本发明专利技术公开了一种SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液，含以下含量的组分：体积百分含量为20～40％的乙醇，体积百分含量为5～10％的甲醇，质量浓度为0.5～1.25g/L的CBB?R250，体积百分含量为2.5～5％的磷酸，质量浓度为100～200g/L的硫酸铵。该染色液不需要染色前的固定和敏化步骤，能够缩短蛋白质染色时间，极大的减少了蛋白质样品被污染的可能性。还公开了利用上述染色液对SDS-PAGE凝胶进行染色的方法以及上述染色液在蛋白质双向凝胶电泳以及蛋白质western?blot定性和/或定量过程中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种考马斯亮蓝快速染色液及染色方法和应用，具体涉及一种 SDS-PAGE (十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶)考马斯亮蓝R250快速染色液及染色方法和应用。
技术介绍
蛋白质组学研究能够通过构建细胞中蛋白质表达的时间及空间差异图谱揭示生命规律。蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术是蛋白质组学研究的关键技术，而对凝胶的染色是得到可分析图谱的核心技术。在蛋白分析和检测上，考马斯亮蓝染色、硝酸银染色和荧光染料染色是广泛使用在蛋白分析和检测上的三种染色方法。硝酸银染色方法是公认的灵敏度较高的凝胶染色方法，灵敏度可达纳克级水平，但因其步骤繁琐延长实验操作时间增加样品污染的可能性，较高的凝胶背景导致最终结果差异较大重复性低，同时染色试剂中的戊二醛和甲醛对蛋白质的修饰作用导致染色后的凝胶对质谱的兼容性低。近年来，染色技术的发展荧光染料的研制成功使得荧光染色方法以其高灵敏度、可重复性及很好的质谱兼容性而备受瞩目。但由于荧光染料的昂贵价格，所需高端硬件及软件设备，另众多研究人员望而却步。考马斯亮蓝(CBB)染色方法以较高重复性、较低凝胶背景、较高灵敏度及较高的质谱兼容性被广泛应用在蛋白质组学研究中，广泛采用的染料有考马斯亮蓝 G250 (CBBG250)和考马斯亮蓝R250 (CBB R250)，能够检测到微克级水平的蛋白质。近年来本申请专利技术人所在实验室改进了传统的CBB染色方法，提高染色灵敏度，能够检测到纳克级的牛血清蛋白质条带，同时具有较高分辨率及较低背景。但是，染色前固定和敏化步骤繁琐，延长了操作时间，增加了样品被污染概率。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液，该染色液不需要染色前的固定和敏化步骤，能够缩短蛋白质染色时间，极大的减少了蛋白质样品被污染的可能性。本专利技术的第二个目的在于提供一种利用上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液进行染色的方法，该方法能够在极短的时间内完成染色步骤，并在短时间内得到低背景、 高灵敏度、高分辨率的凝胶图谱，且质谱兼容性高。本专利技术的最后一个目的在于提供上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液在蛋白质双向凝胶电泳以及蛋白质western blot定性和/或定量过程中的应用。本专利技术的第一个目的是通过如下技术方案来实现的一种SDS-PAGE考马斯亮蓝 R250快速染色液,含以下含量的组分体积百分含量为20 40%的乙醇,体积百分含量为 5 10%的甲醇，质量浓度为O. 5 I. 25g/L的CBB R250，体积百分含量为2. 5 5%的磷酸，质量浓度为100 200g/L的硫酸铵。上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液，优选含有含以下含量的组分体积百分含量为25 35%的乙醇，体积百分含量为6 9%的甲醇，质量浓度为O. 8 I. Og/L的 CBB R250，体积百分含量为3. 2 4. 2%的磷酸，质量浓度为125 175g/L的硫酸铵。上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液，最佳含有以下含量的组分体积百分含量为30%的乙醇，体积百分含量为8%的甲醇，质量浓度为O. 85g/L的CBB R250，体积百分含量为3. 5%的磷酸，质量浓度为150g/L的硫酸铵。