银莲花属植物中一种抗肿瘤皂苷及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及银莲花属植物中一种三萜皂苷类化合物的的制备方法和在医药方面的用途，特别是在抗肿瘤方面的用途。该化合物分子式为C47H76O16，化学名称为3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-[β-D-葡萄糖基-(1→4)]-α-L-阿拉伯糖基-齐墩果酸，即：oleanolic?acid-3-O-α-L-rhamanopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→4)]-α-L-arabinopyranosid。本发明专利技术公开的该化合物的提取制备工艺，适用于工业化生产，并且通过碱水解的方法，能够使药材中其他皂苷类化合物转化为该皂苷，从而使得目标皂苷化合物含量大幅提高。体内外抗肿瘤实验表明，该化合物对多种肿瘤细胞生长有抑制作用，并且对正常细胞生长基本无抑制毒害作用，可用于肿瘤疾病治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，涉及从银莲花属植物中提取分离得到一种具有抗肿瘤活性的化合物，及其在抗肿瘤方面的应用。
技术介绍
癌症是一种常见且发病率和死亡率都在逐年上升的疾病。然而目前尚无有效的方法和药物可以治愈，因此通过开发天然产物寻找一种安全毒副作用小的抗癌药物成为目前的热点。银莲花属(Anemone)为毛茛科(Ranunculaceae)中最大的一个属，共有植物150 余种，世界各地均有分布。银莲花属植物在我国共有50余种，除海南岛外，其他各省均有分布。银莲花属植物在我国有悠久的药用历史，在民间该属植物的药用种类较多，功效广泛。常用种类如下阿尔泰银莲花(Anemone altaica),黑水银莲花(A. amurensis), 西南银莲花(A. davidii),细莖银莲花(A. rossii),毛果银莲花(A. bacalensis),展毛银莲花(A. demissa), 二歧银莲花(A. dichotoma),林荫银莲花(A. flaccida),打破碗花花(A. hupehensis)，秋牡丹(A. hupehensis var. japonica)，多被银莲花(A. raddeana)， 反萼银莲花(A. refIexa),草玉梅(A. rivularis),小花草玉梅(A. rivularis var. flore-minore)，大火草(A. tomentosa)，条叶银莲花(A. trullifolia var. linearis),野棉花(A. vitifolia)等。银莲花属植物所含的化学成分主要有三萜皂苷类、香豆素类、黄酮类、甾体类、酚类及有机酸类等。其中三萜及其苷类在银莲花属植物中广泛大量存在，是银莲花属植物中研究最为深入的一类。其苷元主要为齐墩果酸，常春藤皂苷元，夹竹桃酸等。 本属植物主要功效有祛风湿，消痈肿，抗炎，解热，镇痛，抗肿瘤，抗惊厥等。现有的研究资料表明这些植物大多含有三萜皂苷类成分。目前已经从银莲花属植物中分离得到100余个三萜皂苷类化合物，进一步的药理实验研究结果表明，其中大多数都具有很好的抗肿瘤效果O
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种银莲花属植物中一种抗肿瘤皂苷及其制备方法和用途， 从银莲花属多种植物中提取制备AR17的方法及其在治疗肿瘤疾病中的应用。本专利技术提供了一种抗肿瘤皂苷，其分子式为C47H76O16，化学名称为3-0-α -L-鼠李糖基-(I — 2)--a-L_阿拉伯糖基-齐墩果酸(oleanolic ac id-3-0- a -L-rhamanopyranosyI- (I — 2) - - a -L-arabinopyr anoside)。简称 AR17。本专利技术还涉及一种通过碱水解的方式从毛茛科银莲花属多种植物中提取制备具有抗肿瘤活性的一种化合物AR17的方法。本专利技术中AR17的提取制备工艺步骤如下(I)将银莲花属多种药用植物的根及根茎、地上的茎、叶、花或果实等药材部位粉碎，粉碎粒度为5-30目。所述的银莲花属植物选自多被银莲花(Anemone raddeana)、黑水银莲花(A. amurensis)、细莖银莲花(A. rossii)、毛果银莲花(A. bacalensis)、西南银莲花(A. davidii)或冻地银莲花(A. rupestris)等。