本发明专利技术公开了CaM结合肽，类型为氨基酸，分子类型为肽，所述CaM结合肽为实验室合成的Sema4D钙调蛋白结合肽，其含有编码对应于Sema4D结合CaM的序列，所述Sema4D钙调蛋白结合肽分子结构式为NH2-GYLPRQCLKFRSALLIGKKKPKS-COOH，所述CaM结合肽用于抗肿瘤和抑制HUVEC的体外血管新生的应用。该发明专利技术有望开发成为一种新型的血管新生抑制剂，为临床提供一种新的抗肿瘤药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于抗肿瘤的多肽药物领域，具体涉及一种CaM结合肽及其应用。
技术介绍
目前，癌症的猖獗危胁着人们的身体健康.对顽症的攻克是摆在人类面前的一大难题。在科学发达的今天，人们的着眼点仍放在寻找抗癌作用强而本身副作用小的药物来对付肿瘤。大量资料证实细胞内钙调蛋白(CaM)与肿瘤的形成、生长和增殖密切相关。20世纪70、80年代人们就证实了钙调素拮抗剂对肿瘤增殖、转移有肯定的抑制作用。CaM作为胞内Ca2+的受体蛋自，参与胞内Ca2+浓度的调节，而正常细胞增殖需要钙，因此人们认为CaM是正常细胞增殖所必需的。现已发现某此肿瘤的发生与发展也与CaM密切相关20世纪80年代末，人们就已经发现肿瘤细胞内CaM含量高于正常细胞。许多实验证明细胞内CaM水平与细胞的无序增殖，特别是恶性肿瘤细胞增殖是正相关。如CaM水平与肝癌生长速度呈正相关，啮齿类及鸟类肿瘤中CaM含量为正常的2-4倍，牛皮癣患者病变区域CaM浓度比正常的区域高30倍。由此可见，CaM含量的变化会引起细胞的不正常增殖与细咆变异.其次，CaM分子结构的改变可使CaM与其部分靶体，甚至所有靶体间的相互作用发生变化，从而促使癌细胞的生长，例如癌蛋白的发现，就是恶性细胞中CaM分子发生质的改变的一个倒证，它可以促进癌细胞的生长，使肿瘤细胞在缺Ca2+条件下仍然保持旺盛的DNA合成能力。另外CaM结合蛋白发生结构或构象的改变及CaM对Ca2+激活的敏感性发生改变，cAMP含量发生改变都与肿瘤的形成密切相关，因此CaM成为化学抗癌治疗剂的新靶点，从而引起人们极大的关注。迁移和侵袭是恶性肿瘤发展的关键，也是临床治疗的难题，控制肿瘤的迁移和侵袭是抗肿瘤药物研究的一个重要方向，肿瘤的迁移是一个多阶段的复杂过程，肿瘤侵袭和转移可分为三步，即黏附、降解和移动。黏附是肿瘤细胞侵袭的起始，肿瘤细胞通过表面特定受体与基底膜的层黏连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相黏连，然后在蛋白水解酶和相关因子的作用下，侵袭基底膜，降解细胞外基质，肿瘤细胞一旦突破基底膜即在基质内较快侵袭性生长并发生转移。因此，阻断其中任何一个过程，都可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。有文献证实CaM与肿瘤的迁移侵袭密切相关。肿瘤的生长有两个不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。如果没有血管生成，原发肿瘤的生长不会超过l_2mm3。肿瘤血管为肿瘤组织提供新陈代谢所必需的氧气和营养，从而使肿瘤得以迅速的生长并同时为肿瘤的远端转移提供转运。因此近年来抑制血管生成成为抗肿瘤治疗的新策略。近来有文献报道CaM与肿瘤血管新生也有着密切的关系，CaM抑制剂可以抑制血管新生。因此关于CaM与肿瘤的研究又焕发出新的活力。不过，目前已知的大部分已知的钙调素拮抗剂专一性不强，且具有不良反应。人们试图寻找专一性强、不良反应小的钙调素拮抗剂，用于肿瘤治疗。本专利技术的多肽可能成为有效地选择。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种CaM结合肽及其应用，该专利技术不仅可以抑制HeLa细胞的增殖，迁移，粘附，还可以抑制HUVEC的体外血管新生，因此其可能开发成为一种新型的抗肿瘤药物。为实现上述目的，本专利技术提供的CaM结合肽，类型为氨基酸，分子类型为肽，所述CaM结合肽为实验室合成的Sema4D钙调蛋白结合肽，其含有编码对应于Sema4D结合 CaM的序列，所述Sema4D钙调蛋白结合肽分子的序列由氨基酸的一字简码组成，表述如下:NH2-GYL PRQ CLK FRS ALL IGK KKP KS-⑶OH。CaM是一种单链酸性小分子可溶性球蛋白，由十九种、148个氨基酸组成，分子量为I. 