本发明专利技术涉及一种黄瓜霜霉威残留性相关基因的分子标记鉴定方法。本发明专利技术的方法包括：以霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT14为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3％琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7.5％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的低霜霉威残留性黄瓜东农803带型一致，则该霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系为低霜霉威残留性品种或品系，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，57℃退火1min，35个循环，72℃延伸1min，72℃延伸10min，最后4℃保存。本发明专利技术用于鉴定黄瓜霜霉威残留性相关基因。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，属于植物生物
技术介绍
我国是世界上黄瓜生产面积最大、总产量最高的国家，在全国各地均有种植。黄瓜又是病虫害最多，受病虫危害最重的蔬菜之一，生长过程中经常受到多种病害的危害，对农药的需求量很大，需求种类也较多，是现在农药残留超标的主要蔬菜品种之一。随着我国黄瓜生产的产业化，品种的要求也越来越严格，不仅要求高产、抗病、优质，黄瓜的果实形状及口感、低农药残留量等也成为重要的种植指标。为了满足国内市场的需求，并尽快与国际市场接轨，解决黄瓜农药残留超标问题迫在眉睫。黄瓜霜霉病是黄瓜生产中的主要病害之一，其来势猛、传播快、为害重，能在1-2 周内使植株大部分叶片枯死，造成严重减产，以致绝收。为了防治霜霉病，在生产上需使用大量农药，其中霜霉威(Propamocarb)是抑制霜霉病危害的主要喷洒类药剂之一，能够有效地抑制黄瓜霜霉病的扩散，目前在生产上已经广泛使用。研究表明，黄瓜农药残留量与生态类型关系密切，华南型黄瓜农残量相对最高，其次为华北型，欧洲型含量略低于华北型， 腌渍型的农残含量相对最低(见参考文献刘芳芳，秦智伟，周秀艳.低农药残留量的黄瓜种质资源筛选.东北农业大学学报，2010，41 (7) :32-36)，然而与黄瓜农药残留量相关基因的研究还未见报道。因此寻找与黄瓜霜霉威残留性相关基因紧密连锁的分子标记，对于加快无公害黄瓜育种进程具有重要的实际应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述存在的问题提供一种，能够更好地利用上述黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记，并将黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记应用于黄瓜育种的辅助选择。上述的目的通过以下的技术方案实现，该方法包括如下步骤以霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT14为引物进行 PCR扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的低霜霉威残留性黄瓜东农803带型一致，则该霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系为低霜霉威残留性品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，57°C退火Imin, 35个循环，72°C延伸Imin, 72°C延伸lOmin，最后4°C保存，所述的CSWCT14为引物 1 5，-TCCAATCGACCTAAATCCAAA-3，，引物 2 5，-TGGCCCTAACTGTTGATGC-3，。所述的，所述PCR扩增中，每20 μ 1 的 PCR 反应体系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1, lOpmol/μ 1 的 Primer 1 0· 8 μ 1, lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶 0. 2μ l,60ng/y 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 :10. 7μ 1。在辅助选择无公害黄瓜材料中的应用。有益效果1.本专利技术直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题，因此，本专利技术能够克服黄瓜霜霉威残留性鉴定易受环境影响的缺点，在苗期就能够通过分子标记对黄瓜品种和品系的霜霉威残留性进行鉴定和筛选，淘汰高霜霉威残留性植株，减少人力和物力的浪费，提高育种效率。同时， DNA分子标记技术操作简单，成本低廉，用时短，在一天内即可完成全部的检测过程。2.所需样本数量少，操作比较简便，效率高，成本低廉。3.本专利技术易于掌握，不受环境条件影响，重复性高。附图说明图1黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记的琼脂糖电泳检测结果(东农804)。M DL2000DNA Marker ；1 对照东农 803 ；2 15 东农 804 单株。图2黄瓜霜霉威残留性相关基因分子标记的琼脂糖电泳检测结果(东农80 。M DL2000DNA Marker ；1 对照东农 803 ；2 8 东农 805 单株。具体实施例方式下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。所有引物合成均由生工生物工程(上海)有限公司完成。以下实施例中所有用到的黄瓜材料均为公知公用。实施例1 ，该方法包括如下步骤以霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT14为引物进行 PCR扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的低霜霉威残留性黄瓜东农803带型一致，则该霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系为低霜霉威残留性品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，57°C退火Imin, 35个循环，72°C延伸Imin, 72°C延伸lOmin，最后4°C保存，所述的CSWCT14为引物 1 5，-TCCAATCGACCTAAATCCAAA-3，，引物 2 5，-TGGCCCTAACTGTTGATGC-3，。实施例2 所述的，所述PCR扩增中，每 20 μ 1 的 PCR 反应体系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1, lOpmol/μ 1 的 Primer 1 O. 8 μ 1, lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶 0. 2μ l,60ng/y 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 :10. 7μ 1。实施例3 在辅助选择无公害黄瓜材料中的应用。以东北农业大学园艺学院黄瓜课题组培育出的黄瓜杂交新品种东农804和东农 805为材料；提取其单个植株DNA为模板，以本专利技术提供的1个黄瓜霜霉威残留性相关分子标记CSWCT14为引物进行PCR扩增，结果表明，东农804和东农805单株的PCR扩增带型与低霜霉威残留性对照东农803扩增带型完全一致，且PCR检测结果与实验室鉴定结果的吻合率为100%，证明了 CSWCT14是一个实用的黄瓜霜霉威残留性检测的分子标记。权利要求1.一种，其特征是该方法包括如下步骤以霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT14为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的低霜霉威残留性黄瓜东农803带型一致， 则该霜霉威残留性未知的黄瓜品种或品系为低霜霉威残留性品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，57°C退火lmin，35个循环，72°C延伸lmin，72°C延伸lOmin，最后4°C保存，所述的CSWCT14为引物 1 :5，-TCCAATCGACCTAAATCCAAA-3，，引物 2 :5’ -TGGCCCTAACTGTTGATGC-3，。2.根据权利要求1所述的，其特征是所述PCR扩增中，每20 μ 1的PCR反应体系如下=IOXbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1， lOp本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦智伟，武涛，周秀艳，马佰慧，辛明，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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