本发明专利技术公开了一种GLP-1衍生物，其特征在于，该衍生物的分子结构式为以下任何一种结构式：aGLP-1（7-36）即SeqIDNo.2；aGLP-1（7-37）即SeqIDNo.3；或aGLP-1（7-38）即SeqIDNo.4。本发明专利技术还公开了GLP-1衍生物的固相化学合成制备方法，以及在制备治疗糖尿病的药物中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有人胰高血糖素样肽一 1 (Glucagon-like Peptide 1，GLP 一 1)活性的人胰高血糖素样肽一 1衍生物(GLP - 1衍生物)及其制备和应用，属于生物工程
技术介绍
人胰高血糖素样肽一 1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)是主要由远端回肠、 结肠和直肠的L细胞分泌的一种31个氨基酸的多肽激素，通过葡萄糖依赖性促胰岛素释放、刺激生长抑素释放和抑制胰高血糖素，是一种治疗糖尿病尤其是II型糖尿病的多肽药物，具有广泛的社会效益和巨大的经济效益。但是，GLP-I在体内很容易被二肽酰基肽酶IV(Dip印tidyl Peptidase 4，DPP IV) 降解为脱去N端HiS7-Ala8-残基的无活性的GLP-l(9-37)或GLP-1 (9_36) -NH2。静脉注射GLP-I在体内的半衰期仅为3飞分钟，限制了 GLP-I的临床应用。目前GLP-I治疗糖尿病的研究方向之一是通过对GLP-I的结构进行改变，得到 GLP-I衍生物，用该衍生物治疗糖尿病，达到延长药物在体内的药效时间的目的。已有的 GLP-I衍生物都显示出稳定性增加，且体内生物活性仍能维持的性质。例如在第8位上进行氨基酸改变如将丙氨酸Ala改为甘氨酸Gly的GLP-I衍生物。又如制备GLP-I的脂肪酸衍生物，代表性药物有诺华诺德公司研制的NN2211(商品名Liraglutide)，在GLP-I的Lyd6 上进行酰化。再者，对GLP-I分子进行聚乙二醇(PEG)修饰，如用PEG20000修饰GLP-I分子。还有直接将GLP-I分子与白蛋白大分子融合的CJC-1131，通过分子量增大来增强GLP-I 的体内稳定性。虽然通过改变GLP-I第8位上的氨基酸制备得到的GLP-I衍生物半衰期有延长， 但第20位LysJS位Lys以及30位Arg在体内是某些蛋白酶的降解位点，在体内仍然有被降解的可能。通过脂肪酸或聚乙二醇修饰GLP-I等方法制备的GLP-I衍生物虽然体内半衰期延长，但是脂肪酸或聚乙二醇修饰GLP-I的位点和修饰程度常难以控制，导致后续纯化和质量控制都比较困难，制备步骤繁琐、得率低、成本高。因此，现有GLP-I衍生物仍然存在制备和纯化困难、或半衰期尚不够长或难以口服给药等缺陷，迫切需要研制生物半衰期长的新型GLP-I产品。
技术介绍
已经提出一种GLP-I衍生物及其制备方法，见本申请人申请的申请号和专利技术名称分别为“200610024355. X”和“一种人胰高血糖素样肽一 1衍生物及其制备和应用”，以及申请号和专利技术名称分别为“200610(^9646. 8”和“一种人胰高血糖素样肽一 1衍生物及其固相化学合成”的专利技术专利。
技术介绍
制备所得的GLP-I衍生物，产量高，纯化工艺简化，生产成本较低，且该衍生物半衰期长于GLP-I的半衰期。但
技术介绍
制备的衍生物也有以下缺点例如，第2位氨基酸在体内仍然容易被二肽酰基肽酶IV降解失去活性。第20 位LysJS位Lys以及30位Arg在体内是某些蛋白酶的降解位点，在体内仍然有被降解的可能。因此，仍然需要开发具有更长作用时间的GLP-I衍生物，更好地用于糖尿病治疗。
技术实现思路
GLP-I在体内有两种形式，一种为GLP-I (7 — 36) — NH2，由30个氨基酸残基组成，另一种为GLP-1(7 - 37)，由31个氨基酸残基组成，二者有相同的生物学活性。本专利技术涉及的 GLP-I 指 GLP-I (7 一 37)，其序列(Seq ID No. 1)罗列如下His-Ala-Glu_Gly- Th r-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala -Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Glyο由于GLP-I的结构与功能目前已十分清楚N端是保持活性所必需，而C端负责与受体的结合。GLP-I (7 - 34),GLP-I (7 - 35),GLP-I (7 - 36),GLP-I (7 — 37)已证明都具有降血糖活性，由此可见GLP-I的C端对生物学活性具有可塑性。根据GLP-I多肽C端功能“可塑性”的结构和功能的关系，以增加GLP-I的体内生物稳定性和延长半衰期为设计思想，我们开展了大量的研究工作，采用全新的思路对GLP-I 的氨基酸序列进行设计和改造，制备出长效的新型GLP-I衍生物。本专利技术的第一个目的是提供一种新型GLP-I衍生物aGLP-Ι，其特征在于，该衍生物的分子结构式为以下的三种结构式aGLP_l (7 - 36)，即kq ID No. 2，aGLP-1 (7 一 37)，即 Seq ID No. 3 和 aGLP-1 (7 — 38)，即 Seq ID No. 4 之一。其中，aGLP-1(7 — 36)，即 Seq ID No. 2 序列如下:His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp -Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30。aGLP-1 (7 一 37)，即 kq ID No. 3 序列如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30- Xaa31。aGLP-1 (7 一 38)，即 kq ID No. 4 序列如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30- Xaa31_Xaa32。其中Xaa2是kr，His和D-Ala中的任何一个氨基酸，Xaa20是kr，His, Gln和 Ala中的任何一个氨基酸，Xaa^是义！·，His, Asp和Ala中的任何一个氨基酸，Xaa30是 Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当是C末端氨基酸时，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺-NH2，Xaa31是Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当Xaa31是C末端氨基酸时，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺_NH2，Xaa32是Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当Xaa32是C末端氨基酸时，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺-NH2。该衍生物不仅保持了天然GLP-I在体内的活性，还明显延长了体内药效时间，体内药效时间至少可持续7小时，如给予较高浓度的该衍生物，体内药效时间将更长，具有良好的临床使用价值。此外，该衍生物可通过重组DNA技术的方法或固相化学合成方法制备，技术成熟，4成本低，适宜普及使用。本专利技术的第二个目的是提供固相化学合成上述衍生物的方法。固相化学合成法在制备少于40个氨基酸的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄静，金丽，金明飞，吴自荣，刘雯，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：
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