本发明专利技术提供一种添加次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基及培养方法，每1000ml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10-40mg的次氯酸钠；本发明专利技术利用在植物组织培养中用次氯酸钠替代高温灭菌，能够避免高温灭菌对植物组织培养基的不利影响，提高植物组织培养基的生产效率；因为本发明专利技术是在常规植物组织培养基中添加次氯酸钠，无需进行该培养基的高温灭菌，有利于植物生长；本发明专利技术的pH值为5.8-6.0，有利于协同次氯酸钠发挥灭菌作用，灭菌效果好，能避免组织培养植物体的污染；本发明专利技术操作方法简单，灭菌时间短，能够提高培养基的生产效率、降低培养成本，为大规模开展植物组织培养提供高效的培养方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于用植物组织培养领域，特别涉及一种添加次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基及培养方法，每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和 10-40mg的次氯酸钠。
技术介绍
植物组织培养技术起源于20世纪，至今有100多年的历史。植物组织培养技术已成为目前最常用的生物技术手段之一。植物组织培养技术是众多技术的集成，其中，灭菌技术是组织培养过程中的关键技术之一。灭菌的方法包括高温灭菌、过滤除菌、乙醇灭菌等， 其中，高温灭菌又包括高温蒸气灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。目前，植物组织培养的培养基灭菌方法均是采用高压蒸汽灭菌方法，灭菌温度121°C灭菌时间20 min。这种方法优点有灭菌彻底、不易污染。但是，高压蒸汽灭菌所存在着以下缺点设备较贵；消耗能源多；灭菌时间长；在高温蒸汽灭菌过程中，培养基内会发生一些化学反应，培养基的成分会伴随着发生一些变化，如在121°C，20 min条件下，59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏；培养基的灭菌数量有限，生产成本较高等。由于上述缺点，尽管组织培养技术已有将近百年的历史，技术也相当成熟，迄今为止，主要应用于科研或小规模的生产中。为寻找方便、快捷、可靠和低成本的灭菌方法，前人进行了较多的研究。但是，大部分是微生物培养基的灭菌方法改进的研究报道；而关于植物组织培养的培养基的灭菌方法改进的研究报道较少。崔刚等通过抑生素的应用，不用高压灭菌和超净工作台接种，在不影响组培效果的情况下，能够将污染率控制在10%以下的可接受范围内。梁霞等利用家用微波炉可代替高压蒸汽灭菌，无论固体培养基还是液体培养基，频率为2450 MHz、功率为1200 W的微波炉，在80%以上的功率，灭菌10 min，便可实现很好的灭菌效果。但是，以上的方法中均存在灭菌效果不理想、灭菌药剂影响植物正常生长等问题。次氯酸钠溶液是一种用途极为广泛的广谱杀菌灭藻剂和漂白剂。其不仅具有很强的消杀作用，而且其易分解、无残留、对人体无毒无害的情况是一般杀菌剂所无法比拟的。 广泛用于污水处理、自来水消毒杀菌、游泳池杀菌消毒、养殖业畜禽舍的消毒杀菌和酒店、 饭店、医院、食品与肉类加工企业及公共设施环境的消毒等。中国专利申请“一种植物组织培养中污染防止方法”(申请号:201010142886. 5，申请公布号:CN101884301. A)中，公开了一种植物组织培养中防止细菌或真菌污染的方法，该方法的培养基中加入乙蒜素、链土霉素、氨基寡糖素水机、C102、过氧乙酸、次氯酸钠、三氯异氰尿酸中的一种或几种。该方法虽然将次氯酸钠用于植物组织培养基的灭菌，但该植物组织培养基仍然需要经过高温灭菌处理后才可以用于植物组织培养，无法避免高温灭菌处理，尤其是高压蒸汽灭菌的缺点。所以，目前的科研和生产中需要一种在培养基的配制过程中添加次氯酸钠来替代高压蒸汽灭菌、提高培养基的生产效率、降低培养成本、为大规模开展植物组织培养提供高效的植物组织培养方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种添加次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基及培养方法，每 IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10-40mg的次氯酸钠；本专利技术利在植物组织培养中用次氯酸钠替代高温灭菌，能够避免高温灭菌对植物组织培养基的不利影响，提高植物组织培养基的生产效率。