鸭性别鉴定用PCR引物、鉴定方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种鸭性别鉴定用PCR引物，引物的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示。另外，本发明专利技术还提供了一种利用鸭性别鉴定用PCR引物鉴定鸭性别的方法和包含所述鸭性别鉴定用PCR引物的试剂盒，该方法为：以待测鸭的总DNA为模板，采用鸭性别鉴定用PCR引物进行PCR扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，判定鸭性别。本发明专利技术利用同时存在于鸭性染色体W染色体和Z染色体上的CHD1基因序列合理设计PCR引物，然后结合PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳技术确定个体鸭的性别，具有操作简单方便，鉴别快速，结果准确等优点，避免了采用传统方法耗时、耗力，易出错的缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测鉴定
，具体涉及一种鸭性别鉴定用PCR引物、鉴定方法及试剂盒。
技术介绍
目前，鸭子性别的鉴定方法一般为外形鉴别法、鸣管鉴别法、摸肛鉴别法和翻肛鉴别法。外形鉴别法和鸣管鉴别法虽然简单方便，但准确率较低，容易出现鉴别错误；而摸肛鉴别法和翻肛鉴别法必须在鸭子出壳后12h内进行操作，在此时间内，雌雄雏鸡生殖隆起的性状最显著，孵出后24小时以上，肛门发紧，难于翻开，而且生殖突起萎缩，甚至陷入泄殖腔深处，不便观察。因此，需要开发一种简单方便，能够快速、准确鉴别鸭子性别的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种设计合理，可用于胚胎期及出雏后鸭性别快速鉴定的PCR引物。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是一种鸭性别鉴定用PCR引物PF(SEQ ID NO. I) PR(SEQ ID NO. 2)，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为上游引物PF:5' -AGTGCATTGCAGAAGCAATATT-3'；下游引物PR :5' -GCCTCCTGTTTATTATAGAATTCAT-3'。本专利技术还提供了一种利用上述鸭性别鉴定用PCR引物鉴定鸭性别的方法，其特征在于，该方法为以待测鸭的总DNA为模板，采用鸭性别鉴定用PCR引物进行PCR扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，当扩增产物只出现495bp的特异性扩增条带时判定为雄性鸭，当扩增产物出现495bp的特异性扩增条和351bp的特异性扩增条时判定为雌性鸭。上述的方法，所述PCR扩增的反应体系由以下成分组成模板DNA45ng 55ng,2XPCR扩增缓冲液12. L，5iimol/L上游引物2 y L，5 y mol/L下游引物2 y L，加水至25 u L0上述的方法，所述PCR扩增的反应程序为94°C预变性5min，然后经94°C变性30s，55。。复性30s，72。。延伸30s，35个循环，最后72°C延伸7min。上述的方法，所述495bp的特异性扩增条带的核苷酸序列(SEQ ID NO. 3)为AGTGCATTGC AGAAACAATA TTACAAGTAA CTATTTTCTT TAAATTTCAT CGTTTTAATT 60ATATGTCTGC ATACAAATTA CTGGTTTAAT ATTTTTCATA ATGCAGTCTG AATTTGGGGC 120AAAATAGTAA AAATCAAGCA CCTTTTTAGG ATTTCATAAC AGTAAAGTTC TGTGAAGCAG 180AGGTTTATTG GTCTAATCTG TCTATTTTGC TTCTGTTGTT TGGCGTATTT GTATATTTTC 240ACTAGGACTT GCTTTTTTTT TTTTTTTTTA GTTTGTTTAT ATTTTGAGAG CTTGTCTTGC 300CTCCACATAT GGTTATTTAC ACCATGTCTT ATGTCATAGG TGGATTTTAA CAAGGAATTA 360TAAAGCCCTC AGTAAAGGTT CAAAAGGCAG TACCTCTGGC