本发明专利技术涉及反义寡核苷酸，具体而言，其通过靶定肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的天然反义多核苷酸，来调节肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的表达和/或功能。本发明专利技术还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定及其在治疗与TNFR2表达有关的疾病和病症中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请要求保护提交于2009年6月M日的美国临时专利申请第61/219，911号的优先权，所述申请通过引用以其整体结合于本文中。本专利技术的实施方案包括调节TNFR2和相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。
技术介绍
DNA-RNA和RNA-RNA杂交对于核酸功能的许多方面(包括DNA复制、转录和翻译) 而言为重要的。杂交对于探测特定核酸或者改变其表达的各种技术而言亦为主要的。反义核苷酸例如通过与靶RNA杂交来扰乱基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。 反义DNA具有附加的特征，该特征为DNA-RNA杂合体充当核糖核酸酶H消化的底物，该活性存在于大多数细胞类型中。可将反义分子递送到细胞中，这与寡脱氧核苷酸(ODN)的情况一样，或者它们如RNA分子一样可由内源基因表达。FDA最近批准了一种反义药物， VITRAVENE (用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，这反映了反义物具有治疗应用。专利技术概述提供本概述以呈现本专利技术的概述，从而简要地指出本专利技术的性质和实质。在理解以下的情况下提出本概述其不会用于解释或限制权利要求的范围或含义。在一个实施方案中，本专利技术提供通过使用靶定天然反义转录物的任何区域的反义寡核苷酸来抑制天然反义转录物的作用，引起相应有义基因的增量调节的方法。本文也考虑天然反义转录物的抑制可通过siRNA、核酶和小分子来达到，认为所述siRNA、核酶和小分子在本专利技术的范围之内。一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的TNFR2多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织与长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与以下多核苷酸的反向互补序列具有至少50%的序列同一性，所述多核苷酸包含在SEQ ID NO 2的核苷酸1-413和SEQ ID NO 3的核苷酸1-413之内的5-30个连续核苷酸；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中TNFR2多核苷酸的功能和/或表达。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶定TNFR2多核苷酸的天然反义序列，例如SEQ ID NO :2和3所述的核苷酸，以及其任何变体、等位基因、同源物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例如SEQ ID NO :4-10所述。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中TNFR2多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与TNFR2多核苷酸的反义物的反向互补序列具有至少50%的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中TNFR2多核苷酸的功能和/或表达。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中TNFR2多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织与长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与TNFR2反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50%的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中TNFR2多核苷酸的功能和/或表达。在优选的实施方案中，组合物包含一种或多种与有义和/或反义TNFR2多核苷酸结合的反义寡核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰或取代的核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰的键。在又一个实施方案中，所述修饰核苷酸包含经修饰的碱基，其包括硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸、2’ -0-甲基、氟-或碳、亚甲基或其他锁定核酸(LNA)分子。优选地，所述修饰核苷酸为锁定核酸分子，包括a-L-LNA。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸经皮下、肌内、静脉内或腹膜内施用给患者。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸在药物组合物中施用。治疗方案包括至少一次给患者施用反义化合物；然而，可将此治疗修改成在一段时间内包含多个剂量。 所述治疗可与一种或多种其它类型的疗法组合。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸封装到脂质体中或附着于载体分子 (例如胆固醇、TAT肽)。其它方面描述于下文。附图简述附图说明图1为实时PCR结果的图表，显示相比于对照，用硫代磷酸寡核苷酸处理!fepG2细胞后TNFR2 mRNA的倍数变化+标准偏差，所述硫代磷酸寡核苷酸使用Lipof ectamine 2000 引入。实时PCR结果显示，HepG2细胞中TNRSF1B mRNA的水平在用针对TNRSF1B反义物 Hs. 679340 (CUR-079》设计的寡核苷酸之一和针对Hs. 639108 (CUR-0787)设计的一种寡核苷酸处理后 48h 显著增加。表示为 CUR-0790、CUR-0792、CUR-0788、CUR-0786、CUR-0789、 CUR-0787和CUR-0791的条分别对应于用SEQ ID NO 4-10处理的样品。序列表描述SEQ ID NO :1 人类(Homo sapiens)肿瘤坏死因子受体超家族，成员 IB (TNFRSF1B)，mRNA。(NCBI 检索号NM_001066) ；SEQ ID NO :2 天然 TNFR2 反义序列 (Hs. 639108) ；SEQ ID NO :3 天然 TNFR2 反义序列(Hs. 679340) ；SEQ ID NO :4-10 反义寡核苷酸。*指硫代磷酸酯键。专利技术详述参考用于说明的示例应用在下文中描述本专利技术的数个方面。应当理解的是，陈述许多具体细节、关系和方法来提供对本专利技术的充分理解。然而，在相关领域的普通技术人员将容易地认识到，可在不含一个或多个具体细节的情况下实施本专利技术或者可用其他方法来实施本专利技术。本专利技术不受行为或事件的排序限制，因为一些行为可以不同的顺序进行和/ 或与其他行为或事件同时进行。此外，并非所有说明性的行为或事件对实施本专利技术的方法都为必需的。意图本文公开的所有基因、基因名称和基因产物对应于来自任何物种的同源物， 对该物种而言本文公开的组合物和方法为适用的。因此，该术语包括但不限于来自人和小鼠的基因和基因产物。理解的是，当公开来自具体物种的基因或基因产物时，意图此公开仅为示例性的，并且除非其出现的文段中明确指示，否则不应理解为限制。因此，例如，对于本文公开的在一些实施方案中有关哺乳动物核酸和氨基酸序列的基因而言，意图包括来自其他动物(包括但不限于其他哺乳动物、鱼类、两栖动物、爬行动物和鸟类)的同源和/或直向同源基因和基因产物。在优选的实施方案中，所述基因或核酸序列为人的。定义本文所用的术语仅以描述具体的实施方案为目的而不意图限制本专利技术。除非文段另有明确指示，否则也意图本文所用的单数形式“一”、“一个”和“所述”包括复数形式。此外，就术语“包括的”、“包括”、“具有的”、“具有”、“含有”或其变型在详述和/或权利要求中所用的程度而言，意图这类术语以类似于术语“包含”的方式为包括在内的。术语“约”或“大约”意为在由本领域普通技术人员所确定的具体值的可接受误差范围之内，这部分取决于该值是如何测定或确定的，即，测量系统的限制。例如，按照本领域的实践，“约”可意为在1个或大于1个的标准偏差之内。或者，“约”可意为高达给定值的 20 %，优选10 %，更优选5 %，和还更优选1 %的范围。或者，具体地关于生物系统或过程，该术本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·科拉德，O·霍尔科瓦谢尔曼，
申请(专利权)人：欧科库尔纳有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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