本发明专利技术涉及调节载脂蛋白B表达的组合物和方法，尤其是涉及到利用化学修饰寡核苷酸而对载脂蛋白B的负调解作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及调节载脂蛋白B表达的组合物和方法，尤其是涉及到寡核苷酸例如化学修饰的寡核苷酸对载脂蛋白B的负调解作用。
技术介绍
RNA干扰或“RNAi” ー词最初是由Fire及其合作者在描述双链RNA(dsRNA)在被引入到线虫里时发现其能够阻遏基因表达而提出的(Fire et al.，Nature 391 :806-811，1998)。短双链RNA在许多有机体包括脊椎动物体内引导基因特异性的转录后沉默，并为研究基因功能提供了一个新的工具。脂蛋白由甘油酷和胆固醇酷构成，周围具有蛋白质、憐脂和胆固醇的双未包被。脂蛋白的蛋白质成分众所周知为调节载脂蛋白，并且人类至少有九种调节载脂蛋白。调节载脂蛋白B(ApoB)发现于各类脂蛋白中乳糜微粒、密度极低的脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)和低密度脂蛋白(LDL)。ApoB的功能为通过ApoB/E受体作为细胞结合和LDL颗粒的内陷的识别信号。含有载脂蛋白B的脂蛋白积聚和过多，会导致脂相关疾病的生成，如动脉粥样硬化。研究降低ApoB的疗法对治疗脂相关疾病很有意义。一种以反义治疗的形式、以寡核苷酸为基础的治疗，已经显示能够降低小鼠体内ApoB水平，并且该治疗还能够减少血清胆固醇和甘油三酸酯的水平(U.S.公告号2003/0215943)。这些结果表明了一个适度的ApoB的负调解作用，以及作为治疗脂相关疾病的一个靶。本专利技术对现有技术的改进表现在提供了能够减少体内血清ApoB水平的IRNA试剂。
技术实现思路
本专利技术提供了能够减少受试者如哺乳动物(例如人)中载脂蛋白B (APoB)水平的组合物及其方法。所述方法包括对受试者施用能够使ApoB基因沉默的ー种iRNA试剂。该iRNA试剂可以是在本文所描述的这样，或者是ー种基于具有活性的序列之一的dsRNA，并且对哺乳动物ApoB基因如来自人或小鼠ApoB基因的相同区域定位。iRNA试剂包含每条链少于30个的寡核苷酸,例如21-23个核苷酸,构成、包括在此提供的试剂标号为1-74的试剂之一，或是来自在此提供的标号为1-74的试剂之ー衍生物。这些优选的iRNA试剂含有对受试者所有非ApoB基因序列的四个或更多个的核苷酸错配。本专利技术尤其是提供ー种iRNA试剂，其包含ー种有义链，该有义链具有至少15个有义链序列的连续的核苷酸，以及具有ー种反义链，该反义链具有至少15个反义链序列的连续的核苷酸，这些序列为在此提供的试剂标号为1-74的iRNA试剂的序列，例如，I号试剂，有义链序列 5，-cuuuacaagccuugguucagu-3，(SEQ. ID NO. 153),反义链序列 5，-acugaaccaaggcuuguaaagug-3，(SEQ. ID NO. 154)。需要理解的是，在此提供的某些iRNA试剂包含特定的修饰核苷酸优选类型如54-74号试剂，同时试剂号为1-53的iRNA试剂则作为蓝图。它们是指包含这样的修饰，该修饰对本领域技术人员来说是明显的，且与试剂标号为1-53的iRNA试剂相当，如下面还要提到的，例如，2’ -O-甲基修饰、碱基替代等，对于上述修饰，本领域技术人员不会认为这些试剂的特性会改变，尤其是不会改变两条链与它们的互补链在严格的条件下杂交的能力。表1:靶向ApoB的示例性iRNA权利要求1.