一种用于鲍养殖的肠道益生菌粉及其制备方法技术

一种用于鲍养殖的肠道益生菌粉及其制备方法，涉及一种鲍的养殖活菌制剂。肠道益生菌粉由益生菌干粉、琼脂粉和饲料组成。分别将鲍肠道中分离的海洋细菌Phaeobacter?sp.AP1220和芽孢杆菌Bacillus?stratosphericus?A3440，经培养基活化后接种于发酵培养基中振荡培养，使菌体浓度达到对数生长期0.5～1.0×109cfu/ml；将各菌种发酵液混合后离心弃上清，菌体沉淀洗涤离心灭菌得菌泥；配制干粉保护剂；将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制成具有包埋层的活性益生菌干粉；将益生菌干粉、琼脂粉和饲料混合，制成用于鲍养殖的肠道益生菌粉。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鲍的养殖活菌制剂，尤其是涉及一种主要用于鲍养殖的肠道益生菌粉及其制备方法。
技术介绍
我国鲍养殖始于20世纪70年代后期，目前已成为世界第一鲍鱼养殖大国，年产值达40多亿元，成为我国海水养殖产业的重要组成部分。然而，伴随着养殖业的快速发展，集约化程度的提高以及沿海水质的日益恶化，鲍暴发性病害日益增多，特别是2000年以来， 以养成阶段的季节转换期暴发性死亡最为严重，在养鲍场密集的区域发病率高达90%以上，造成了惨重的经济损失。同时抗生素滥用造成生物的抗药性，并引发了一系列环境和社会问题，使一度蓬勃发展的鲍养殖业陷入低谷，已成为制约养殖业发展的重要因素之一。鲍肠道益生菌可以针对养殖鲍过程中常见的肠胃病、细菌滋扰、不明原因产生的死亡及零星死亡，替代因抗生素引起的应激反应，在促进鲍鱼生长，防治病害方面发挥重要作用。且由于益生菌具有无毒、无残留、不产生抗药性等特点，对促进鲍健康养殖具有重要意义。益生菌是一类活菌制剂，通过与病原菌竞争化学物质和黏附位点，产生拈抗物质或提供宿主必要营养物质或酶，或调节并激活宿主免疫防御体系，或改善宿主肠道营养与菌群平衡从而对宿主产生有益的生理作用(Verschuere L et al, Microbiol Mol Biol Rev. 2000,64 :655-671)。目前，利用益生菌来调节动物肠道微生态平衡，恢复机体正常生理功能、防治病害、促进生长，已逐渐成为世界范围内的热潮。1986年，Kozasa等(Microbial Aliment Nutr, 1986,164 :351-358)首次利用芽抱杆菌(Bacillus toyoi)处理日本鳗鲡降低了由于感染爱德华氏菌而引起的死亡后，益生菌在水产研究方面得到迅速发展。但纵观水产生物益生菌方面的研究报道，仍主要集中在鱼类、甲壳类和双壳类，而针对腹足类鲍的益生菌相对较少。目前，针对鲍养殖的益生菌及其制备存在以下几个问题(I)多利用其它水生动物或水体中分离得到的益生菌应用于鲍养殖中，而微生物具有宿主特异性及环境易感性，因此缺乏针对性和稳定性而无法产生良好的效果。(2)筛选范围有限，如集中在养殖环境，或直接应用已报道的海洋细菌等，使益生菌菌种较为单一，它们在完全替代抗生素的过程中抗菌抗病毒效果并不理想。(3)由于宿主消化道酸性环境的灭活及消化酶的降解作用，大部分益生菌不能以活菌状态到达肠道，或在肠道粘膜上定植，发挥有效的益生作用。(4)目前，水产生物养殖用的活菌制剂多为胶囊或液体或菌体干粉形式，应用方式多直接投喂，或与饲料混合进行投喂。但存在鲍鱼拒食、益生菌无法与饲料粘合不能进入宿主体内发挥作用、益生菌外流至水体，使微生物数量激增造成养殖环境污染等问题。
技术实现思路
