本发明专利技术公开了一种sTERM-1酶联免疫检测试剂盒，包括：（1）酶标板和检测抗体，所述酶标板上包被固定有能与sTERM-1发生抗原-抗体反应的捕获抗体，所述检测抗体能与sTERM-1或者与sTERM-1同捕获抗体发生抗原-抗体反应后的结合体发生抗原-抗体反应；（2）反应剂和检测剂，用于通过酶联免疫检测待测样品中sTERM-1存在以否的物质。本发明专利技术的方案步骤简单，反应时间短，降低了重复实验的差异性，适合临床检测的应用，对多种疾病尤其是急性肺炎的预防和诊疗有极大的指导意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种STERM-I酶联免疫检测试剂盒、该试剂盒的制备方法以及采用该试剂盒检测sTERM-1的方法。
技术介绍
TREM是最近发现的表达于髓样细胞的免疫球蛋白超家族活化受体，目前已确认的至少有5个成员，其中TREM-I选择性的表达于中性粒细胞和单核细胞，介导的信号传导通路在炎症反应的发生和级联放大中起重要作用。尽管TREM-I天然配体目前还没有明确，但是有研究发现使用TREM-I竞争性单克隆抗体激活TREM-I能够引起PMN脱颗粒，导致促炎性因子和蛋白水解酶释放，呼吸爆发和细胞吞噬，而且这种效应能与Toll-Iike受体(TLR)的配体如LPS等产生协同作用，而运用可溶性TREM-I融合蛋白阻断TREM-I能够保护小鼠免受LPS或细菌脓毒血症时引起的致命性损伤。研究认为TREM-I是急性炎症反应过程中起到关键作用，调节TREM-I是治疗炎症性疾病的潜在靶点。TREM-I可溶性形式sTREM-Ι是TREM-I的mRNA剪接突变体编码的一种缺乏跨膜结构域的分泌亚型，研究发现肺部感染过程时sTREM-Ι可以释放入体液且与感染严重程度密切相关，可用于评价疗效和评估预后。对接受机械通气患者而言，细菌性肺炎的诊断和治疗还很困难。支气管肺泡灌洗，所获标本的微生物定量培养，被认为是机械通气相关性肺炎(VAP)诊断的最特异性的工具，然而细菌培养会延迟诊断24 48 h,这样将导致不必要的抗菌素的使用，以及对于不存在感染性疾病的患者经验性广普抗菌素的应用都是有弊无利的。Gibot等对148例疑为肺炎的机械通气患者进行了前瞻性研究，由两名不知道患者sTREM-Ι水平的ICU专家独立决定肺炎的诊断，结果发现38例社区获得性肺炎患者及46例VAP患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中sTREM_l水平显著升高，但64例非肺炎患者sTREM-Ι水平不升高，sTREM-Ι升高诊断肺炎的敏感性为98%，特异性为90%，多变量分析显示，sTREM-Ι升高比临床肺部感染评分及细胞因子水平能更好地预测肺炎，而且sTREM-Ι水平与慢性阻塞性肺气肿病史、BALF中的炎症细胞数目、感染细菌的类型、以及其他临床和生物学上的变量相关性不大，是一个高度特异性、高度敏感的独立的预测指标，因而研究者认为对于接受机械通气治疗的患者，BALF中的sTREM-Ι的快速检测，将为临床上细菌、真菌感染性肺炎与非肺炎的诊断和鉴别诊断提供快捷、有力的证据。Determann等动态检测VAP患者非直接支气管肺泡灌洗液中sTREM-Ι水平也证实sTREM-Ι是VAP的潜在标志物。最近Horonenko等对VAP患者呼出气冷凝液中sTREM_l水平检测发现呼出气冷凝液中sTREM_l水平能很好的诊断或鉴别VAP。以上研究结果说明TREM-I是一种新的急性肺部感染标志物，可用于急性肺部感染等炎症性疾病的早期诊断、疗效评价和预后估计。现有技术中已公开的sTREM-lELISA试剂盒，大都也都不适合临床诊断研究，只适合一定范围的科研实验。实验前都需要进行样本TREM-I含量预测，且检测范围也不高。因此，开发出一种sTERM-Ι酶联免疫检测试剂盒，能够快速、准确地检测待测样品中是否存在的sTERM-1，是本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种sTERM-Ι酶联免疫检测试剂盒，步骤简单，反应时间短，降低了重复实验的差异性，适合临床检测的应用，对多种疾病尤其是急性肺炎的预防和诊疗有极大的指导意义。