TTTCTGAACA TTATGATGGA 420ACTCAAAAAG TGTTGTAACC ATTGCTACCT CATTAAACCA CCAGATGATA ATGAATTCTA 480TAATAAACAG GAGGC495 上述的方法，所述351bp的特异性扩增条带的核苷酸序列(SEQ ID NO. 4)为AGTGCATTGC AGAAGCAATA TTACAAGTAA GTAATGACAC TTTTAAAATC GCACTATTTT 60AATTAGATGT CTGTATGAAA AGTAATGAAG TGTAATAGTT TTCATGATGC AATTTGAAAT 120GATATTTTGA GAGCTTACCA TTTGTGGAAA TATGACATGT TAGAAATTAC TTCCACTACA 180CGTTTTATAT CATAGGTGGA TTTTAACCAG GAATTATAAA GCCCTGAGTA AAGGTTCAAA 240AGGCAGTACC TCAGGCTTTT TGAACATCAT GATGGAACTC AAGAAGTGTT GTAACCATTG 300CTACCTCATT AAACCACCAGATGATAATGAATTCTATAATAAACAGGAGGC 351另外，本专利技术还提供了一种鸭性别鉴定用试剂盒，其特征在于，包含上述鸭性别鉴定用PCR引物。本专利技术与现有技术相比具有以下优点本专利技术利用同时存在于鸭性染色体W染色体和Z染色体上的CHDl基因序列合理设计PCR引物，然后结合PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳技术，根据PCR扩增片段的长度检测个体鸭是否含有W染色体，从而确定个体鸭的性别，具有操作简单方便，鉴别快速，结果准确等优点，避免了采用传统方法耗时、耗力，易出错的缺点。下面结合附图和实施例对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。附图说明图I为本专利技术实施例2的PCR扩增产物的部分电泳图谱。具体实施例方式实施例I利用同时存在于鸭性染色体W染色体和Z染色体上的CHDl基因序列设计一对PCR引物PF(SEQ ID NO. I) PR (SEQ ID NO. 2);所述引物的序列为上游引物PF:5' -AGTGCATTGCAGAAGCAATATT-3'；下游引物PR :5' -GCCTCCTGTTTATTATAGAATTCAT-3'。本专利技术的鸭性别鉴定方法通过以下实施例2和实施例3进行描述实施例2步骤一、将102只高邮鸭的抗凝血液经常规裂解和消化处理后，应用传统的苯酚/氯仿法提取总DNA，并将总DNA浓度稀释至50ng/ u L作为模板DNA ；步骤二、采用含有PCR引物PF (SEQ ID NO. I)和PR (SEQ ID NO. 2)的试剂盒对步骤一中所述模板DNA中的CHDl基因进行PCR扩增，PCR扩增反应体系(25 y L体系)为模板DNA 45ng 55ng，2XPCR 扩增缓冲液 12. 5 u L, 5 u mol/L 上游引物 2u L,5u mol/L 下游引物L，加水至25ii L ;PCR扩增反应条件为94°C预变性5min，然后经94°C变性30s，55°C复性30s，72。。延伸30s，35个循环，最后72°C延伸7min ；步骤三、取5 ii L步骤二中所得PCR扩增产物，使用2 %的琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行鉴定，部分电泳图谱见图1，图中从左至右，其中泳道1-8为高邮鸭样品，泳道9为Marker,结果显示第一泳道、第二泳道、第六泳道和第七泳道均显示两条条带,两条条带分别为核苷酸序列见SEQ ID NO. 3的495bp的特异性扩增条带和核苷酸序列见SEQ IDNO. 4的351bp的特异性扩增条带和核苷酸序列，命名为ZW型，属雌性鸭；第三泳道、第四泳道、第五泳道和第八泳道均显示一条核苷酸序列见SEQ ID NO. 3的495bp的特异性扩增条带，命名为ZZ型，属雄性鸭；鉴定结果与高邮鸭个体性别记录结果一致，见表I。表I高邮鸭本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧芳，胡艳，宋迟，束婧婷，单艳菊，朱文奇，宋卫涛，汤青萍，朱春红，陶志云，章双杰，韩威，章明，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：