针对人蛋白酶激活受体-2的高亲和力人抗体制造技术

本发明专利技术提供结合蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的抗体及使用其的方法。根据本发明专利技术特定实施方式，所述抗体为结合人PAR-2的全长人抗体。本发明专利技术的抗体尤其可用于治疗与一种或多种PAR-2生物学活性相关的疾病或障碍，包括治疗疼痛病况、炎症病况及胃肠病况。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对人蛋白酶激活受体-2的高亲和力人抗体专利
本专利技术涉及特异于蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的抗体及其抗原结合片段。专利技术背景蛋白酶激活受体(“PAR”)为一个七次跨膜G-蛋白偶联受体家族。在七次跨膜G-蛋白偶联受体中，PAR具有独特的激活形式；即，PAR是通过氨基末端发生蛋白水解性裂解产生新的N端结构域(起“栓系配体(tetheredligand)”作用)而被激活的。所述栓系配体与受体的细胞外环-2相互作用并由此导致受体激活。目前，PAR家族有四个已知的成员，称为PAR-1、PAR-2、PAR-3及PAR-4。PAR-2也称为“C140”(US5,874,400)。人类和小鼠的PAR-2共有蛋白酶裂解结构域SKGRSLIG(SEQIDNO：852的残基6-13，以及SEQIDNO：856的残基8-15)。数种蛋白酶如胰蛋白酶，以及肥大细胞类胰蛋白酶(tryptase)，组织因子/VIIa因子复合物和Xa因子、嗜中性粒细胞蛋白酶3(PR-3)、人白细胞弹性蛋白酶以及源于病原器官的蛋白酶将此段序列在R和S残基之间裂解。数种疾病和病况涉及到或相关于PAR-2活性，包括炎症疾病、疼痛、胃肠病况、神经疾病以及心血管障碍(见例如，Linder等人，2000，J.Immunol.165：6504-6510；Vergnolle等人，2001，NatureMedicine7：821-826；Cenac等人，2007，J.Clin.Investigation117：636-647；Vergnolle，2004，BritishJ.Pharmacol.141：1264-1274；Knight等人，2001，J.AllergyClin.Immunol.108：797-803；Schmidlin等人，2002，J.Immunol.169：5315-5321)。结合PAR-2的抗体具有拮抗体内PAR-2活性的效力。因此抗PAR-2抗体对于治疗及/或减轻多种疾病病况具有潜在的用途。US5,874,400、US2007/0237759、WO2009/005726以及US2010/0119506中提到了结合PAR-2的抗体，以及其特定的治疗用途。然而，本领域仍然需要新型的PAR-2调制试剂，包括-PAR-2抗体，其可用于治疗PAR-2介导的疾病和病况。专利技术概述本专利技术提供了结合人PAR-2的人抗体。本专利技术的抗体尤其可用于抑制PAR-2介导的信号传到以及治疗PAR-2激活引起或相关的疾病或障碍。本专利技术包括抗体，其与PAR-2的N端区域相互作用并阻断在激活PAR-2的蛋白酶裂解位点(如本文定义的)的蛋白水解性裂解而不阻断在一个或多个非激活蛋白酶裂解位点的蛋白水解性裂解。根据特定的实施方式，展示有这种蛋白水解性裂解阻断特性的抗PAR-2抗体与激活性PAR-2蛋白酶裂解位点附近的特定氨基酸相互作用。例如，本专利技术提供具有蛋白酶裂解阻断活性的抗PAR-2抗体，其与人PAR-2(SEQIDNO：851)的Val-42和Asp-43相互作用，并可能进一步与一个或多个人PAR-2残基(选自Ser-37、Leu-38、Ile-39、Gly-40和Gly-44构成的一组)相互作用。根据其他实施方式，本专利技术的抗-PAR-2抗体特异性结合人PAR-2及猴PAR-2，但是不结合选自小鼠、大鼠、兔、狗和猪PAR-2中的至少一种。本专利技术还包括能够抑制或减弱PAR-2的蛋白水解性激活但不阻断PAR-2的蛋白水解性裂解的抗体。本文描述了用于测量/评估抗体阻断PAR-2裂解或蛋白水解性激活的能力的示例性方法。本专利技术的抗体可以为全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或可只包含抗原结合部分(例如，Fab，F(ab’)2或scFv片段)，并且可以对其修饰以影响其功能性，例如，消除残余的效应子功能(Reddy等人，2000，J.Immunol.164：1925-1933)。本专利技术提供了抗体或抗体的结合片段，所述抗体包含重链可变区(HCVR)，其具有选自如下的氨基酸序列：SEQIDNO：2、18、22、26、42、46、50、66、70、74、90、94、98、114、118、122、138、142、146、162、166、170、186、190、194、210、214、218、234、238、242、258、262、266、282、286、290、306、310、314、330、334、338、354、358、362、378、382、386、402、406、410、426、430、434、450、454、458、474、478、482、498、502、506、522、526、530、546、550、554、570、574、578、594、598、602、618、622、626、642、646、650、666、670、674、690、694、698、714、718、722、738、742、746、762、766、770、786、790、794、810、814、818、834和838，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的与其基本上类似的序列。根据特定的实施方式，所述抗体或抗体的抗原结合部分包含具有选自SEQIDNO：98、146、338和714的氨基酸序列的HCVR。本专利技术还提供了抗体或抗体的抗原结合片段，其包含轻链可变区(LCVR)，所述轻链可变区具有选自如下的氨基酸序列：SEQIDNO：10、20、24、34、44、48、58、68、72、82、92、96、106、116、120、130、140、144、154、164、168、178、188、192、202、212、216、226、236、240、250、260、264、274、284、288、298、308、312、322、332、336、346、356、360、370、380、384、394、404、408、418、428、432、442、452、456、466、476、480、490、500、504、514、524、528、538、548、552、562、572、576、586、596、600、610、620、624、634、644、648、658、668、672、682、692、696、706、716、720、730、740、744、754、764、768、778、788、792、802、812、816、826、836和840，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的与其基本上类似的序列。根据特定实施方式，所述抗体或抗体的抗原结合部分包含具有选自SEQIDNO：106、154、346和692的氨基酸序列的LCVR。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)序列对，所述HCVR和LCVR序列对选自：SEQIDNO：2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、18本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.09.09 US 61/240,783;2009.09.16 US 61/242,821;1.药物组合物，其包含药物可接受载体；和包含人恒定区的抗体，所述抗体特异性结合SEQIDNO:851所示的人PAR-2，其中所述抗体(a)与人PAR-2的Ser-37、Leu-38、Ile-39、Gly-40、Val-42和Asp-43相互作用；(b)不与人PAR-2的Lys-41相互作用；(c)阻断在位于人PAR-2的残基Arg-36与Ser-37连接处的激活性裂解位点对人PAR-2的胰蛋白酶裂解；(d)不阻断在位于人PAR-2的残基Arg-31和Ser-32连接处的非激活性裂解位点对人PAR-2的胰蛋白酶裂解；和(e)包含具有SEQIDNO:700-702-704的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳，A·J·莫菲，N·J·帕帕多普罗斯，M·R·莫拉，R·R·萨尔泽勒，M·L·拉克罗斯弗拉里什，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：