红豆杉全株无毒提取紫杉醇口服抗癌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了红豆杉全株无毒提取紫杉醇口服抗癌制剂及其制备方法，是由东北红豆杉为主要提取原料，采用乙醇浸泡16步法无毒提取工艺，获得30％含量的紫杉醇粗品，作为紫杉醇药酒，紫杉醇口服液的主要原料。药效研究表明，本发明专利技术制备口服抗癌制剂针对二十多种不同特异性的晚期及联合化疗失败的晚后期癌患具有及其显著的治疗效果，而且镇痛作用比较好，无毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是涉及中药
中，利用人工栽培的东北红豆杉全株进行乙醇浸泡、 无毒提取紫杉醇及其口服抗癌制剂的制备方法。
技术介绍
红豆杉提取紫杉醇的生产工艺，据目前国内外有关报道和相关文献中介绍的有使用CO2萃取，和超声波萃取等多种多样的提取工艺方式。C02萃取，超声波萃取虽工艺先进， 得取率高，但紫杉醇以及经某些化学溶剂处理后的残留仍有等量存在，提取后的原料用作注射制剂，虽然患者对其毒性能够耐受，但必定又给患者造成二次伤害，如果针对晚后期或联合化疗失败的癌患来讲，就会加速其死亡的速率。研究实验表明，无毒提取的紫杉醇比有毒的紫杉醇更好，生理活性仍然较强，因无毒提取保留了诸多的抑癌活性物质，尤其是豆杉色素中小分子化合物的存留，这时缓解癌痛，抑制癌细胞生长极为重要。本专利技术是采用改进型的16步法超滤膜分离提取法提取粗品紫杉醇，不使用化学溶剂，无化学残留，其安全性、得取率都很高。目前这种16步法无毒提取工艺在国内还不多见。
技术实现思路
本专利技术的目地是向药企提供红豆杉全株无毒提取紫杉醇粗品原料，为制做和确保口服抗癌制剂紫杉醇药酒，紫杉醇口服液的安全性，提供科学的技术路线支撑。原料提取与口服制剂的制备方法1、紫杉醇原料的无毒提取工艺去杂，O3水清洗一切片一烘干一粉碎一纳米超微破壁一乙醇浸泡剥离一初滤一脱毒处理一低压大孔超滤一高压小孔超滤一层析一真空渗透浓缩一回收乙醇一二次脱毒一真空冷冻干燥一结晶体粉碎。2、工艺步骤说明(1)去杂、清洗将红豆杉全株干品表面附着的泥土及其他杂质清除掉，再放入O3 水清洗池中清洗，通过O3水的氧化作用，可有效的将红豆杉全株表面的病菌、霉毒以及化肥农药的残留清除掉；(2)将清洗后的红豆杉全株浙干水分后，切成薄片；(3)烘干将红豆杉薄片送入热风循环干燥机内烘干3小时；(4)烘干后的红豆杉碎片在经不锈钢粉碎机粉碎；(5)超微破壁纳米超微破壁的目地是，由于紫杉醇烷二萜类属小分子化合物，紧帖在胞核内和胞核外，加上细胞胶质和黏结附着力强原故，即是乙醇浸泡后膨胀开裂，但仍有部分烷二萜类化合物还无法游离出来，采用超微纳米级破壁机粉碎300目，甚至更小的微粒，可有效的获取二萜及其它化合物；(6)乙醇浸泡剥离由于紫杉醇烷二萜类不溶于水，易溶于乙醇的特性，采用95%医用乙醇与红豆杉按比例浸泡，间接加热浸泡M小时后，在将液温间接加热至二萜类化合物生理活性尚处稳定的界度内，快速搅拌20分钟，促使烷二萜类化合物在适宜温度下的流相冲击中剥离出来；(7)初滤将搅拌剥离后的溶液用500目细度的滤网进行过滤，滤渣再进行二次乙醇浸泡；(8)脱毒处理将初滤后的溶液间接加热至适宜温度时液温逐渐升高，有毒的轻质挥发油会逐步上浮到乙醇溶液表面，并随温升高而向中心聚积，这时用吸油纸吸附出来， 也可用不锈钢汤勺取出，日后集中统一提取挥发油；(9)低压大孔超滤采用超滤膜分离机，设定粒度为0. Olum，而紫杉醇烷二萜类化合物的粒度为0. 01-0. 002um。所以，首先将脱毒的乙醇溶液加压通过低压大孔0. Olum超滤截留，截留物为粗纤维，微尘、胶质等无利用价值的大分子物质；(10)高压小孔超滤将低压大孔透过液再经高压小孔0. OOlum的截留，即获得紫杉醇烷二萜类和其它化合物的大小分子浓缩液；(11)层析将高压小孔超滤透过液，经硅胶层析柱真空态渗透吸附的洗脱液与高压小孔超滤截留的大小分子浓缩液合并；(12)真空渗透浓缩将合并的浓缩液进行3小时中温真空渗透浓缩，即获得大小分子合并后的膏体状。