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的一种次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10-40mg的次氯酸钠；优选地，所述的植物组织培养基中，所述的常规培养基为MS基本培养基；优选地，所述的植物组织培养基中，所述的常规培养基为以MS基本培养基为基础，添加6-苄氨基嘌呤0. 6 mg/L，萘乙酸0. 2 mg/L ；优选地，所述的植物组织培养基用于培养“神马”菊花、兰州食用百合。本专利技术的目的是通过以下另一技术方案实现的一种次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养方法，每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10_40mg的次氯酸钠；该方法包括以下步骤A、按照上述含量取所述的常规培养基的成分、次氯酸钠，配制植物组织培养基母液；B、将所述的植物组织培养基母液在常压下加热至沸腾，并保持沸腾状态8-10分钟，得到加热的植物组织培养基母液；C、待所述的加热的植物组织培养基母液冷却至50-60°C时，调节pH值为5.8-6. 0，得到调节PH值的植物组织培养基母液；D、将调节pH值的植物组织培养基母液在超净工作台中分装至培养瓶，得到所述的植物组织培养基；II、植物组织培养将植物外植体接种于所述的植物组织培养基中，进行植物组织培养。优选地，I -D步骤中所述的培养瓶在分装前经过浓度为100_400mg/L的次氯酸钠水溶液浸泡处理，时间为3-8min ；优选地，II步骤的接种处理在开放的工作台上进行，无需在超净工作台中进行。本专利技术与现有技术相比具有如下优点I、因为本专利技术是在常规植物组织培养基中添加次氯酸钠，无需进行该培养基的高温灭菌，所以本专利技术能够避免高温灭菌对该培养基中营养成分的不利影响，有利于植物生长。2、因为本专利技术的pH值为5. 8-6.0，有利于协同次氯酸钠发挥灭菌作用，所以本专利技术的灭菌效果好，能避免组织培养植物体的污染。3、因为本专利技术操作方法简单，灭菌时间短，所以本专利技术能够提高培养基的生产效率、降低培养成本、为大规模开展植物组织培养提供高效的植物组织培养方法。附图说明图I为实施例I中添加不同浓度的次氯酸钠对植物组织培养基灭菌效果影响的相片。图2为实施例I中添加不同浓度的次氯酸钠对菊花快繁生长的影响的相片。图3为实施例2中添加20mg/L次氯酸钠对兰州食用百合芽诱导生长的影响的相片。具体实施例方式实施例I :本实施例为一种次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基及其培养方法，应用于“神马”菊花的快速繁殖。一种次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10-40mg的次氯酸钠；所述的植物组织培养基中，所述的常规培养基为MS基本培养基；所述的MS基本培养基含有的原料如下表所示，所述的MS基本培养基由去离子水配制而成权利要求1.一种次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和10-40mg的次氯酸钠。2.根据权利要求I所述的次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于所述的植物组织培养基中，所述的常规培养基为MS基本培养基。3.根据权利要求I所述的次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于所述的常规培养基为以MS基本培养基为基础，添加6-苄氨基嘌呤0.6 mg/L，萘乙酸0. 2 mg/ L04.根据权利要求1-3中任一项所述的次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和IOmg的次氯酸钠。5.根据权利要求1-3中任一项所述的次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于每IOOOml所述的植物组织培养基含有常规培养基的成分和20mg的次氯酸钠。6.根据权利要求1-3中任一项所述的次氯酸钠替代高温灭菌的植物组织培养基，其特征在于每IOO本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王永勤，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：
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