本发明专利技术公开了一种与I群禽腺病毒免疫相关融合蛋白及其编码基因与应用。本发明专利技术提供的融合蛋白，包括Hexon蛋白和鸡白细胞介素-2；所述Hexon蛋白为由序列表中序列6的自N’末端的第1-914位氨基酸序列组成的蛋白质；所述鸡白细胞介素-2为由序列表中序列6的自N’末端的第933-1075位氨基酸序列组成的蛋白质。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术提供了一种包括I群禽腺病毒的Hexon基因和鸡白细胞介素-2(chIL-2)基因串联起来的DNA分子，将其通过表达载体注射到鸡的肌肉中，可以产生Hexon特异抗体，具有良好的免疫保护效果，并且进行I群禽腺病毒攻毒实验后，可以使有效地预防I群禽腺病毒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种与I群禽腺病毒免疫相关融合蛋白及其编码基因与应用。
技术介绍
I群禽腺病毒(fowl adenovirus group I,FAVI)包括从鸡、火鸡、鹅和其他禽类分离的共12个血清型的病毒，其中比较著名的病毒株有鸡胚致死孤儿病毒、鹌鹑支气管炎病毒、鸡包涵体肝炎病毒。近年来，I群禽腺病毒引起了鸡只包涵体肝炎、心包积液肝炎综合征和砂囊糜烂等疾病，虽然I群禽腺病毒常呈阴性感染，但是它与其他病原共同作用于家禽， 给养禽业带来较大威胁。相对于传统疫苗，基因工程疫苗的生产完全在体外进行，无需以易感动物为载体来获得病毒制备活疫苗或者灭活苗；同时，基因工程疫苗不含能引起鸡群发病的成分，因而没有散毒的危险。其中，DNA疫苗是将含有编码抗原基因的质粒DNA直接导入体内，使抗原基因在体内表达，诱导机体产生免疫应答，包括中和抗体、淋巴细胞和辅助T细胞。通过此种疫苗表达的蛋白能够以天然抗原形式被免疫系统识别，热稳定性好、免疫力持久。鸡白细胞介素2(ChIL_2)是辅助T细胞分泌的淋巴因子，在免疫系统中发挥重要作用，可促进T细胞、NK细胞、B细胞的分化成熟及激活其生物活性，诱导淋巴因子激活杀伤细胞活性，促进干扰素、肿瘤坏死因子等的合成与释放以及抗体生成，可大大增强机体免疫功能，因此ChIL-2作为DNA疫苗佐剂已经被国内外广泛使用。面对艰难的I群禽腺病毒防治工作，尽快开展相关疫苗研制显得非常必要，DNA疫苗是很好的发展方向。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种与I群禽腺病毒免疫相关融合蛋白及其编码基因。本专利技术提供的融合蛋白，包括Hexon蛋白和鸡白细胞介素_2 ；所述Hexon蛋白为如下I)或2)所示的蛋白质I)由序列表中序列6的自N’末端的第1-914位氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列6的自N’末端的第1-914位氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由I)衍生的蛋白质；所述鸡白细胞介素-2为如下3)或4)所示的蛋白质3)由序列表中序列6的自N’末端的第933-1075位氨基酸序列组成的蛋白质；4)将序列6的自N’末端的第933-1075位氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由3)衍生的蛋白质。上述融合蛋白为如下I)或2)中任一所述的蛋白质I)由序列表中的序列6的氨基酸残基序列组成的蛋白质；2)将序列表中的序列6氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由I)衍生的蛋白质。上述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。上述融合蛋白依次由Hexon蛋白、linker和鸡白细胞介素_2蛋白组成；融合蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列6，其中，自N’末端第933-1075位氨基酸为鸡白细胞介素-2蛋白，自N’末端第1-914位氨基酸为Hexon蛋白，自N’末端第915-932位氨基酸为 Linker 接头。本专利技术的另一个目的是提供一种DNA分子。本专利技术提供的DNA分子，包括Hexon蛋白的编码基因和鸡白细胞介素-2的编码基因；所述Hexon蛋白的编码基因为如下1)_3)中任一所述的DNA分子I)序列表中序列5自5’末端的第16-2779位核苷酸所不的DNA分子；2)在严格条件下与I)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；3)与I)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有 85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子；所述鸡白细胞介素-2的编码基因为如下4)-6)中任一所述的DNA分子4)序列表中序列5自5’末端的第2825-3265的DNA分子；5)在严格条件下与4)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；6)与4)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有 85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。上述DNA分子为如下a) -c)中任一所述的DNA分子a)序列表中序列5所示的DNA分子；b)在严格条件下与a)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；c)与a)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有 85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。上述严格条件为在6XSSC，O. 5% SDS的溶液中，在65°C下杂交，然后用2XSSC， O. I % SDS 和 I X SSC, O. I % SDS 各洗膜一次。含有上述DNA分子的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒也是本专利技术保护的范围。上述重组载体为将上述DNA分子插入载体pcDNA3. I的Hind III和Xba I位点中得到的重组载体。本专利技术的第三个目的是提供一种预防禽腺病毒的疫苗。本专利技术提供的预防禽腺病毒的疫苗，它的活性成分为如下I)-3)中的任意一种 I)上述的融合蛋白；2)上述的DNA分子；3)上述的重组载体；上述禽腺病毒具体为I群禽腺病毒。上述融合蛋白、上述的DNA分子或上述的重组载体在制备预防禽腺病毒的疫苗中的应用也是本专利技术保护的范围。在上述应用中，上述禽腺病毒为I群禽腺病毒。上述Hexon蛋白或其编码基因在制备预防禽腺病毒的疫苗中的应用也是本专利技术保护的范围；在上述应用中，所述禽腺病毒具体为I群禽腺病毒。本专利技术的实验证明，由于Hexon基因蛋白是I群禽腺病毒的主要表面抗原蛋白，含有中和性抗原表位，能诱导中和抗体的产生，而鸡白细胞介素2(ChIL-2)作为佐剂可以增强抗原的免疫原性和反应原性，因此本专利技术提供了一种包括I群禽腺病毒的Hexon基因和鸡白细胞介素-2 (chIL-2)基因串联起来的DNA分子，将其克隆进表达载体后注射到鸡的肌肉中，可以产生Hexon特异抗体，具有良好的免疫保护效果，并且进行I群禽腺病毒攻毒实验后，可以有效地控制I群禽腺病毒，使鸡不排毒，说明该DNA分子及由其构建的重组载体能够有效地预防I群禽腺病毒，且具有安全性高、在体内维持时间长、制备简单、热稳定性良好、便于储藏和运输等优点。附图说明图I为重组质粒pcDNA3. l-Hexon_chIL2的PCR鉴定2为不同疫苗免疫鸡后I群禽腺病毒抗体水平的动态变化图具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例I、含有Hexon的编码基因和chIL2的编码基因的DNA片段的获得一、Hexon的编码基因和chIL2的编码基因的获得根据I 群禽腺病毒(fowl adenovirus group I,FAVI)的Hexon基因序列和 chIL2 的基因序列，利用软件primerprimer5. O设计Hexon基因的引物Ha、Hb和chIL2基因的引物chIL2a、chIL2b,下划线处为linker本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，谢丽基，唐熠，谢志勤，庞耀珊，邓显文，刘加波，范晴，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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