2型糖尿病的标记蛋白制造技术

本发明专利技术提供用于早期检测II型糖尿病的标记蛋白，针对所述标记蛋白的抗体，和它们在用于II型糖尿病的诊断方法和药物开发中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】2型糖尿病的标记蛋白本专利技术提供用于早期检测II型糖尿病的诊断标记蛋白，针对所述标记蛋白的抗体和它们在II型糖尿病的诊断方法和药物开发中的应用。2型糖尿病(Type 2 diabetes)(非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM))是这样的病症，其特征在于在胰岛素抵抗和相对胰岛素缺乏的背景下的高血糖。估计在美国有2360万人(人口的7. 8% )患有糖尿病，被诊断的有1790万人，其中90%的是2型。随着1990至2005年间流行率加倍，CDC(疾病控制和预防中心(Centers for Disease Control andPrevention))已经将该增长表征为流行性的。因此，存在对允许早期检测II型糖尿病的诊断标记和方法的需求。在第一个目的中，本专利技术涉及用于诊断II型糖尿病或用于确定个体发展 II型糖尿病的素因的方法，其包括下述步骤测量所述个体的组织样品中嗅介蛋白4(0LFM4)的多肽水平，其中，与代表健康群体的0LFM4多肽水平相比，所述个体的所述样品中0LFM4多肽的降低的水平指示II型糖尿病或发展II型糖尿病的素因(predisposition)。在一个优选的实施方案中，所述组织是血液，优选血浆。在第二个目的中，本专利技术提供鉴别用于治疗II型糖尿病的化合物的方法，其包括下述步骤a)将所述化合物施用给患有II型糖尿病的非人动物，b)测量步骤a)的非人动物的组织样品中0LFM4多肽水平，其中与没有被施用化合物的患有II型糖尿病的非人动物的组织样品中0LFM4多肽水平相比，步骤a)的非人动物的组织样品中改变的0LFM4多肽水平指示用于治疗II型糖尿病的化合物。在一个优选的实施方案中，所述组织是血液，优选血浆.在另一个优选的实施方案中，所述非人动物是啮齿动物,优选小鼠或大鼠,更优选DIO小鼠，ob/ob小鼠或ZDF大鼠。在第三个目的中，本专利技术涉及0LFM4多肽用于诊断II型糖尿病或用于确定个体发展II型糖尿病的素因的应用。在一个优选的实施方案中，所述0LFM4多肽是人0LFM4多肽。人0LFM4的氨基酸序列公开于Seq. Id. No. I。在第四个目的中，本专利技术提供特异性结合0LFM4多肽的抗体用于诊断II型糖尿病或用于确定个体发展II型糖尿病的素因的应用。在一个优选的实施方案中，所述抗体结合人0LFM4多肽.在第五个目的中，本专利技术涉及用于诊断II型糖尿病或确定个体中发展II型糖尿病的素因的试剂盒，其包含a)对0LFM4多肽特异性的抗体，优选本专利技术的抗体，b)结合被a)的抗体捕获的0LFM4的标记抗体(labeled antibody),或结合a)的抗体的标记抗体，和c)用于进行诊断测定的试剂。在一个优选的实施方案中，所述对0LFM4多肽特异性的抗体结合人0LFM4多肽。本专利技术的方法可用于监测进行糖尿病疗法的患者中II型糖尿病疗法的应答，其通过测量这些患者的组织样品(优选血液样品)中的0LFM4多肽水平来进行。与所述疗法开始时0LFM4多肽水平相比，在治疗过程中的组织样品中显示改变的0LFM4多肽水平的患者对所述糖尿病疗法有应答。在另一个目的中，本专利技术涉及针对人0LFM4多肽的单克隆抗体。在一个优选的实施方案中，所述抗体是这样的抗体，其包含能够从选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系获得的抗体的￥11结构域的CDR1-CDR3 0LFM4 2/3 (DSM ACC3012)，0LFM4 1/46(DSM ACC301I)， 0LFM4 2/1(DSM ACC3013), 0LFM4 2/14(DSM ACC3014),0LFM4 2/28 (DSM ACC3015)和 0LFM4 1/23 (DSMACC3010)，和能够从选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系获得的抗体的\结构域的CDR1-CDR3 0LFM42/3 (DSM ACC3012)，0LFM41/46(DSM ACC3011),0LFM4 2/1(DSMACC3013),0LFM4 2/14(DSM ACC3014)，0LFM4 2/28(DSMACC3015)和 0LFM4 1/23(DSM ACC3010)。在另一个优选的实施方案中，所述抗体是嵌合抗体，其包含能够从选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系获得的抗体的Vh结构域和\结构域0LFM4 2/3 (DSM ACC3012)，0LFM4 1/46(DSM ACC3011), 0LFM4 2/1(DSM ACC3013)， 0LFM4 2/14(DSM ACC3014)， 0LFM42/28(DSMACC3015)和 0LFM4 1/23(DSM ACC3010)。在另一个优选的实施方案中，所述抗体由选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系产生0LFM4 2/3 (DSM ACC3012)，0LFM4 1/46 (DSM ACC3011), 0LFM4 2/1 (DSM ACC3013)，0LFM4 2/14(DSM ACC3014)，0LFM4 2/28(DSM ACC3015)和 0LFM4 1/23(DSM ACC3010)。