一种人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺，该工艺主要包括制备免疫原、动物体内免疫、制备人精子特异性转移因子等步骤。本口服制剂具有转移细胞免疫信息、介导细胞免疫反应、特异性地抑制和杀伤人精子的功能，并且能增强非特异性免疫功能；该口服制剂服用无过敏反应，实用安全，效果明显，使用后不会产生抗药性；本产品采用口服给药途径，服用不受条件的限制，既方便，又不影响有效成分本身的生物学活性，是一种安全、有效的制剂，具有潜在的社会价值和市场应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别是涉及人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺。
技术介绍
随着人口的不断增长，许多国家都制定和颁布了适合本国国情的计划生育政策以控制人口的增长速度，在此背景下，节育或避孕成为人们研究的热点课题之一。传统的措施由于存在许多弊端而受到人们的排斥和反对，如避孕环由于容易脱落、结扎造成人体损伤、避孕药具有副作用、避孕套影响感觉等。于是，研究一种无损伤、可复性的避孕产品成为当代人迫切的需要，免疫避孕的理念随之产生，并迅速成为生殖与避孕领域的研究热点。目前，研究者根据存在于生殖系统的多种抗原，已经研制出许多避孕疫苗。SP-10是一种特异性表达于睾丸组织的蛋白，定位于精子顶体内膜和赤道区域，可能参与顶体反应和精卵结合。Kurth等利用重组SP-10蛋白抗原免疫雌性狒狒、短尾猴，结果发现其生殖道和血清中均产生高滴度的特异性抗体，体外实验显示该抗体可特异性的与精子顶体的SP-10结合，干扰精卵融合。人精子上有一种与精卵融合有关的免疫球蛋白超家族蛋白(Izumo),Naz等将抗人Izumo抗体与仓鼠精子共孵育，再将孵育后的精子与鼠卵融合，结果发生精卵融合障碍，接种Izumo蛋白的雌鼠生殖道和血清中也会产生高滴度的抗体，使得其生育力下降。Eppin蛋白是近年来新发现的一种可由睾丸和附睾分泌的特异性蛋白，可通过特异性位点结合于精子表面，参与调控精液液化和精子运动。体外实验表明抗Eppin抗体会干扰PSA对精囊凝固蛋白的水解，导致精液固化异常，影响精子前向运动和结合卵细胞，故可作为避孕的候选疫苗。除此之外，还有针对P18、LDH-C4、SPRASA, rSMP_B、CABYR、E_3、TSA-I等抗原的避孕疫苗，但无论哪种疫苗，综归起来具有一个明显的缺点，即免疫原性较弱，持续时间短，需要不断注射方可维持抗体浓度。因此，研究一种可用于增强机体对避孕疫苗免疫应答的佐剂成为必要。特异性转移因子(specific transfer factor, STF)是采用某种特定病原免疫动物后，取其脾脏或外周血淋巴细胞制备的具有针对该抗原特异活性的小分子物质，其主要成分是核苷酸、多肽，并含有18种游离氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸，以及6种微量元素。STF最突出的特点是无免疫原性，无种属特异性，即由某一种属动物制备的STF，可转移免疫活性给另一种属的动物而不会发生超敏反应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，克服现有技术的不足之处，提供一种涉及人精子特异性转移因子口服制剂的研制工艺，为人类避孕节育提供一种有效的免疫佐剂。本专利技术所述的人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺，采用以下技术方案 I.免疫原的制备 取健康人的精子，以无菌生理盐水洗涤3次后，配制成浓度为4. OX 106/ml的混悬液，在_4°C以超声细胞粉碎仪破碎完全，储存于_20°C冰箱，备用。2.免疫动物 (I)免疫前观察及检测 免疫前3d，5只白兔均精神好、进食正常、无腹泻；抽取静脉血，以试管凝集法检测布氏杆菌抗体，效价均小于I :80。(2)免疫白兔 以配制好的人精子抗原悬液免疫白兔，每周一次，免疫方式为背部、腹部、颈部及腋下多点皮下注射。第一次免疫剂量为免疫原Iml+弗氏完全佐剂0. 5ml+弗氏不完全佐剂0.5ml ;第二次和第三次仅注射2ml精子抗原悬液；第四次、第五次也是仅注射4ml精子抗原悬液。