本发明专利技术公开了一种从混合植物甾醇中提纯菜油甾醇的方法。该方法利用不同的植物甾醇组分在特定的有机溶剂中的溶解度和结晶度不同，以丙酮作为有机溶剂对植物甾醇混合物进行多次重结晶过程，采用色谱法检测各植物甾醇单体含量，以确定菜油甾醇在各级结晶中的纯度，并最终提取到纯度较高的菜油甾醇。本发明专利技术提供了一种可在大规模生产条件下，只利用一种有机溶剂即可从混合植物甾醇中提纯甾醇单体的方法。本发明专利技术对于包括植物甾醇在内的天然产物纯品的提取方面具有重要的理论及实际意义，将在植物的精细化工及分析化学中发挥重要作用，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化工或者精细化工领域，具体涉及一种从混合植物留醇中提纯菜油甾醇的方法。
技术介绍
混合植物留醇是一 类结构相似，物理性质差别小的留体化合物，主要来源于木浆浮油和植物油精炼脱臭馏出物，其主要成分有￠-谷留醇(P-sitosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆留醇(stigmasterol)和菜杆留醇(avenasterol)等。植物留醇具有十分重要的生理功能，可有效降低低密度胆固醇、降低心脏病的发生率、抗癌和抗炎等作用。植物留醇的多种生理功能使其在医药、化妆品、动物生长剂、食品、纺织、印刷以及纸张加工业等多种领域得到广泛应用。植物留醇、植物留醇酯及其衍生物的产品已经商业化。植物留醇的高效性和安全性使植物留醇相关产品有着十分广阔的发展前景。由于近年来植物留醇在医药工业及科研上的进一步应用，对其纯度提出了更高要求。如何将混合植物留醇分离成单一留醇产品，并提高其收率和纯度，是当前植物留醇分离精制的研究热点。对混合植物留醇进行分离精制，可以为留体药物的生产提供较为廉价的原料。混合植物留醇的有效分离是实现单组分高纯度植物留醇单体规模化生产过程中的一个重要研究课题。由于结构上的极度相似，从混合植物甾醇中分离纯化￠-谷甾醇、菜油甾醇和菜籽留醇，得到纯度较高的各留醇单体是一件比较困难而又繁琐的工作。到目前为止，提取留醇的方法有溶剂结晶法、络合法、分子蒸馏法、吸附法、色谱分离法等，各种方法的选用是依据原料品种、组成、分离难度及产品纯度的要求，还要考虑工业生产的可靠性和经济性。综合以上因素，对于混合留醇单体分离研究一般采用溶剂结晶法。直接利用个别甾醇在溶剂中溶解度差异进行多级分步结晶，虽结晶次数较多，但工艺简单，易操作，且纯度也可较高。目前，国内外对于￠-谷甾醇和豆甾醇的分离纯化的研究比较多，而且获得相应的单体纯度也比较高，可以满足对其相关生理活性的研究和市场应用。而对于含量同样丰富的菜油留醇的研究却很少，关于菜油留醇的分离精制技术更鲜有报道，而且目前市场上销售的菜油留醇单体纯度只能达到60%，而且价格昂贵，远远不能满足对其相关生理活性的研究和商业化生产要求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有的分离提纯甾醇单体方法中，难以实现菜油甾醇和谷甾醇完全分离的困难，提供了一种可在大规模生产条件下，只利用一种有机溶剂从混合植物甾醇中提取高纯度菜油留醇的方法。本专利技术采用工艺简单、易操作的溶剂结晶法分离纯化菜油留醇，其原理在于，不同植物留醇组分在特定的有机溶剂中随温度变化的溶解度不同，采用沸点合适的有机溶剂可对混合植物甾醇中的菜油甾醇进行多级分步结晶分离。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下 一种从混合植物留醇中分离制备菜油留醇的方法，按照下述步骤进行 ①将混合植物留醇置于有机溶剂中，高温水浴待留醇全部溶解后，水浴降温至结晶析出； ②保持恒温养晶数小时； ③减压抽滤，收集滤饼和滤液。滤饼自然风干，滤液减压去除溶剂； ④采用气相色谱法或高效液相色谱法分别检测滤饼和滤液中菜油留醇单体的含量； ⑤按照相同物料比进行下一次重结晶，多次重复操作步骤，直接产物纯度可达到75%，滤液经旋转蒸发并回收固体部分；根据菜油留醇含量的不同可再进行混合并按同样的物料比进行下一次结晶。所述步骤①中混合植物留醇中菜油留醇的含量不得低于25% ;有机溶剂为丙酮，混合植物甾醇与溶剂丙酮的质量与体积比为I :5 25 (克/毫升)。 