一种蘑菇菌种的保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种蘑菇菌种保藏方法，其保藏方法步骤为：（1）培养基配制；（2）加大填料量减少与空气接触面；(3)真空冷冻干燥；（4）置换管塞；（5）包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5±1℃恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。本发明专利技术提高低温耐冻性、耐负压行及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保存，确保长入内部的菌丝可长期存活；并通过木粉填充空隙一方面可增加木质类养分，另一方面减慢水分的散失，而且与空气接触面只有试管内径大小，加上特制试管塞，可保持培养基3年失水率小于30%，具有成本低廉、操作简单、稳定可靠，保藏期长、成活率高和适用范围广的优点，值得推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种食物菌种的保藏方法，具体涉及的是。
技术介绍
菌种作为一种重要的生物资源，为了保持其优良性状不变，应当及时对其进行保藏，目前食物菌菌种保藏方法主要有液氮低温保藏法、斜面定期移植法、液体石蜡法、砂土管保藏法以及自然基质宝藏法等，其中液氮低温保藏法是目前比较种先进的一种方法，但费用较高，国外保藏机构多采用此法；在我国，目前生产或研究中所食用菌菌种仍然主要采用试管或瓶保藏法，主要缺点有保存时间短，菌种稳定性不好，易发生变异或退化，成本高，携带不方便等缺点。蘑菇含水量高，组织非常细嫩，菌盖表面没有明显的保护结构，常温下采I 2天， 菇体内的水分就会大量蒸发散失，菌盖开始破膜、开伞、萎缩、褐变，甚至腐烂，菌柄伸长，商商品价值下降甚至消失，而蘑菇菌种采用试管或瓶保藏法以及液体石蜡法、砂土管保藏法保藏时，根据其蘑菇菌育种的规律，品种更新的周期约3-5年，期间无须转管或只转管一次是合适的，保藏期太长反而意义不大。保藏期太短则由于频繁扰动和温度、光照变化，时常出现操作污染和菌种退化，菌种稳定性不好，携带不方便。
技术实现思路
针对现有技术上存在的不足，本专利技术目的是在于提供一种适用范围广、保藏期长、 成本低，成活率高以及方便携带和稳定可靠的蘑菇菌种保藏方法。为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现本专利技术的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，其保藏方法包括如下步骤(O培养基配制；其包括小麦提取液20-30%，木粉30-40%，酵母提取液I. 5_3%，蔗糖O.8-2%，乳糖I. 2-2. 6%，缓冲剂O. 5-1%,氯化钙O. 6-1%,硫酸镁O. 8-1. 5%，琼脂1%_2%，料水 30-70%, PH6. 1-7.0，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；(2)加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22-24°C时，将蘑菇菌种接种至载体上，在22°C无菌培养箱内培养100小时，然后将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌40-50分钟，连容器搬入无菌室；(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为250C ；(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5±1°C恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述缓冲剂为硫酸钙或碳酸钙。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液20%,木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖O. 8%，乳糖2%，缓冲剂O. 5%,氯化钙O. 7%，硫酸镁 I. 2%，琼脂 I. 2%，料水 41%，PH 为 6. 8。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液25%，木粉30%,酵母提取液I. 6%，蔗糖1%，乳糖I. 5%，缓冲剂O. 8%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 3%，琼脂I. 9%，料水44%，PH为6. 5。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液30%,木粉15%，酵母提取液2. 8%，蔗糖I. 2%，乳糖2. 5%，缓冲剂O. 6%,氯化钙O. 9%， 硫酸镁1%，琼脂I. 2%，料水37%，PH为6. 7。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述料水比为1:1.本专利技术通过对蘑菇菌种进行引导驯化，以提高低温耐冻性、耐负压行及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保存，确保长入内部的菌丝可长期存活；并通过木粉填充空隙一方面可增加木质类养分，另一方面减慢水分的散失，而且与空气接触面只有试管内径大小， 加上特制试管塞，可保持培养基3年失水率小于30%，具有成本低廉、操作简单、稳定可靠， 保藏期长、成活率高和适用范围广的优点，值得推广使用。具体实施例方式为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。实施例I :(O首先配制培养基，其组成配方包括小麦提取液20%,木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖O. 8%，乳糖2%，缓冲剂(本实施例采用的是硫酸钙)0. 5%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 2%，琼脂 1.2%，料水41%。配制溶液PH为6. 8。制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；(2)然后加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至24°C时，将蘑菇菌种接种至载体上,在22°C无菌培养箱内培养100小时，再将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌45分钟， 连容器搬入无菌室；(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为250C ；(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，减少空气交换和灰尘进入，防止试管表面吸潮，置于5± 1°C恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。本实施例中，上述料水配比为1:1 实施例2 本实施例的配制培养基，其组成配方小麦提取液25%，木粉30%，酵母提取液I. 6%，蔗糖1%，乳糖I. 5%，缓冲剂(本实施例采用的是碳酸钙)0. 8%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 3%，琼脂 I. 9%，料水44%，PH为6. 5。，氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 2%，琼脂I. 2%，料水41%。本实施例的其余操作步骤与实施例I相同，现不加以赘述。实施例3:本实施例保藏方法，其步骤为(O培养基配制，其组成配方包括小麦提取液30%，木粉15%，酵母提取液2. 8%，蔗糖I.2%，乳糖2. 5%，缓冲剂(碳酸钙或硫酸钙)O. 6%,氯化钙O. 9%，硫酸镁1%，琼脂I. 2%，料水 37%，PH为6.7。其中，料水比为1:1。然后制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸。(2)加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22°C时，将蘑菇菌种接种至载体上,在22°C无菌培养箱内培养100小时，再将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌50分钟， 连容器搬入无菌室；(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钱建良，
申请(专利权)人：常熟市方塔涂料化工有限公司，
类型：发明
国别省市：