67万，等电点为4. 3，是酸性蛋白质。不同生物来源的钙调蛋白，其氨基酸组成和顺序或完全一样，或仅有少许差异，具有分布的广泛性和进化上高度的保守性.它耐酸，耐热， 90°C，加热5分钟仍可保留完全的活性。CaM的外形似哑铃，有两个球形的末端，中间被一个长而富有弹性的螺旋结构相连，每个末端有两个Ca2+结构域，每个结构域可以结合一个Ca2+。因而CaM分子内与Ca2+ 有四个结合位点。CaM分子本身并无酶的活性，在无Ca2+的情况下，也不表现生物活性。在非刺激的细胞中钙调蛋白与Ca2+结合的亲和力很低；然而，如果由于刺激使细胞中Ca2+浓度升高时，Ca2+同钙调蛋白结合形成钙-钙调蛋白复合物(Ca2+/CaM)，就会引起钙调蛋白构型的变化，增强了钙调蛋白与许多靶蛋白结合的亲和力，从而执行其生物功能，与钙结合后，CaM发生构型上的变化，成为一些酶的激活物。再与酶结合时，又引起酶的构型变化，使由非活性态转为活性态，CaM-Ca2+成了这些酶作用时必不可缺的成分。CaM参与的生化反应很多，涉及不少关键性的酶，如控制信息传递中，第二信使 cAMP合成与分解的腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶；在糖原合成与分解中能提供和储存能量的磷酸化酶激酶和糖原合酶激酶，与蛋白质磷酸化及脱磷酸化有关蛋白激酶和蛋白磷酸解酶，能调节细胞内钙离子浓度，起着钙泵作用的Ca2+-ATPase,还有与平滑肌收缩有关的肌球蛋白轻链激酶等。故本专利技术所述的CaM结合肽可用于抗肿瘤和抗血管新生的应用。本专利技术所述CaM结合肽可用于抑制人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的应用。本专利技术所述CaM结合肽可用于抑制人宫颈癌HeLa细胞迁移、粘附的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点本专利技术所述的CaM结合肽即Sema4D钙调蛋白结合肽不仅具有血管新生抑制剂的功效， 还具有抑制肿瘤细胞增殖，粘附，迁移的特异性作用，有望开发成为一种新型的血管新生抑制剂，为临床提供一种新的抗肿瘤药物。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段， 并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。具体实施方式下面将结合实施例，来详细说明本专利技术。一、Sema4D I丐调蛋白结合肽抑制HeLa细胞的增殖本实验选择人宫颈癌HeLa细胞,初步探讨了 Sema4D I丐调蛋白结合肽对HeLa细胞体外增殖的作用。HeLa细胞接种在含10%胎牛血清、青霉素100U/ml、链霉素IOOug / ml的 RPMI-1640培养液中，置于37 ° C、5% C02培养箱内培养。每48h换液、传代I次，实验选取对数生长期细胞。步骤O接种细胞用O. 25%胰酶消化对数生长期细胞，用完全培养基将细胞配成单细胞悬液，以适当密度接种于96孔板中，每孔IOOul;2)培养细胞将培养板放入培养箱，在37°C，5%C02培养24h后给药；3)实验设置药物处理组与空白对照组药物处理组每孔加入含有不同浓度(0.2、1、 5、25uM) Sema4D钙调蛋白结合肽的RPMI-1640完全培养液，各浓度均设3个复孔。空白对照组每孔加入IOOul不含多肽的RPMI-1640培养液。4)呈色培养48 h后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20uL，37度继续孵育4h，终止培养，小心弃去孔内培养基和MTT，每孔加入IOOul DMS0,震荡IOmin,使甲臜充分溶解；5)比色选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光值，记录结果。结果显示Sema4D钙调蛋白结合肽处理组与空白对照组比较，除了 O. 2u本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱力，曾招，朱鹏飞，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：
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