(3)—般情况观察 每天观察免疫后白兔的精神、进食、有无腹泻等状况，以及注射局部有无溃疡、坏死。(4)抗体效价检测 末次免疫后一周，抽取白兔静脉血，以试管凝集试验检测血清中的精子抗体效价，达到I 1280为免疫成功。3.制备人精子特异性转移因子 (I)取材、匀浆末次免疫后第10天处死白兔，取脾脏及淋巴结置于_20°C冰箱备用。取免疫的白兔脾脏，剪去筋膜和大血管，用无菌生理盐水冲洗，以12000r/min低温匀浆2次，每次lmin，制备匀浆液。(2)破碎、冻融、透析将匀浆液置于灭菌塑料离心管中，用超声细胞破碎仪破碎，取破碎液计数残存细胞，镜检确定破碎完全后，则将其置于冰箱冷冻4 6h，然后取出置于37°C水浴，完全融解后再冷冻，连续6次，最后装入IOKD透析袋中，以两倍量的无菌双蒸水透析48小时，24小时换液一次，期间振动透析袋6次，收集透析液，以0. 22 y m滤器过滤除菌。(3 )检定和分装多肽含量测定(改良Lowry法)后,按lmg/ml多肽为I个单位,每小瓶分装2ml。储存于-20°C冰箱备用。本专利技术所述人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺具有以下特点 (1)以健康人精子无菌洗涤后配制成一定浓度作为免疫原免疫白兔，使白兔免疫系统受到人精子多种抗原的刺激，并产生相应抗体； (2)以白兔作为免疫动物，建立抗人精子抗体的动物模型，白兔来源丰富，价格便宜也易于免疫； (3)免疫动物的精子免疫原浓度适宜、多点皮下免疫、免疫时间适当，保证了最佳的免疫效果； (4)制备的人精子特异性转移因子具有转移对人精子特异性应答信息的活性，能够增强人免疫系统对精子抗原的特异性免疫应答能力，没有种属特异性，不会引起超敏反应； (5)制备的人精子特异性转移因子制剂通过口服途径使用，方便、有效。本专利技术所述的人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺，包括制备免疫原、动物体内免疫、制备人精子特异性转移因子等步骤。本口服制剂具有转移细胞免疫信息、介导细胞免疫反应、特异性地抑制和杀伤人精子的功能，并且能增强非特异性免疫功能；该口服制剂服用无过敏反应，实用安全，效果明显，使用后不会产生抗药性；本产品采用口服给药途径，服用不受条件的限制，既方便，又不影响有效成分本身的生物学活性，是一种安全、有效的制剂，具有潜在的社会价值和市场应用前景。具体实施例方式本专利技术所述的人精子特异性转移因子口服制剂及其制备工艺，具体实施例如下 I.免疫原的制备 取健康人的精子，以无菌生理盐水洗涤3次后，配制成浓度为4. OX 109/ml的混悬液，在_4°C以超声细胞粉碎仪破碎完全，储存于_20°C冰箱，备用。2.免疫动物 (I)免疫前观察及检测 免疫前3天，5只白兔均精神好、进食正常、无腹泻；抽取静脉血，以试管凝集法检测布氏杆菌抗体，效价均小于I :80。(2)免疫白兔 以配制好的人精子抗原悬液免疫白兔，每周一次，免疫方式为背部、腹部、颈部及腋下多点皮下注射。第一次免疫剂量为免疫原Iml+弗氏完全佐剂0.5ml+弗氏不完全佐剂0. 5ml ;第二次和第三次仅注射2ml精子抗原悬液；第四次、第五次也是仅注射精子抗原悬液，剂量为4ml。(3)—般情况观察 每天观察免疫后白兔的精神、进食、有无腹泻等状况，以及注射局部有无溃疡、坏死。(4)抗体效价检测 末次免疫后一周，抽取白兔静脉血，以试管凝集试验检测血清中的精子抗体效价，达到I 1280为免疫成功。3.制备人精子特异性转移因子 (I)取材、匀浆末次免疫后第10天处死白兔，取脾脏及淋巴结置于_20°C冰箱备用。取免疫的白兔脾脏，剪去筋膜和大血管，用无菌生理盐水冲洗，以12000r/min低温匀浆2次，每次lmin，制备匀浆液。(2)破碎、冻融、透析将匀浆液置于灭菌塑料离心管中，用超声细胞破碎仪破碎，取破本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周建伟，孔翠，
申请(专利权)人：周建伟，
类型：发明
国别省市：
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