本专利技术目的在于针对现有养殖鲍益生菌应用中存在的问题及不足，提供一种能够有效、直接进入鲍肠道并发挥益生作用的用于鲍养殖的肠道益生菌粉。本专利技术的另一目的在于提供一种具有操作简单、效果稳定、针对性强、不污染养殖环境等优点的用于鲍养殖的肠道益生菌粉的制备方法。所述用于鲍养殖的肠道益生菌粉按质量比的组成如下益生菌干粉琼脂粉饲料为(0. I I) (I 20) (5 150)。所述饲料可选自鲍饲料，所述饲料可选自大统牌、金牌、洪峰牌等鲍用饲料。所述用于鲍养殖的肠道益生菌粉的制备方法包括以下步骤I)分别将鲍肠道中分离的海洋细菌Phaeobacter sp. AP1220和芽孢杆菌 Bacillus stratosphericus A3440,经培养基活化后,接种于发酵培养基中，振荡培养，使菌体浓度达到对数生长期0. 5 I. OX 109cfu/ml ；2)将各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌泥；3)配制干粉保护剂；4)将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制成具有包埋层的活性益生菌干粉；5)将益生菌干粉、琼脂粉和饲料混合，制成用于鲍养殖的肠道益生菌粉。在步骤I)中，所述海洋细菌Phaeobacter sp. AP1220已于2011年09月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号=CGMCC No. 5254 ;所述芽孢杆菌 Bacillus stratosphericus A3440已于2011年09月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号=CGMCC No. 5253 ;所述培养基可采用2216E固体培养基等；所述发酵培养基可采用2216E液体发酵培养基等；所述振荡培养的条件可为在28°C下振荡培养 I 3天。在步骤2)中，所述洗涤可用生理盐水洗涤2 3遍。在步骤3)中，所述干粉保护剂的组成按质量百分比可为蔗糖1.0% 10.0%，褐藻酸钠0. 1% 5. 0%,加水定容至IOOml ;所述灭菌的条件可为115°C,30min灭菌后,冷却至 30 35°C。在步骤4)中，所述干粉保护剂和菌泥的配比可为干粉保护剂菌泥=(I 10) ml lg，其中干粉保护剂按体积计算，菌泥按质量计算；所述成膜反应可将干粉保护剂和菌泥混合放置10 30min后再进行成膜反应；所述预冻的条件可为预冻于_70°C，3 4h。在步骤5)中，所述用于鲍养殖的肠道益生菌粉按质量比的组成如下益生菌干粉、琼脂粉、饲料的质量比为(0. I I) (I 20) (5 150);所述饲料可选自鲍饲料， 所述饲料可选自大统牌、金牌、洪峰牌等鲍用饲料。使用时，将用于鲍养殖的肠道益生菌粉用水溶解，益生菌粉与水的比例可为5 30g 100ml，冷却后凝固成胶体，即可。本专利技术的突出优点是I)选自鲍消化道分离的微生物作为肠道益生菌的来源，具有较高的针对性和稳定性，并能有效促进鲍的生长，与投喂常规饲料比较，鲍的生长率可提高19. 92% 25. 55%。2)与现有保护剂比较，本专利技术中的干粉保护剂(蔗糖与褐藻酸钠)的添加能有效减少菌株在制备、运输过程中数量减少，菌体流失等问题，与多种菌体保护剂相比的实验结果见表I。表I不同保护剂下益生菌24h后活菌浓度权利要求1.一种用于鲍养殖的肠道益生菌粉，其特征在于按质量比的组成如下益生菌干粉 琼脂粉饲料为(O. I I) (I 20) (5 150)。2.如权利要求I所述的一种用于鲍养殖的肠道益生菌粉，其特征在于所述饲料选自鲍饲料。3.如权利要求I所述的一种用于鲍养殖的肠道益生菌粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)分别将鲍肠道中分离的海洋细菌Phaeobactersp. AP1220和芽孢杆菌Bacillus stratosphericus A3440,经培养基活化后,接种于发酵培养基中，振荡培养，使菌体浓度达到对数生长期O. 5 I. 0X109cfu/ml ；2)将各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌泥；3)配制干粉保护剂；4)将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制成具有包埋层的活性益生菌干粉；5)将益生菌干粉、琼脂粉和饲料混本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晶，蒋庆茹，柯才焕，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：