其中上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液可以通过如下方法配制获得首先按上述计量比，将CBB R250粉末溶于乙醇、甲醇以及适量水的混合溶剂中，混匀后密封， 于30 40°C环境中50 150转/分钟的条件下过夜，使各原料充分溶解，得染色液I ;接着按计量比取硫酸铵溶解于适量纯水中，并加入磷酸，混匀后，得染色液2，将等体积的染色液I与染色液2混匀后，即制备得本专利技术所述的SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液。本专利技术的第二个目的是通过如下技术方案来实现的利用上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液进行染色的方法，含有以下步骤将SDS-PAGE凝胶置于水浴加热的 SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液中进行染色，染色结束后取出SDS-PAGE凝胶，并将其置于脱色液中脱色。具体步骤包括将染色液在水浴中加热至染液温度均匀，将凝胶置于热的染液中染色一段时间，染色结束后取出凝胶，置于脱色液中摇床上轻摇一段时间后，取出凝胶在超纯水中浸泡至背景干净即可。本专利技术将SDS-PAGE凝胶置于水浴加热的SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液中进行染色的时间为4 8min,最佳为4min。本专利技术水浴加热时的温度为80°C 100°C，水浴加热的时间为10 20min，水浴加热主要是将染色液加热均匀，便于对SDS-PAGE凝胶染色。本专利技术在脱色液中脱色的时间为20 30min，并将脱色后的SDS-PAGE凝胶置于超纯水中浸泡至背景干净。本专利技术所述脱色液中含有体积百分含量为20 40%的乙醇和体积百分含量为 I 10%的乙酸。本专利技术所述的SDS-PAGE胶优选为单向胶，其含有质量百分含量为10 15%的聚丙烯酰胺分离胶和质量百分含量为I 5%的聚丙烯酰胺浓缩胶；或所述的SDS-PAGE胶优选为双向胶，其含有质量百分含量为10 15%的聚丙烯酰胺分离胶。本专利技术的最后一个目的是通过如下技术方案来实现的上述SDS-PAGE考马斯亮蓝R250快速染色液在蛋白质双向凝胶电泳以及蛋白质western blot定性和/或定量过程中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点①本专利技术快速染色液在配制过程中通过将CBB R250粉末溶于乙醇、甲醇以及适量水的混合溶剂中，并在30 40°C环境中50 150转/分钟的条件下过夜使得染料CBBR250 能彻底溶解，保证凝胶染色后背景均匀，便于脱色；②本专利技术快速染色液中采用染料CBB R250代替了染料CBB G250，能够缩短蛋白质染色时间；③使用本专利技术染色方法可以通过加热过程缩短染色过程时间，能够保证最短染色 4分钟即可观察到蛋白质条带；④使用本专利技术染色方法，能够检测到清晰的蛋白质条带；⑤使用本专利技术染色方法有很好的质谱兼容性；⑥本染色方法能广泛的用于植物组织中蛋白质电泳的染色，能够应用于蛋白质组学及蛋白质western blot研究中。附图说明图Ia是实施例I中木薯叶片蛋白质不同染色(CBB R250)时间蛋白质单向 SDS-PAGE 图谱；图Ib实施例2中巴西橡胶树C乳清蛋白质不同染色(CBB R250)时间蛋白质单向 SDS-PAGE 图谱；图2a是实施例I中木薯叶片蛋白质CBB R250与CBB G250最佳染色时间(4分钟)单向SDS-PAGE图谱对比；图2b是实施例2中巴西橡胶树C乳清蛋白质CBB R250与CBB G250最佳染色时间(4分钟)单向SDS-PAGE图谱对比；图3是实施例3中木薯叶片蛋白质、巴西橡胶树C乳清蛋白质及BSA质谱鉴定条带及编号，其中a是水浴加热后CBB R250染色液的快速染色得到凝胶图谱，b是CBBR250常温染色得到凝胶图谱，泳道1、4是木薯叶片蛋白质、泳道2、5是巴西橡胶树C乳清蛋白质、 泳道3、6是牛血清蛋白质。BI、B2、B3、B4、B5、B6是进行质谱鉴定的蛋白质条带，其中BI、 B4为木薯叶片蛋白质(BI为快速染色样品，B4为常规本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王旭初，王海燕，郭安平，王丹，常丽丽，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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