本发明专利技术公开了一种金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物，通过以下步骤制备完成：（1）将金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体溶于PBS缓冲液；（2）在步骤（1）所得溶液中加入戊二醛，制得金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物。本发明专利技术制得的金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物具有有效利用率极高的优点，同时，本发明专利技术所提出的制备工艺具有工艺简单、易于操作、特别适于工业化生产的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗病毒天然药物，具体地，涉及一种金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物。
技术介绍
金丝桃素(Hypericin, HY)是从藤黄科(Clusiaceae)植物贯叶连翅(Hypericum perforatum Linn.)中提取的萘骈二蒽酮化合物，具有光敏活性和光动作用，可应用于肿瘤的光化学诊断和治疗。但是由于金丝桃素对光、热不稳定性，目前市场上金丝桃素有效成分含量极低，远远达不到终端产品开发的要求。纳米药物是指以纳米级高分子纳米粒 (nanoparticles, NP)、纳米球(nanospheres, NS)、纳米囊(nanocapsules, NC)等为载体， 与药物以一定方式结合在一起后制成的药物，其粒径可能超过100 nm,但通常应小于500 nm，纳米药物也可以是直接将原料药物加工制成的纳米粒。白蛋白不仅具备以上特点，它还具有免疫原性低的特点。另外，白蛋白中的氨基酸以肽键相连接，且扭曲成团状，具网状空隙，为镶嵌携带药物创造了有利条件，与脂质体和乳剂相比，白蛋白纳米粒的体内和贮存稳定性较好。因此，以牛血清白蛋白作为载体材料包封天然抗病毒药物有效成分金丝桃素，得到金丝桃素白蛋白纳米粒是一种较好的解决办法，它不仅提高了金丝桃素的有效含量，同时改善了其对光、热的不稳定性，为金丝桃素及类似的植物有效成分的产品开发提供了一种途径，另外，由于金丝桃素白蛋白纳米粒粒径小，易于通过机体屏障，还具有免疫系统被动靶向作用，易于药物在免疫系统的聚集，这代表了药物有效成分的一个发展趋势。以上只是在一定程度上提高了金丝桃素的有效含量，但是，如果进一步增强金丝桃素的有效利用率，现有技术没有相关的记载。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物，由于纳米制剂本身具有被动靶向作用，同时，免疫球蛋白G 抗体具有主动靶向作用，可以和机体的抗原产生抗原抗体反应，将药物带到机体特定部位， 两者结合后大大增强了药物的靶向性，提高了金丝桃素的药效，同时，该制备工艺可在室温下进行，工艺简单，易于操作，特别适于工业化生产。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案一种金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物，通过以下步骤制备完成(1)将金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体溶于PBS缓冲液；(2)在步骤(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物。具体地,步骤(I)所述金丝桃素白蛋白纳米粒的粒径为60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗体为分子量为150 kDa的牛免疫球蛋白G抗体。具体地，步骤(I)所述的免疫球蛋白G抗体和金丝桃素白蛋白纳米粒质量比为 1:1-1:15。具体地，步骤(I)所述PBS缓冲液的PH为7. 2 ;步骤(2)所述戊二醛为质量浓度I %-10%的新鲜戊二醛。具体地，步骤(2)所述戍二醒的加入条件为400rpm/min-1000 rpm/min搅拌、-10-30°C下缓慢滴加。本专利技术所述金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物的制备方法，包括以下步骤(1)将金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体溶于PBS缓冲液；(2)在步骤(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物。具体地,步骤(I)所述金丝桃素白蛋白纳米粒的粒径为60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗体为分子量为150 k Da的牛免疫球蛋白G抗体。具体地，步骤(I)所述的金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体的质量比为 1:1-1:15。具体地，步骤(I)所述PBS缓冲液的PH为7.2 ;步骤(2)所述戊二醛为质量浓度I %-10%的新鲜戊二醛。具体地，步骤(2)所述戍二醒的加入条件为400rpm/min-1000 rpm/min搅拌、-10-30°C下缓慢滴加。所述金丝桃素白蛋白纳米粒制备工艺如下精确称取牛血清白蛋白2.0 g溶于98 ml蒸馏水中制成载体溶液，称取金丝桃素(HY) 4. Og溶96ml无水乙醇中制成油相,在室温-ICTC 30°C,搅拌条件下(400 rpm/min 1000 rpm/min)，将油相5ml滴加到50 ml载体溶液中，调充分乳化并调节PH为9，继续以O. 5 ml/ min滴加20ml无水乙醇,充分搅2h,戍二醒固化24h, 15000rpm/min高速离心15min,洗漆 3次，冷冻干燥，收集，得到乳白色金丝桃素白蛋白纳米粒，平均粒径为120 nm，载药量4. 12 %，包封率71. 43 %。本专利技术具有以下有益效果1、本专利技术是将金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体相偶联，是两种蛋白质之间的偶联，而非中药有效成分直接与蛋白相偶联。纳米药物由于其较小的粒径和亲水表面使其在体内不易被巨噬细胞吞噬，它对特定器官具有强的亲和力，因而具有被动靶向作用，另外，纳米粒同抗体偶联，借助机体的抗原抗体反应，将药物带入特定部位，使其具有主动靶向性，因此两者结合后大大增强了药物的靶向性，提高了金丝桃素的药效；2、本专利技术的金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物为乳白色的固体粉末状，粒径范围为210nnT300nm，稳定性好，易于保存，易于机体对药物的吸收、利用，减少副作用，提闻药效；3、本专利技术的金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物制备的方法简单、耗能低、不需要特殊的设备就能大量生产。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中图I是本专利技术实施例一制备的金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物的 SDS-PAGE电泳图。具体实施例方式以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例I将200 μ L免疫球蛋白G抗体和200 μ L金丝桃素白蛋白纳米粒(质量比为I :1)溶于 4 ml PBS缓冲液,室温下,搅拌条件为400 rpm/min;以O. 5 ml/min缓慢滴加新鲜戍二醒 IOOyL (所谓新鲜戊二醛是指用时现配的)，充分搅拌2 h使金丝桃素白蛋白纳米粒与免疫球蛋白G抗体交联，冷冻干燥，得到金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物。以普通金丝桃素，金丝桃素白蛋白纳米粒和金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋 G抗体偶联物对免疫抑制小鼠灌胃，测定免疫器官指数(包括脾脏指数和胸腺指数)。从脾脏指数的数据统计结果可看出空白对照组的脾脏指数为(3.60±0.89 mg/g)，免疫抑制模型组的脾脏指数为(2. 16±0.45 mg/g)，普通金丝桃素组的脾脏指数为(2.26±0.37mg/ g)，与模型相比，无显著差异，说明普通金丝桃素不能将免疫抑制小鼠的脾脏指数恢复到正常水平。金丝桃素白蛋白纳米粒组的脾脏指数为(4. 14±0. 37 mg/g)，与空白对照组和免疫抑制模型组相比，有显著差异(P < O. 05)，说明金丝桃素白蛋白纳米粒能显著提高免疫抑制小鼠的脾脏指数。金丝桃素白蛋白纳米粒-免疫球蛋白G抗体偶联物的脾脏指数为 (4.46±0.81 mg/g)，与空白对照本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁剑平，胡小艳，陶蕾，王学红，刘宇，尚若峰，赫宝成，华兰英，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：
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