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的一种sTERM-Ι酶联免疫检测试剂盒，包括 (I)酶标板和检测抗体,所述酶标板上包被固定有能与sTERM-Ι发生抗原-抗体反应的捕获抗体，所述检测抗体能与sTERM-Ι或者与sTERM-Ι同捕获抗体发生抗原-抗体反应后的结合体发生抗原-抗体反应；(2)反应剂和检测剂，用于通过酶联免疫检测待测样品中sTERM-Ι存在以否的物质。优选地，所述捕获抗体为单克隆sTERM-Ι抗体。更优地，所述捕获抗体为鼠抗人sTERM-Ι单克隆抗体。优选地，所述检测抗体为多克隆sTERM-Ι抗体。更优地，所述检测抗体为兔抗人sTERM-Ι多克隆抗体。优选地，所述反应剂包括分开包装的阳性对照液、阴性对照液、20倍浓缩洗涤液，样品缓冲液；所述检测剂包括显色底物液A、底物液B及终止液。 优选地，所述检测抗体通过HRP-偶联缓冲液标记有辣根过氧化物酶，所述HRP-偶联缓冲液为每升中含有如下物质的溶液 Tris6.05g， Nacl8.4g， 鹿糖20g , BSA10g, CaCl2IOOmg, EDTAO. 374g, 苯酹O. lg, 硫柳汞O. Olg。优选地，所述捕获抗体通过包被缓冲液固定于所述酶标板的检测孔中，所述包被缓冲液为每升中含有如下物质的溶液 NaCl 43. 25g, Na2HP04 7.65g, NaH2P04 I. 3g ； 在进行包被处理后，每孔加入100-200 μ L牛血清白蛋白溶液洗涤2-4次，所述牛血清白蛋白溶液为每升中含有如下物质的溶液 NaHPO4. 12 H2O 3. 72g, KH2PO40.43g, NaCl6. 8g ； 再向每孔中加入200-300μ L的封闭液进行封闭处理，所述封闭液为每升中含有如下物质的溶液BSAIOg, 鹿糖20g, 硫柳汞O. Olg。另外，本专利技术还提供了一种sTERM-Ι酶联免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤 (O在酶标板上每孔加入100ul5ug/ml/s的捕获抗体,4°C包被反应过夜,所述捕获抗体能与sTERM-Ι发生抗原-抗体反应的捕获抗体； (2)去掉包被缓冲液，每孔加入100-200 μ L牛血清白蛋白溶液洗涤2-4次，所述牛血清白蛋白溶液为每升中含有如下物质的溶液 NaHPO4. 12 H2O 3. 72g, KH2PO40.43g, NaCl6. 8g ； 再向每孔中加入200-300 μ L的封闭液进行封闭反应1-3小时，所述封闭液为每升中含有如下物质的溶液 BSAIOg, 鹿糖20g, 硫柳汞O. Olg。优选地，所述的sTERM-Ι酶联免疫检测试剂盒的制备方法，还包括通过HRP-偶联缓冲液在检测抗体上标记有辣根过氧化物酶，检测抗体上标记辣根过氧化物酶，所述检测抗体能与sTERM-Ι或者与sTERM-Ι同捕获抗体发生抗原-抗体反应后的结合体发生抗原-抗体反应，所述HRP-偶联缓冲液为每升中含有如下物质的溶液 Tris6.05g， Nacl8.4g， 鹿糖20g , BSA10g, CaCl2IOOmg, EDTA0.374g, 苯酹0. lg, 硫柳汞0. Olg。再则，本专利技术还提供一种sTERM-Ι酶联免疫检测方法，包括如下步骤 (1)在包被固定有能与sTERM-Ι发生抗原-抗体反应的捕获抗体的酶标板上加入待检测样品或sTREM-Ι标准抗原50-100ul/孔，37°C反应0. 5-1. 5小时； (2)去除步骤I中反应液体，用洗涤缓冲液洗涤2-4次；加入200ng/mlHRP标记的sTREM-Ι检测抗体50-200ul/孔，37°C反应20-40分钟，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐军发，刘明，
申请(专利权)人：广州吉赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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