(13)回收乙醇将真空渗透的小分子乙醇液与层析透过的小分子乙醇液合并，用蒸馏器蒸馏回收再用；(14) 二次脱毒将真空渗透浓缩的膏状倒入一薄壁的不锈钢盘内，送入恒温干燥箱内密闭吸空干燥6小时，由于浓缩的膏体内还存有部分轻质豆杉精油和乙醇，待膏温逐渐上升时，豆杉精油会随乙醇一同升华蒸发掉，6小时后，可呈现无乙醇的结晶体；(15)低温真空干燥将基本干燥的无乙醇结晶体打碎，放入另一薄壁的的不锈钢盘内，送入真空冷冻干燥机内，低温38度以上真空状态下，冷冻干燥M小时，即成为无毒提取的紫杉醇结晶体；(16)结晶体粉碎将干燥后的结晶体通过不锈钢高速粉碎机快速粉碎为80目，可得紫杉醇粗品，颜色为浅红色不规则结晶粉末，经测定紫杉醇含量为30%。本专利技术利用其超滤提取、浓缩作用，大大提高了产品得率。也可利用不同分子量截留值的超滤膜来实现紫杉醇的进一步分级纯化，也可将紫杉醇分成几个相对单一的分子量级别，制备均一的精品紫杉醇。超滤法在加工前进行脱毒和加工后的二次脱毒处理，使得紫杉醇毒性降低98%以上，有效活性不破坏，且操作简单，只需控制操作压力，流速和滤液浓度即可，这对于分子量大且分布范围较宽，溶液黏度大且又不稳定的紫杉醇烷二萜类来说， 无疑是一种极具发展潜力的提取分离手段。3、粗品紫杉醇的物理状态与理化性质粗品紫杉醇中含有蛋白质、氨基酸、矿物质、生物素以及紫杉醇烷二萜类、紫杉碱、 紫杉素、紫杉多糖、紫杉红色素、紫杉单宁、紫杉多酚、紫杉腺苷类等化合物，其粗品的黏性较大，颜色为浅红色结晶粉末，味微苦，微涩，有股松杉香气味。紫杉醇粗品易吸湿，一般常温15度以上时黏性增大，逐步形成粘稠状的流体，温度下降至5度以下时，还原成结晶块， 经检测其生理活性不变，但微生物增多，采用零度以下的低温冷藏或冷冻时，其物理状态与理化指标较为稳定。4、毒理试验(1)急毒LD50试验分三个实验组，第1组试验原料由上海某药企提供的注射用99%含量的精品紫杉醇，颜色为白色不规则结晶粉末，用聚乙二醇400烯释后，调配成 100mg/ml的生药；第2组试验原料由黑龙江省某红豆杉基地提取的自制乙醇提取紫杉醇粗品，含量在1 %。颜色为褐红色结晶颗粒，用聚乙二醇400烯释后，调配成2g的生药；第3组试验原料属本专利技术无毒提取的紫杉醇粗品，含量为30%，颜色为浅红色结晶粉末，用聚乙二醇400烯释后，调配成2g/ml的生药。实验1组、2组、3组的受试鼠采用上海ICR种小鼠， 每组各10只，雌雄各半，全部停食10小时后，一次性灌喂给药，观察3天，给药后第1受试组在5小时内先后死亡2只，9小时内又死亡1只，剩余7只鼠缓慢复苏存活；给药后的第 2受试组在5小时内死亡1只，其它9只出现异常，但6小时后恢复常态，给药后的第3受试组无一只鼠出现异常，无一只死亡。测试结果表明第1组，利用国标提取工艺的精品紫杉醇，受试鼠死亡3只，毒性较大；第2组是黑龙江省某红豆杉基地的粗品紫杉醇，受试鼠死亡 1只，具有一定的毒性；第3组是本专利技术无毒提取的紫杉醇粗品，受试鼠无一只死亡。(2)最大耐受量测试用ICR种小鼠40只/kg，雌雄各半，停食10小时后一次性灌喂给药2g/ml，无毒提取的紫杉醇，含量30%，一天内给药2次，总剂量为160g/kg生药，此剂量相当于成人按 60kg体重计算，是口服剂量0. 034g的1200倍。小鼠给药后的3小时内仅有2只出现轻微异常，4小时后恢复常态，3天内无一只死亡。经常规饲养观察20天，除出现轻微异常的2 只小鼠在给药后的第9天内体重略轻于相应时间对照组P < 0. 03外，其余未发现异常。因此，小鼠的最大耐受量为成人临床拟口服剂量的1200倍，测试结果表明，毒性甚微。5、抗癌试验(1)将本专利技术无毒提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林树芳，
申请(专利权)人：林树芳，
类型：发明
国别省市：