本发明专利技术涉及巫山淫羊藿的组培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿。该方法包括以下步骤：A.将巫山淫羊藿种子消毒后于0～10℃低温沙藏层积处理；B.将层积处理后的种子进行消毒处理，再用无菌镊子将种胚剥出，备用；C.将消毒后的种胚接种于诱导培养基中培养，使种胚诱导愈伤组织而分化出不定芽，或者使种胚直接诱导出芽；D.将步骤C中所得芽转入增殖培养基中，生成组培丛芽；E.将步骤D诱导分化的芽丛长成的小植株转入生根培养基中，培养以形成白色须根，进而形成完整植株。该方法可以提高巫山淫羊藿的繁殖系数，缩短繁殖周期，对于保护野生巫山淫羊藿资源，促进其可持续利用及产业化具有重要价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属中药材栽培
，涉及巫山淫羊藿繁育方法，特别涉及巫山淫羊藿的组培快繁方法。
技术介绍
巫山淫羊藿Epimedium wushanense Τ· S. Ying为小檗科淫羊藿属多年生宿根性草本药用植物，为《中华人民共和国药典》2010年版一部所载品种。以其干燥的叶入药，有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，且具有改善心血管系统，调节内分泌和抗骨质疏松等生理活性。巫山淫羊藿药材原料主要依靠野生资源，随着国内外对其需求量的不断增大，巫山淫羊藿野生资源遭到严重破坏，不能满足国内外市场的需求。目前淫羊藿的繁殖方式主要有通过地下根茎的无性繁殖及种子繁殖(有性繁殖)，淫羊藿种子存在明显的休眠现象，繁殖发芽率低，且生长缓慢，生产上大多采用分株繁殖。人们期待有一种能够以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法来繁育和栽培巫山淫羊藿，以满足越来越大的巫山淫羊藿药用需求，并保护野生药用资源。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法来繁育和栽培巫山淫羊藿。本专利技术人发现以巫山淫羊藿种子为繁育材料，使用特定的培养条件，可以有利地实现上述有关巫山淫羊藿繁育中的一个或多个方面的要求。本专利技术基于此发现而得以完成。为此，本专利技术第一方面涉及一种巫山淫羊藿的组培快繁方法，包括以下步骤Α.外植体层积处理将巫山淫羊藿种子消毒后于O 10°C低温沙藏层积处理；B.外植体消毒将层积处理后的种子进行消毒处理，再用无菌镊子将种胚剥出， 备用;C.初代诱导将消毒后的种胚接种于诱导培养基中培养，使种胚诱导愈伤组织而分化出不定芽，或者使种胚直接诱导出芽；D.继代增殖将步骤C中所得芽转入增殖培养基中，生成组培丛芽；E.再生植株诱导生根将步骤D诱导分化的I 4cm长的健康的芽丛长成的小植株转入生根培养基中，培养以形成白色须根，进而形成完整植株。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤A中，所述消毒是如下方式处理将种子用流水冲洗，于酒精中浸泡，再在HgCl2中浸泡,再用无菌水冲洗。在一个实施方案中，步骤 A中，所述消毒是如下方式处理流水冲洗15-30min(例如约30min)，于45-75% (例如约 75% )酒精中浸泡10-60s (例如约30s)，再在O. 1-0. 5% (例如约O. 5%)的HgCl2中浸泡 2-8min (例如约6min),无菌水冲洗2_6次(例如约5次)。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤A中，所述低温沙藏层积处理是如下方式处理使种子与河沙按I : 2 5的比例混合，保持含水量50 70%，经3 8°C低温沙藏层积处理75 120天。由此处理的种子可以打破种子的休眠。在一个实施方案中，所述河沙是经高温灭菌l_5h(例如约2h)后再冷却至室温的河沙。在一个实施方案中，所述种子与河沙按I : (1-5)，例如约I : 3的比例混合。在一个实施方案中，所述种子与河沙按I 3的比例混合，保持含水量40-70% (例如约60%)。在一个实施方案中，所述种子与河沙按I : 3的比例混合，保持含水量60 %，经2-5°C低温沙藏层积处理60-100天(例如约90天)。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤B中，所述消毒是先用酒精消毒，接着用 HgCl2消毒。在一个实施方案中，步骤B中，将层积处理结束后的种子洗去河沙，于45-75% (例如约75% )酒精中浸泡10-60s (例如约30s)，无菌水冲洗2_6次(例如约5次)，再用 O. 1-0. 