本发明专利技术涉及一种真菌丝氨酸蛋白酶，其包含成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列，所述成熟Fe_RF6318酶具有SEQ?ID?NO：15的氨基酸序列。所述丝氨酸蛋白酶可自木贼镰孢获得，更优选来自保藏菌株CBS?119568。公开的还有编码所述蛋白酶的核酸序列，例如保藏在检索号为DSM?22171的大肠杆菌RF7664中的包含核苷酸序列SEQ?ID?NO：9的质粒pALK2521，以及保藏在检索号为DSM?22172的大肠杆菌RF7800中的包含全长基因SEQ?ID?NO：10的质粒pALK2529。所述蛋白酶可用作酶制剂，其可应用于洗涤剂组合物以及用于处理纤维、用于处理毛织品、用于处理毛发、用于处理皮革、用于处理食品或饲料或用于涉及修饰、降解或去除蛋白质材料的任何应用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在多种应用、特别是衣物和餐具洗涤剂中有用的一种真菌丝氨酸蛋白酶。本专利技术涉及编码所述酶的核酸分子、重组载体、用于产生所述酶的宿主细胞、包含所述酶的酶组合物以及用于制备这类组合物的方法。本专利技术还涉及所述酶或包含所述酶的组合物的各种用途。
技术介绍
微生物蛋白酶为最重要的水解酶之一，并发现其在各个产业部门，例如洗涤剂、食品、皮革、药品、诊断、废物管理和银回收方面具有应用。微生物胞外蛋白酶占全球工业酶总销售的主要部分(1/3以上)(Cherry和Fidantsef，2003)。近90%的商业蛋白酶为洗涤剂用酶(Gupta等,2002)。大多数商业蛋白酶(主要中性和碱性)由属于杆菌属(Bacillus)的生物产生。枯草蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶或由杆菌种产生的枯草蛋白酶形成工业蛋白酶的最大亚群。这些酶作为洗涤剂的蛋白质降解组分或添加剂，在商业上重要。目前使用中的商业洗涤剂制剂包括源自杆菌种的天然产生的碱性丝氨酸蛋白酶，或为重组蛋白酶制剂(Maurer，2004)。具有改进的催化效率和/或对温度、氧化剂和变化的洗涤条件具有更好稳定性的天然酶变体，已通过定向诱变和/或随机诱变开发。商业蛋白酶的实例为例如枯草蛋白酶 Carlsberg (Alcalase ⑧，Novozymes, DK)、枯草蛋白酶 309 (Savinase ，Novozymes,DK)、枯草蛋白酶 147 (Esperase ，Novozymes,DK)、Kannase (Novozymes,DK)、Purafect .⑧(Genencor Inc. , USA)、Purafect ⑧ Ox、Properase ⑧(Genencor Inc. , USA)以及 BLAP S 和 X 系列(Henkel, DE)。数种碱性丝氨酸蛋白酶(EC 3. 4. 21)和编码这些酶的基因也已从真核生物(包括酵母和丝状真菌)中分离。美国专利第3，652，399号和EP 519229 (Takeda ChemicalIndustries, Ltd.，JP)公开了一种源自镰孢属(Fusarium)(无性状态,有性型)或赤霉属(Gibberella)(性状态,无性型)的碱性蛋白酶，具体地来自镰孢种(Fusarium sp.)S-19-5 (ATCC 20192，IFO 8884)、亚麻尖镰孢(F. oxysporum f. sp. lini) (IF0 5880)或小麦赤霉(G. saubinetti) (ATCC 20193，IF06608)，所述碱性蛋白酶可用于配制洗涤剂和其它清洁剂组合物。WO 88/03946和WO 89/04361 (Novo Industri A/S，DK)公开了包含蛋白酶和脂肪酶的酶促除垢添加剂和洗涤剂组合物，其中所述真菌蛋白酶来自镰孢，具体地尖镰孢(F. oxysporum)或腐皮镰孢(F. solani)。在W089/06270中公开了一种除垢添加剂,其包含对邻近仅一或两个特定氨基酸的肽键特异的蛋白酶。W01994025583 (NovoNordisk A/S，DK)公开了可从镰孢种(具体地尖镰孢的菌株(DSM 2672))中得到的一种活性胰蛋白酶样蛋白酶，和编码所述蛋白酶的DNA序列。在WO 2006101140 (S0DX Co. Ltd, Nakamura)中公开了源自镰孢种BLB(FERM BP-10493)的新型蛋白酶的氨基酸序列。