所述步骤①中水浴溶解温度为5(T70°C，待甾醇混合物充分溶解后，降温至10^25 0C o所述步骤②中保持恒温养晶12-24小时。所述步骤③中滤液在4(T60°C水浴中减压旋转蒸发去除溶剂，回收固体物质。所述步骤④中气相色谱法采用气相色谱柱为苯基-甲基固定相色谱柱，采用程序升温方式进行检测。所述步骤④中高效液相色谱法中液相色谱柱，为分析型C18或CS高效液相色谱柱，流动相为乙腈、异丙醇、甲醇和水中的一种或两种的组合。所述步骤⑤多次重复操作步骤是将上一次的滤饼按照同样的工艺再进行下一次重结晶，重复2 10次，回收溶剂后可得到白色粉末状的菜油留醇，纯度达80%以上。所述步骤⑤多次重复操作步骤或者是将从滤液回收的植物留醇根据菜油留醇的含量进行混合并按照同样的工艺再进行下一次重结晶，重复2 10次，可以根据采油留醇含量的要求决定重结晶的次数，最后菜油甾醇的收率为75%以上。本专利技术有益效果在于 I、采用混合植物留醇为原料，只采用一种有机溶剂便可获得高纯度的菜油留醇，与其他方法相比具有成本低廉，工艺简单，操作简便等优点。2、采用高效液相色谱法对每次重结晶反应进程进行实时监控，使得反应得到精确控制，保证了产品的纯度并提高了收率，使得收率提高到75%以上，为工业化生产菜油甾醇提供了条件。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步说明。实施例I : I.称取20克植物甾醇(纯度97%，其中菜油甾醇含量为32. 9%)，以植物甾醇与试剂质量体积比为I :20加入400毫升分析纯丙酮于锥形瓶中，置于50°C水浴溶解，待植物留醇全部溶解后，水浴降温至15°C，有白色晶体缓慢析出。2.静置于平台上，保持恒温12小时。3.保温减压抽滤，收集滤饼和滤液，滤饼自然风干，滤液在40°C水浴中减压旋转蒸发回收留醇，去除有机溶剂。采用气相色谱仪分别检测滤饼和滤液回收的留醇中菜油甾醇的含量，气相色谱柱为苯基-甲基固定相色谱柱，氮气作为载气，程序升温方式至320°C。4.滤饼按相同的物料比进行下一次重结晶，依次法重结晶8次，可获得纯度为80%的菜油甾醇。滤液在50°C水浴中减压蒸馏处理，回收甾醇和溶剂，回收的植物甾醇按照相同的物料比进行重结晶，回收的植物甾醇结晶9次可获得纯度为78%的菜油甾醇，最后菜油甾醇的总收率为76. 3%，溶剂回收率为93%。实施例2 I.称取10克植物甾醇(纯度97%，菜油甾醇含量为32. 9%)，以植物甾醇与试剂质量体积比为I :10加入100毫升分析纯丙酮于锥形瓶中，置于55°C水浴溶解，待植物留醇全部溶解后，水浴降温至10°C，有白色晶体缓慢析出。2.静置于平台上，保持恒温18小时。3.保温减压抽滤，收集滤饼和滤液。滤饼自然风干，滤液在50°C水浴中减压旋转蒸发回收留醇，去除有机溶剂。采用高效液相色谱仪分别检测滤饼和滤液回收的留醇中菜油甾醇的含量，采用的色谱柱类型为分析型ODS C18柱，流动相为乙腈/甲醇=6:4，流速ImL/min,紫外检测波长206 nm。4.滤饼按相同的物料比进行下一次重结晶，依次法重结晶9次，可获得纯度为81. 8%的菜油甾醇。滤液在40°C水浴中减压蒸馏处理，回收甾醇和溶剂，回收的植物甾醇按照相同的物料比进行重结晶，回收的植物甾醇结晶9次可获得纯度为79. 5%的菜油甾醇，最后菜油甾醇的总收率为75. 3%，溶剂回收率为95%。实施例3 I.称取5克植物甾醇(纯度97%，菜油甾醇含量为32. 9%)，以植物甾醇与试剂质量体积比为I :15加入75毫升分析纯丙酮于锥形瓶中，置于60°C水浴溶解，待植物留醇全部溶解后，水浴降温至20°C，有白色晶体缓慢析出。2.静置于平台上，保持恒温24小时。3.保温减压抽滤，收集滤饼和滤液，滤饼自然风干，滤本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高俊兰，张欣，岳秋林，程备久，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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