用于检测和/或测量生物学样品中的多肽的方法是本领域熟知的，包括但不限于蛋白质印迹，ELISAs或RIAs，或各种蛋白组学技术。可以产生用于检测多肽或肽片段目的的识别0LFM4多肽/其片段的单克隆或多克隆抗体或其肽片段(例如通过用纯化的蛋白免疫兔来产生)，或者可以使用识别所述多肽或肽片段的已知抗体。例如，能够结合变性蛋白的抗体(如多克隆抗体)可用于在蛋白质印迹中检测0LFM4多肽/其片段。用于测量标记的方法的一个实例是ELISA。这种类型的蛋白定量是基于能够捕获特异性抗原的抗体，和能够检测被捕获的抗原的第二抗体。用于制备和使用抗体的方法和上文提及的测定法描述于 Harlow, E.和 Lane, D. Antibodies ALaboratory Manual,(抗体实验室手册)(1988)，Cold Spring Harbor Laboratory Press (冷泉港实验室出版社)中。在另一个目的中，本专利技术提供检测组织样品中胰腺￠-细胞的方法，其包括a)提供个体或非人动物的胰腺组织样品，b)检测a)所述的组织样品中的0LFM4阳性细胞，其中所述0LFM4阳性细胞是￠-细胞。在一个优选的实施方案中，所述0LFM4阳性细胞通过0LFM4特异性的抗体检测，所述抗体优选本专利技术的抗体。 用于检测人个体或非人动物的组织样品中的P -细胞的方法可用于评估II型糖尿病疗法对胰腺生理学/组织学的作用。例如，在开发用于治疗II型糖尿病的化合物的过程中，本专利技术的检测0-细胞的方法可用于评估所述化合物是否对胰腺的生理学/组织学有作用，即，该化合物是否能够逆转II型糖尿病动物模型中II型糖尿病对胰腺的一些作用。在另一个目的中，本专利技术提供用于检测胰腺组织样品中的细胞的试剂盒，其包含a)对0LFM4多肽特异性的抗体，优选本专利技术的抗体，b)结合a)所述抗体的标记抗体或对0LFM4多肽特异性的标记抗体，和c)用于进行免疫组织化学测定的试剂。多肽嗅介蛋白4(Olfactomedin 4，0LFM4)的同义词是 hGC_l 和 GW112。术语“多肽”用于本文中时是指氨基酸的聚合物，而不是指具体长度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.11.26 EP 09177238.41.用于诊断II型糖尿病或确定个体发展II型糖尿病的素因的方法，其包括下述步骤 测量所述个体的组织样品中嗅介蛋白4(0LFM4)多肽水平，其中与代表健康群体的0LFM4多肽水平相比，所述个体的所述样品中降低的0LFM4多肽水平指示II型糖尿病或发展II型糖尿病的素因。2.权利要求I的方法，其中所述组织是血液，优选血浆。3.鉴别用于治疗II型糖尿病的化合物的方法，其包括下述步骤 c)将所述化合物施用给患有II型糖尿病的非人动物， d)测量步骤a)的非人动物的组织样品中0LFM4多肽水平，其中与没有被施用化合物的患有II型糖尿病的非人动物的组织样品中0LFM4多肽水平相比，步骤a)的非人动物的组织样品中改变的0LFM4多肽水平指示用于治疗II型糖尿病的化合物。4.权利要求3的方法，其中所述组织是血液，优选血浆。5.权利要求3或4的方法，其中所述非人动物是啮齿动物，优选小鼠或大鼠。6.权利要求5的方法，其中所述啮齿动物是ZDF大鼠或ob/ob小鼠。7.0LFM4多肽用于诊断II型糖尿病或用于确定个体发展II型糖尿病的素因的应用。8.权利要求7的应用，其中所述0LFM4多肽是人0LFM4多肽。9.特异性结合0LFM4多肽的抗体用于诊断II型糖尿病或用于确定个体发展II型糖尿病的素因的应用。10.权利要求9的应用，其中所述抗体结合人0LFM4多肽。11.用于诊断II型糖尿病或确定个体中发展II型糖尿病的素因的试剂盒，其包含 d)对0LFM4多肽特异性的抗体，优选权利要求13-16的抗体， e)结合a)所述抗体的标记抗体，或结合a)的被捕获的0LFM4多肽的标记抗体，和 f)用于进行诊断测定的试剂。12.权利要求11的试剂盒，其中所述对0LFM4多肽特异性的抗体结合人0LFM4多肽。13.针对人0LFM4多肽的单克隆抗体。14.权利要求13的抗体，其中所述抗体包含能够从选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系获得的抗体的 Vh 结构域的 CDR1-CDR3 :0LFM4 2/3 (DSM ACC3012)，0LFM4 1/46 (DSMACC3011), 0LFM4 2/1(DSMACC3013), 0LFM4 2/14(DSM ACC3014), 0LFM4 2/28(DSMACC3015)和0LFM4 1/23 (DSM ACC3010)，和能够从选自由以下组成的组的杂交瘤细胞系获得的抗体的 \ 结构域的 CDR1-CDR3 0LFM4 2/3 (DSMACC3012)，0LFM4 1/46 (DSM ACC3011)，0LFM4 2/1(DSM ACC3013)， 0LFM4 2/14(DSM ACC3014)， 0LFM4 2/28(DSM ACC3015)和0LFM41/23(DSM ACC3010)。15.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳拉·拜迪，马丁·埃贝林，胡格斯·马蒂勒，克里斯蒂亚诺·米廖里尼，雅各布·萨瓦斯特贝利韦尔，托马斯·施奈德，埃莱娜·谢伯科娃，王海燕，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
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