另外，已报道来自真菌种(例如念球属(Tritirachium)和耳霉属(Conidiobolus))的碱性蛋白酶(在Anwar和Saleemuddin, 1998 中综述)。在不同应用中使用真菌丝氨酸蛋白酶也已从数个专利申请中得知。例如，在WO1992018599 (NovoNordisk A/S)中公开了作为除垢添加剂或洗涤剂组合物的纤维素酶和蛋白酶(具体地来自镰孢种DSM 2672的胰蛋白酶样蛋白酶)的组合。如在WO 1992003529和WO 1992005239 (NovoNordisk A/S)中所公开，这类洗涤剂组合物可进一步包含可逆的蛋白酶抑制剂用于使酶稳定。在WO 1997028243 (NovoNordisk A/S)中公开了使用酶杂合体从纤维素织物中去除或漂白污物或污迹的方法，所述酶杂合体包含这类蛋白酶的催化活性氨基酸序列，其与包含纤维素结合域的氨基酸序列连接。WO 1997002753 (NovoNordisk A/S)公开了使用脂肪酶和蛋白酶(优选地为可从镰孢得到的丝氨酸蛋白酶)温和清洗受污工艺设备的方法。在EP 1464626专利申请(Biovitis S. A. ,FR)中公开了木贼镰孢(F. equiseti)和其它真菌在减少废水中的有机物中的用途。社会经济挑战和政府规章已迫使洗涤剂产业考虑许多环境问题，不仅包括使用更温和的化学制品(其可小量使用并因此遗留更少的环境废迹)，还包括节能的需要。洗涤剂用酶(具体地蛋白酶)为洗涤剂组合物中的重要组分。通过降低洗涤温度节约能源的需要和不可耐高温的合成纤维的使用增加以及当前的生活方式，已将消费者习惯向低洗涤温度转变，并已造成对在低温下有效的新酶的需求。尽管已出版大量专利出版物、综述和论文这一事实，其中已公开(例如在EP0290567和EP 0290569 (Novo Nordisk A/S, DK)中)来自各种微生物的丝氨酸蛋白酶，例如,来自放线菌(达松维尔拟诺卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei))和真菌(马昆得拟青霉(Paecilomyces marquandii))微生物的低温碱性蛋白酶,但是对备选的丝氨酸蛋白酶仍有巨大需求，所述丝氨酸蛋白酶在修饰、降解和去除蛋白质物质(特别地在低或中温范围)中适用并有效，并且在存在具有高度变化特性的洗涤剂的情况下稳定。洗涤剂产业在使其新产品适应消费者习惯和需要、新纺织产品的性质和新洗涤机方面正在取得巨大进步。显然，当开发新洗涤剂(具体地衣物和餐具洗涤组合物)时，必须满足大范围变化和迅速改变的需求。为了满足洗涤剂产业和政府规章的所有变化需求，用于洗涤剂组合物的新丝氨酸蛋白酶组分不仅应该能够在宽PH和温度范围内完成其任务并在各种条件下(包括与各种不同洗涤剂联合的机械和化学干预)保持稳定，还需要的是，所述丝氨酸蛋白酶可大量生产，这可通过简化从发酵液和菌丝体中的分离而节约下游处理成本。专利技术概述本专利技术的目的为提供一种真菌来源的丝氨酸蛋白酶，其显示宽的底物特异性，在宽PH范围下有活性并具有宽的最适温度，即在低温和中温均起作用。用于衣物和餐具洗涤剂的丝氨酸蛋白酶必须在存在洗涤剂的情况下也稳定或与洗涤剂兼容。具体而言，本专利技术的目标为提供一种丝氨酸蛋白酶，其能够在比目前商业酶制剂更低的温度下去除蛋白质材料(包括在洗涤衣物和餐具中的污迹)，从而节约能源。所述真菌丝氨酸蛋白酶可在高产的真菌宿主中产生，且其下游处理(例如分离发酵液和菌丝体)容易进行。本专利技术涉及一种真菌丝氨酸蛋白酶，其具有丝氨酸蛋白酶活性且包含如SEQ IDN0:15定义的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列或与SEQ ID NO : 15定义的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列具有至少8本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·瓦尔塔卡里，K·琼图南，S·马基南，J·卡利奥，J·维马安佩拉，P·奥贾帕洛，M·帕洛海莫，
申请(专利权)人：生化酶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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