(2)药材在提取前用提取溶剂乙醇，水或者乙醇碱溶液，碱水溶液按照药材溶剂 =Ikg 4-12L进行浸泡l_12h，其中乙醇浓度为20% -90 %，碱浓度为0. 05-2. 0M，所用碱为NaOH或KOH或Na2CO3或K2CO3或Na2S或K2S或NH4OH的水溶液。(3)药材经常压冷凝加热回流提取2-4次，每次l-3h，合并各次提取液。(4)药材的乙醇提取液回收乙醇或水提取液浓缩至一定体积，加入上述碱溶液，加热并不断搅拌水解1-6小时，加入2%-3%盐酸调节PH值至中性，或者此步不调中性，然后按药材树脂重量比为I : 2-3上大孔树脂柱HPD300，HPD400，HPD450或DlOl型，静态吸附4-10h，再用蒸馏水，以Ikg药材20-25L蒸馏水，洗脱速度为O. 8-lL/h进行洗脱除杂，然后再以50% -90%乙醇洗脱，所用乙醇量为以Ikg药材20-25L乙醇，洗脱速度为O. 5-0. 8L/ h进行洗脱除杂收集乙醇洗脱液,回收乙醇。(5)药材也可以采用直接碱乙醇液或碱水提取，碱乙醇提取液回收乙醇，或者碱水提取液浓缩至一定体积，加入2%-3%盐酸调节PH值至中性，或者此步不调中性，然后按4) 项相同操作。(6)将4)或5)所得产物通过硅胶柱色谱进一步分离纯化，以乙酸乙酯甲醇水比例6-11 O. 5-2 O. 05-0. 2为流动相洗脱，通过TLC检测目标产物AR17，所用TLC条件为展开剂为氯仿甲醇水=13 7 I时目标产物Rf为O. 35-0. 5，收集洗脱液，回收溶剂。(7)也可将3)所得的提取液回收溶剂后直接上硅胶柱色谱，按6)操作。(8)将上述各种不同提取分离方法得到的产物用乙酸乙酯甲醇水= 6-11 O. 5-2 O. 05-0. 2，或者乙醇甲醇=8-12 3-1 或者甲醇水=8-10 2-0.1 或者乙醇水=1-9 9-1重结晶，得到纯度高于90%的AR17。此处需要说明的是，本专利技术的关键之处在于碱水解，经本研究表明，碱水解可以适用于样品提取、富集或纯化中的任一步骤，所用碱为NaOH或KOH或Na2CO3或K2CO3或Na2S 或K2S或NH40H的水溶液，水解用的碱水或碱乙醇溶液的碱浓度为0. 05-2. 0M。本专利技术的特点是，在所采用的AR17提取制备工艺参数下，AR17收率高，而且经过关键性的碱水解步骤后AR17的含量显著增加。在治疗肿瘤疾病时，本专利技术制备得到的AR17可以单独使用，也可以和其它药物辅料混合后配制成不同剂型再使用。本专利技术的药理实验研究结果表明，AR17对人肝癌细胞H印G2，人食管癌细胞 Eca_109，人口腔表皮样癌细胞KB，人肝癌细胞H印3B，人肺癌A549，人膀胱癌细胞5637等多种肿瘤细胞均有抑制作用，提示可以用于肿瘤治疗。该方法简单易行，稳定可靠，收率高，适合工业化生产，并且采用本方法药材经过直接碱水解提取或常规提取再经过碱水解以后，能够使药材中其他皂苷转化为AR17，从而使得目标皂苷AR17含量大幅增高近5倍。体内外抗肿瘤实验结果显示AR17对多种肿瘤细胞生长具有抑制作用。可以作为抗肿瘤药物制剂的原料。附图说明图I 为 ARl7 的 1H-NMR 谱图。图2 为 ARl7 的 13C-NMR 谱图。图3 为 ARl7 的 DEPT 谱图。图4 为 AR17 的 H-Hcosy 谱图。图5 为 ARl7 的 HMBC 谱图。图6 为 ARl7 的 HMQC 谱图。具体实施例方式一、AR17 制备皂苷AR17制备实例一粉碎500g多被银莲花根茎，过10目筛，加入8倍量O. 2M的65%乙醇氢氧化钠碱溶液，浸泡6h后，回流提取三次(每次加醇量8倍，8倍，8倍)，每次I. 5h，合并提取溶液， 回收至无醇味，药液用蒸馏水适当稀释，用HPD-400大孔树脂吸附5h，所用树脂量为lkg，先用12L蒸馏水，以lL/h速度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：路金才，贾凌云，王晶，吕重宁，林杨，薛娇，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，沈阳药科大学本溪医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：