2_加双氧酶、腺苷三磷酸、羧基生物素-羧基-携帯蛋白、单价磷酸盐、儿茶酚与氯，然后将它们混合均匀，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、0. 001-7mol/L、0.l-2mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-lOOmmol/L、1-lOOmmol/1,、1-1 OOmmol /I,、1 ~1 OOmmol /T,与 1 ~1 OOmmol /T,； 2.3待测样品与在步骤2. 2)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45°C下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制，可以不设副波长)下进行測定，測定其吸光度随时间的变化； 2.4在与步骤2. 3)同样的条件下測定步骤2. I. I)标准样品的吸光度随时间的变化； 2.5在与步骤2. 3)同样的条件下測定在步骤2. I. 3)使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化； 2.6数据处理 由步骤2. 3-2. 5)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到氨的含量 ΔΑ (样品)-ΛΑ(空白) 氨含量 =-X标准浓度(μπιοΙ/L ) ΔΑ (标准)-ΛΑ(空白) 式中 ΛΑ(样品)表示步骤2. 3)得到的待测样品的吸光度变化； Λ A(空白)表示步骤2. 5)得到的空白溶液的吸光度变化； ΛA(标准)表示步骤2. 4)标准样品的吸光度变化。3.根据权利要求1、2所述的測定方法，其特征在于使用全自动生化分析仪测定时，待测样品、所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下自动取样，然后在下述条件下进行測定測定方法为终点法，温度37°C，反应时间10分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨样品与试剂的体积比例为I /10-1 /500，反应方向为正反应，延迟时间1/0分钟，检测时间4/5分钟。4.根据权利要求I、2或3所述的測定方法，其特征在于，所述的稳定剂是ー种或多种选自氯化钠、こニ醇、丙ニ醇、甘油或双こ酸钠、叠氮钠等防腐剂的稳定剂；所述的缓冲液是一种或多种选自三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、磷酸氢ニ钠-柠檬酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、ニこ醇胺缓冲液或“PBS”缓冲液的缓冲液所述的辅酶是ー...

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：