5% (例如约O. 5% )的HgCl2消毒2-8min(例如约6min)，无菌水冲洗2_6次(例如约5次)。在一个实施方案中，步骤B中，用灼烧冷却后的镊子和解剖刀将种胚轻轻剥出， 无菌滤纸吸干水分后，备用于下一处理步骤。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤C中，所述诱导培养基是包含MS+2， 4-D2mg/L+IBA 2mg/L+NAA O. 5mg/L+蔗糖 30g/L+0. 6%琼脂的培养基，或者是包含 MS+6-BA lmg/L+NAA O. 5mg/L+IBA lmg/L+蔗糖 30g/L+0. 6 % 琼脂的培养基，或者是包含 MS+IBA 2mg/L+6-BA O. 5mg/L+蔗糖30g/L+0. 6%琼脂的培养基。在一个实施方案中，步骤C中，所述诱导培养基是包含 MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/L+NAA O. 5mg/L+蔗糖 30g/L+0. 6%琼脂的培养基，以及包含 MS+6-BA lmg/L+NAA O. 5mg/L+IBA lmg/L+ 蔗糖 30g/L+0. 6%琼脂的培养基；或者是包含MS+IBA 2mg/L+6-BA O. 5mg/L+蔗糖30g/L+0. 6%琼脂的培养基。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤C的初代诱导是如下处理的将消毒后的种胚接种于包含 MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/L+NAA O. 5mg/L+蔗糖 30g/L+0. 6 % 琼脂的诱导培养基中培养，产生愈伤组织，接着在包含MS+6-BA lmg/L+NAA O. 5mg/L+IBAlmg/L+蔗糖30g/L+0. 6%琼脂的诱导培养基中培养，分化出不定芽；或者，将消毒后的种胚接种于包含MS+IBA 2mg/L+6-BA O. 5mg/L+蔗糖30g/L+0. 6%琼脂的诱导培养基中培养，直接诱导出芽。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤D中，所述增殖培养基是包含 MS+6-BA1. Omg/L+NAA O. 5mg/L+蔗糖30g/L+0. 6%琼脂的培养基。在一个实施方案中，在增殖培养基中培养的时间为20 60天，优选25 45天，例如约30天。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤E中，所述生根培养基是包含 1/2MS+0. INAAmg/L 的培养基。根据本专利技术第一方面的方法，其中各步骤中使用的培养基的pH值为pH5. O 7. 0， 优选ρΗ5· 5 6. 5，更优选ρΗ5· 8。根据本专利技术第一方面的方法，其中各步骤中使用的MS培养基中各自独立地添加 30g/L蔗糖和O. 6%琼脂。根据本专利技术第一方面的方法，其中各步骤中使用的培养基经100-130°C (例如约 121。。),0. 1-0. 5Mpa(例如约 O. IMpa)高温灭菌 15_25min(例如约 25min)处理。根据本专利技术第一方面的方法，其中各步骤中使用培养基培养的条件是温度20 30°C，光照强度1500 30001x，光照8 15h/d。根据本专利技术第一方面的方法，其中各步骤中使用培养基培养的条件是温度25±2°C，光照强度20001x，光照12h/d。5根据本专利技术第一方面的方法，其包括以下步骤A.外植体层积处理将巫山淫羊藿种子，流水冲洗，消毒后于O 10°C低温沙藏层积处理；B.外植体消毒将层积处理后的种子，先用酒精浸泡，再用升汞浸泡，无菌水冲洗干净，用无菌镊子将种胚剥出，备用；C.初代诱导将消毒后的种胚接种于包含MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/ L+NAAO. 5mg/L+蔗糖30g/L+0. 6 %琼脂的诱导培养基中培养，产生愈伤组织，接着在包含 MS+6-BA lmg/L+NAA O. 5mg/L+IBA lmg/L+蔗糖 3本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭巧生，周海琴，朱国胜，周宁，刘作易，贺勇，杨相波，
申请(专利权)人：贵州同济堂制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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