鱼类受精卵定向包埋技术制造技术

鱼类受精卵定向包埋技术，它涉及定向包埋技术。它解决了现有制片中受精部分易丢失及切制质量差的问题。方法1：鱼卵固定后进行脱水、透明和透蜡处理；包埋后进行定位修块；标记受精部分并切取，二次定向包埋制成光镜包埋块；制成常规光镜片子即完成。方法2：鱼卵固定后进行脱水、透明和透蜡处理；包埋后进行定位修块；标记受精部分并切取，二次固定，后冲洗、脱水处理，环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；制成常规电镜片子即完成。本发明专利技术制成的光镜或电镜的样本，可保证鱼卵能够切制完整，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容，切制质量好，图像清晰，观察效果良好；同时减少了大量烦索的工作量，提高效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及定向包埋技术。
技术介绍
由于鱼类卵黄丰富在常规光镜切片时不能切制，再一个受光显微镜和电镜的局限性及切片厚度的影响，在选择鱼受精部分时容易将需要部分(通常指受精部分)丢失。直接制成的光镜或电镜样本，由于切片面积小，修块不准等多种原因，又容易将需要的部分修丢，造成不完整现象，直接影响观察，这样必需做大量样本才能观察到所需要的部分。
技术实现思路
本专利技术提供了鱼类受精卵定向包埋技术，目的是为了解决现有制片中受精部分易丢失及切制质量差的问题。鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本专利技术的鱼类受精卵定向包埋技术，制成的光镜或电镜的样本，可保证鱼卵能够切制完整，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容，切制质量好，图像清晰，观察效果良好，使微观与宏观的结构有一个统一认识；同时减少了大量烦索的工作量，提高效率。附图说明图I为实施例I中所得完整的鲫鱼受精卵光镜片子的显微图；图2为实施例I中所得鲫鱼受精卵动物极光镜片子的显微图；图3为实施例2中所得鲫鱼受精卵极体电镜片子的显微图；图4为实施例2中所得鲫鱼受精卵两性核电镜片子的显微图。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施方式步骤一中鱼卵为所有鱼类的鱼卵。本实施方式步骤一中脱水处理为依次采用体积浓度为70%的乙醇、体积浓度为 85%的乙醇、体积浓度为75%的乙醇和体积浓度为100%的乙醇进行处理。本实施方式步骤一中透明处理为采用体积浓度为100%的乙醇二甲苯=I I 进行处理，然后用二甲苯进行处理。本实施方式步骤一中透蜡处理为采用二甲苯石蜡=I I进行处理，然后用石蜡进行处理。本实施方式步骤二中反光定位法，是将包埋块固定住放于立体显微镜下，然后调节光源，使包埋块的卵子的切面与水平面间成28 32度，使切面出现反光，观察其结构选取受精部分，然后用锋利刀片进行定位修块。本实施方式步骤三中热刀片是指用酒精灯烧热的刀片。具体实施方式二 本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施方式步骤一中鱼卵为所有鱼类的鱼卵。本实施方式步骤一中脱水处理为依次采用体积浓度为70%的乙醇、体积浓度为 85%的乙醇、体积浓度为75%的乙醇和体积浓度为100%的乙醇进行处理。本实施方式步骤一中透明处理为采用体积浓度为100%的乙醇二甲苯=I I 进行处理，然后用二甲苯进行处理。本实施方式步骤一中透蜡处理为采用二甲苯石蜡=I I进行处理，然后用石蜡进行处理。本实施方式步骤二中反光定位法，是将包埋块固定住放于立体显微镜下，然后调节光源，使包埋块的卵子的切面与水平面间成28 32度，使切面出现反光，观察其结构选取受精部分，然后用锋利刀片进行定位修块。本实施方式步骤三中热刀片是指用酒精灯烧热的刀片。本实施方式步骤三中锇酸的配制方法4% K2CrO7重铬酸钾(PH7. 2)5ml+2% OsO4 四氧化锇水溶液10ml+3. 4% NaCl氯化钠水溶液5ml进行混合得固定液，使固定液中含I % 重铬酸钾、I %四氧化锇和0.85%氯化钠，最终PH = 7. 2。本实施方式步骤三中磷酸缓冲液的配制方法①取11. 876g的Na2HPO4定溶于 IOOOml蒸溜水中，获得溶液A ;②取4. 531g的KH2PO4磷酸二氢钾定溶于500ml蒸溜水中，获得溶液B 将溶液A和溶液B混合即得。本实施方式步骤三中各级丙酮进行脱水处理是依次采用体积浓度为50%的丙酮、 体积浓度为70%的丙酮、体积浓度为95%的丙酮和体积浓度为100%的丙酮进行脱水处理。实施例I鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施例步骤一中鱼卵采用鲫鱼的鱼卵。本实施例中所得光镜片子，经光镜观察，如图I和2所示，鱼卵能够切制完整且图像清晰、轮廓分明，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容。实施例2鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施例步骤一中鱼卵采用鲫鱼的鱼卵。本实施例中所得电镜片子，经电镜观察，如图3和4所示，鱼卵能够切制完整且图像清晰、轮廓分明，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容。权利要求1.鱼类受精卵定向包埋技术，其特征在于鱼类受精卵本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：关海红，尹家胜，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：