本发明专利技术涉及一种表达禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白重组菌的构建。本发明专利技术通过合成了禽脑脊髓炎VP1基因的引物，构建了带有该基因的高效表达载体的重组菌，实现了禽脑脊髓炎VP1蛋白在大肠杆菌中的高效表达，可溶性蛋白表达量约占菌体总蛋白的60％。该表达产物为胞液中可溶性蛋白，具有天然VP1蛋白的抗原活性，用其制备成的禽脑脊髓炎VP1亚单位疫苗能有效地保护禽类免遭禽脑脊髓炎病毒的攻击。这将为工业化生产禽脑脊髓炎亚单位灭活疫苗奠定了坚实的基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及表达禽脑脊髓炎病毒VPl蛋白重组菌的构建，属于分子生物学领域， 也属于兽用生物制品领域。
技术介绍
禽脑脊髓炎又称流行性震颤，是由禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitis Virus, AEV)引起的一种主要侵害雏鸡的传染病，其特征性病理变化为非化脓性脑脊髓炎， 典型症状为运动失调，头颈震颤和渐进性麻痹(赵振华、禹旺盛、郝宪谱等.禽脑脊髓炎的发生与诊断.内蒙古畜牧科学.1994，3 :34-37)。世界几乎所有饲养商品鸡的地区都发生过该病，我国自上世纪80年代以来各地陆续暴发此病，给养禽业带来较大的经济损失。由于本病具有突然出现，难以预测持续期，可通过水平接触和垂直传播等特点，所以对养禽业的危害非常严重，唯一有效办法是通过对产蛋种鸡接种疫苗来预防后代雏鸡的发病。目前国内对禽脑脊髓炎疫苗的研究大多集中在灭活疫苗的研制，国外为弱毒活疫苗的研究报道。AEV是小RNA科肠病毒属成员，基因组为单链正股RNA(Calnek，B. ff.，Luginbuhl， R. E.，Helmboldt, C. F. ,1997.Avian encephalomyelitis diseases of Poultry. Iowa State University Press，Ames，IA，pp. 571-581) AEV 仅有一个翻译起点，编码产生一个多聚蛋白，多聚蛋白在病毒编码的活性蛋白的作用下，级联水解成功能性蛋白，VPl是病毒的四种结构蛋白中的一种，与病毒的侵入及参与构成病毒的抗原成分有关。新加坡的Li Wei (2008)最近报道用细胞表达的VPl亚单位疫苗能有效地保护鸡免受AEV的感染。他们将AEV的主要抗原蛋白VPl、VP0、VP3分别在细胞SF9中进行表达，然后纯化蛋白，制成亚单位疫苗，并对VPUVPO和VP3生物活性进行了检测，结果发现VP1是主要的抗原蛋白，能有效地保护鸡免受 AEV 的感染(Wei L, Chee LL, Wei T et al. The VPl protein of avian encephalomyelitis virus is a major host-protective immunogen that serves as diagnostic potential. J Virol Methods. 2008Apr ; 149 (I) :56-62.)。完整的病原体含有许多抗原，但并非所有抗原都能刺激宿主产生保护性应答。其中某些抗原还能引起过敏，免疫抑制和其他副作用，这是使用完整的病原体做疫苗的缺陷。 并且目前国内应用的灭活苗生产制备抗原过程繁琐，而弱毒疫苗现也有接种疫苗发病情况存在。而用亚单位疫苗则可以解决这个问题，尤其是这种疫苗除了具有抗原稳定性高，纯度高，特异性强，敏感性高，不产生其他不相关抗体，免疫效果检测方法方便准确外，还十分易于生产。不用动物体或是胚体生产，不会带有组织残留物。而且不需灭活，但安全性高。通过对禽脑脊髓炎病毒VPl cDNA全序列进行筛选和分析，选取了其中一段抗原表位较丰富、能够在原核细胞中高效表达的cDNA序列，构建了原核表达载体，进行原核表达， 并成功地表达出可溶性的重组蛋白。利用本专利技术可以生产出禽脑脊髓炎亚单位疫苗，具有商业使用价值
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能表达禽脑脊髓炎病毒VPl蛋白重组菌的构建，得到的重组菌，以求为大规模工业化生产禽脑脊髓炎病毒VPl蛋白亚单位疫苗提供生产用菌株。I.禽脑脊髓炎病毒VPl重组菌的构建本专利技术设计合成了能生产禽脑脊髓炎VPl蛋白的基因，这种基因含有如下核苷酸序列(序列I)5'GAGGACAAGG AGTTGGCGAG TATGGATCTG CAGTACACAT TAAGTCTTTT CGGCATTGTA ACGTTGAACT GGATCCCTTT GGCAATTACA TTTAATGAAG GCAAGACAGT CGATGAAATT-ATGGGGAAAG AGGATGAAGGI AGGATTTTCCAGTGTGCCTGAAGTGGAGCAACATGTTGTTAACCACAGGGACCTTTGCACGTGACACCTTTTGGCGCTGTTAAAGCCATGGAGGACCCTCGAAAACACCTGGTACATTTCCTGAATTAGCTCCTGGTAAACCTCGACACACAGTAGACCATATAAGTTTATGGGGCGTGCCCATTACTTGTGGGGACATAAATTTACCAAAACTGATATGTCCAGATACCATTGAGTCCCATCAAGGAGGGTTTTGTGACGGGAACGCTTAGGTGGTTTTCCAATTGTATCGTGGTTCTCTCGACATTACCATGACATTCGCAGGAAAGACTAATGTAGATACTTTGTGCCTGAGGGTGTTGCGATAGAGACTGAGAGGAAGGAACAGACCCCTCTGCTCACAAAACATCGGTAGGTGCCATTAGGTTTAATACTGGACAAACTACAAATGTCCAGTTTACTACACGCCACTGGAGCACATCGCAACCCATTCTAAAAACGCGATGGACTCAGTCTTGGGACTCAGATCACCAATTATAGTGCTCAGGATGAGTACCTGCAGGTCACCTACTATATCAGCATTCACAGTTTTCTGTTCCCAGAGCGGTACCAGTGGTTAGCTCATTCACTGACACATCTAGATGAATACATATTGGCTCGATGATGACGAGTTGGTGGAAGGGTCCTCCCATTTTAGTTTGAGGAGGCCCAATGTTAA-3'MetGlyLysGluAspGluGlyGlyPheSerSerValProGluValGluGlnHisValValGluAspLysGluProGlnGlyProLeuHisValThrProPheGlyAlaValLysAlaMetGlu AspProGlnLeuAlaArg LysThrProGlyThrPheProGluLeuAsp ProGlyLysProArgHisThrValAspHisMetAsp Leu Tyr Lys Phe Met Gly Arg Ala His Tys LeuTrpGlyHisLysPheThrLysThrAspMetGlnTyrThePheGlnHeProLeuSerProHeLysGluGlyPheValThrGlyThrLeuArgTrpPheLeuSerLeuPheGlnLeuTyrArgGlySerLeuAspHeThrMetThrPheAlaGlyLysThrAsnValAspGlyHeValTyrPheValProGluGlyValAlaHeGluThrGluArgLysGluGlnThrProLeuLeuThrLeuAsnTyrLysThrSerValGlyAlaHeArgPheAsnThrGlyGlnThrThrAsnValGlnPheArgHeProPheTyrThrProLeuGluHisHeAlaThrHi本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭伟伟，范根成，左青山，刘新文，胡潇，
申请(专利权)人：青岛易邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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