一种由有义链和反义链组成的iRNA试剂，其中所述的有义链的序列选自SEQ IDNo :1、3、5、21、23、25、27、29、33、35、39、41、43、45、49、51、55、57、59、61、63、65、69、71、73、77、79、83、93、95、97、99、105、107、109、117、121、123、125、127、129、131、133、135、137、143、145、147、153、155、157、159和161，与所述有义链对应的的反义链的序列选自SEQID No:2、4、6、22、24、26、28、30、34、36、40、42、44、46、50、52、56、58、60、62、64、66、70、72、74、78、80、84、94、96、98、100、106、108、I10、I18、122、124、126、128、130、132、134、136、138、144、146、148、154、156、158、160和162，其中每条链中不超过3个核苷酸分别被其它核苷酸所替代，同时基本保持了抑制培养的人HepG2细胞中ApoB表达的能力。2.根据权利要求I所述的iRNA试剂，其中每条链中不超过2个核苷酸分别被其它核苷酸所替代。3.根据权利要求I所述的iRNA试剂，其中每条链中不超过I个核苷酸分别被其它核苷酸所替代。4.根据权利要求1-3中任一项所述的iRNA试剂，其中所述替代是腺苷被尿嘧啶所替代。5.根据权利要求1-4中任一项所述的iRNA试剂，其中，所述iRNA试剂使与这些试剂孵育后培养的人H印G2细胞中存在的ApoB mRNA的量与没有与该试剂孵育的细胞相比降低了50 %以上，和/或使分泌到人IfepG2细胞培养上清中的Apo蛋白的量降低了 50 %以上，和/或使该iRNA试剂以50mg/kg体重或者100mg/kg体重给药后，将C57B1/6小鼠的鼠肝脏细胞中所存在的apo-B mRNA的量在体内降低至少20%。6.根据权利要求1-5中任一项所述的iRNA试剂，其包括硫代磷酸酯或者2’-修饰的核苷酸。7.根据权利要求1-6中任一项所述的iRNA试剂，其包括 5’_尿苷-腺嘌呤_3’(5’-UA-3’)二核苷酸，其中所述的尿苷是2’-修饰的核苷酸；5’ -尿苷-鸟嘌呤-3’ (5，-UG-3’ ) 二核苷酸，其中所述的5’ -尿苷是2’ -修饰的核苷酸； 5’ -胞苷-腺嘌呤_3’ (5，-CA-3’ ) 二核苷酸，其中所述的5’ -胞苷是2’ -修饰的核苷酸； 或者5’ -尿苷-尿苷-3’ (5，-UU-3’ ) 二核苷酸，其中所述的5’ -尿苷是2’ -修饰的核苷酸。8.根据权利要求7所述的iRNA试剂，其中在所有出现的序列基序5’-UA-3’、5’ -CA-3’、5’ -UU-3’和5’ -UG-3’ 二核苷酸中的最5’端嘧啶都是2’ -修饰的核苷酸， 或者在有义链中的所有嘧啶以及在所有出现的5’ -UA-3’和5’ -CA-3’的最5’端嘧啶都是2’ -修饰的核苷酸， 或者其中在有义链中的所有嘧啶都是2’ -修饰的核苷酸，以及在反义链中所有出现的序列基序5’ -UA-3’、5’ -CA-3’、5’ -UU-3’和5’ -UG-3’中的最5’端嘧啶都是2’ -修饰的核苷酸。9.根据权利要求6所述的iRNA试剂，其中所述的2’-修饰选自2’ -脱氧、2’ -脱氧-2’-氟、2’-0-甲基、2’-0_ 甲氧乙基(2’-0-M0E)、2’-0-氨基丙基(2’-0-AP)、2’-0-二甲基氨基乙基(2’ -0-DMA0E)、2’ _0_ 二甲基氨基丙基(2’ _0_DMAP)、2’ _0_ 二甲基氨基乙氧基乙基(2’ -0-DMAE0E)和2’ -O-N-甲基乙酰氨基(2’ -0-NMA)的组。10.根据权利要求1-9中任一项所述的iRNA试剂，其进一步含有胆固醇部分，其中所述的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：于尔根·苏赛克，汉斯彼得·沃尔洛赫尔，菲利普·哈德维格，萨伊达·埃尔巴希，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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