本发明专利技术涉及反义寡核苷酸，具体而言，其通过靶定δ样1同源物(DLK1)的天然反义多核苷酸，调节δ样1同源物(DLK1)的表达和/或功能。本发明专利技术还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定及其在治疗与DLK1表达有关的疾病和病症中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的实施方案包括调节DLKl和相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。
技术介绍
DNA-RNA和RNA-RNA杂交对于核酸功能的许多方面(包括DNA复制、转录和翻译) 而言为重要的。杂交对于探测特定核酸或者改变其表达的各种技术而言亦为主要的。反义核苷酸例如通过与靶RNA杂交来扰乱基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。 反义DNA具有附加的特征，该特征为DNA-RNA杂合体充当核糖核酸酶H消化的底物，该活性存在于大多数细胞类型中。可将反义分子递送到细胞中，这与寡脱氧核苷酸(ODN)的情况一样，或者它们如RNA分子一样可由内源基因表达。FDA最近批准了一种反义药物， VITRAVENE (用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，这反映了反义物具有治疗应用。专利技术概述提供本概述以呈现本专利技术的概述，从而简要地指出本专利技术的性质和实质。在理解以下的情况下提出本概述其不会用于解释或限制权利要求的范围或含义。在一个实施方案中，本专利技术提供通过使用靶定天然反义转录物的任何区域的反义寡核苷酸来抑制天然反义转录物的作用，引起相应有义基因的增量调节的方法。本文也考虑天然反义转录物的抑制可通过siRNA、核酶和小分子来达到，认为所述siRNA、核酶和小分子在本专利技术的范围之内。一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的DLKl多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，其中所述寡核苷酸与以下多核苷酸的反向互补序列具有至少50%的序列同一性，所述多核苷酸包含在SEQ ID NO :3(图幻的核苷酸1-1347之内的5_30个连续核苷酸；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的DLKl多核苷酸的功能和/或表达。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶定DLKl多核苷酸的天然反义序列，例如 SEQ ID NO :3所述的核苷酸，以及其任何变体、等位基因、同源物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例如SEQ ID NO :4-5(图4)所述。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中DLKl多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，其中所述寡核苷酸与DLKl多核苷酸的反义物的反向互补序列具有至少50%的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中DLKl多核苷酸的功能和/或表达。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中DLKl多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，其中所述寡核苷酸与DLKl反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50%的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中DLKl多核苷酸的功能和/或表达。在优选的实施方案中，组合物包含一种或多种与有义和/或反义DLKl多核苷酸结合的反义寡核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰或取代的核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰的键。在又一个实施方案中，所述修饰核苷酸包含经修饰的碱基，该碱基包含硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸、2’-0_甲基、氟或碳、亚甲基或其他锁定核酸(LNA)分子。优选地， 所述修饰核苷酸为锁定核酸分子，包括a-L-LNA。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸经皮下、肌内、静脉内或腹膜内给予^^ ο在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸在药物组合物中给予。治疗方案包括至少一次向患者给予反义化合物；然而，可将此治疗修改成在一段时间内包含多次给药。 所述治疗可与一种或多种其它类型的疗法组合。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸封装到脂质体中或附着于载体分子 (例如胆固醇、TAT肽)。其它方面描述于下文。附图简述图 1 图IA为实时PCR结果的图表，显示相比于对照，用硫代磷酸寡核苷酸处理H印G2 细胞后DLKl mRNA的倍数变化+标准偏差，所述硫代磷酸寡核苷酸使用Lipofectamine 2000弓I入。实时PCR结果显示!fepG2细胞中DLKl mRNA水平在用针对DLKl反义物HS. 697829 设计的两种寡核苷酸处理后4 显著增加。表示为⑶R-0338和⑶R-0340的条分别对应用 SEQ ID NO :4和5处理的样品。图2显示SEQ ID NO 1 人类 δ 样 1 同源物(果蝇属)(delta-like 1 homolog，DLKl)mRNA。 (NCBI 检索号NM_003836)SEQ ID NO :2 =DLKl的基因组序列(外显子用大写字母显示，内含子用小写字母显示)°图 3 显示 SEQ ID NO 3 天然 DLKl 反义序列(HS. 697829)。图4显示反义寡核苷酸SEQ ID NO :4_5。*指硫代磷酸酯键。图5显示有义寡核苷酸SEQ ID NO :6和7。有义寡核苷酸SEQ ID NO :6和7分别为反义寡核苷酸SEQ ID NO :4和5的反向互补序列。专利技术详述参考用于说明的示例应用在下文中描述本专利技术的数个方面。应当理解的是，陈述许多具体细节、关系和方法来提供对本专利技术的充分理解。然而，在相关领域的普通技术人员CN 102549159 A将容易地认识到，可在不含一个或多个具体细节的情况下实施本专利技术或者可用其他方法来实施本专利技术。本专利技术不受行为或事件的排序限制，因为一些行为可以不同的顺序进行和/ 或与其他行为或事件同时进行。此外，并非所有说明性的行为或事件对实施本专利技术的方法都为必需的。DLKl ( δ样)为表皮生长因子样同源异型家族中的跨膜和分泌蛋白。跨膜糖蛋白在胞外域中具有六个表皮生长因子样基序，与在信号分子的S /刻缺蛋白/Serrate家族中存在的那些相似。与其它刻缺蛋白配体相比，DLKl不具有δ =Serrate :Lin-12 (DSL)结构域，认为该结构域介导刻缺蛋白受体的相互作用和激活。然而，DLKl可通过特殊的EGF样重复与刻缺蛋白相互作用，并且在培养物中和在体内均可充当刻缺蛋白拮抗剂，其与受体结合而不使其激活。在体外，Dlkl维持前体细胞群并抑制分化。Dlkl在广泛范围的胚胎组织中高水平表达。尽管在胚胎发育期间广泛表达，但是仅少数组织在成体中保留表达。S样 1同源物(DLKl)的中脑表达受胶质细胞衍生神经营养因子(GDNF)调节并与多巴胺能分化有关(Christophersen Nicolaj S 等，Experimental Neurology 2007 ；204 (2) :791-801)。神经营养因子的胶质衍生(⑶NF)家族包括四个成员胶质细胞系衍生神经营养因子(GDNF)、神经秩蛋白(neurturin)、artemin和pers印hin(PSPN)。GDNF家族配体通过受体传导信号，该受体由GPI连接的GFRa亚基和跨膜受体酪氨酸激酶RET组成。为了激活跨膜受体酪氨酸激酶Ret，每个GDNF家族神经营养因子优先地与糖基-磷脂酰肌醇(GPI) 连接的⑶NF家族a-受体(GFRal-4)之一结合。⑶NF为这样的蛋白，其可在神经胶质细胞中鉴定到或从神经胶质细胞中获得，且表现出神经营养活性。更具体地说，GDNF为这样的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·科拉德，O·霍尔科瓦谢尔曼，C·科伊托，
申请(专利权)人：J·科拉德，O·霍尔科瓦谢尔曼，C·科伊托，
类型：发明
国别省市：
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