本发明专利技术公开了一种角鲨烯合成酶抑制剂CJ-13982的制备方法。化合物CJ-13982是从稻黑孢(Nigrospora?oryzae)A8的发酵培养物中分离制备得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora?oryzae)A8，其保藏编号为CCTCC?NO：M?2011412。本发明专利技术提供的从植物内生真菌稻黑孢(Nigrospora?oryzae)A8的发酵培养物中制备得到具有抑制角鲨烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法，该方法具有培养条件温和、培养基配制简单易行、分离纯化步骤简单、产量大、可以在人工控制条件下实现大规模生产等优点，能够比较方便解决研究或应用化合物CJ-13982所需的原料问题，为制备化合物CJ-13982提供了一条新的途径。
【技术实现步骤摘要】
角鲨烯合成酶抑制剂CJ-13982的制备方法
本专利技术属于医药生物
，具体涉及利用植物内生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8发酵制备具有抑制角鲨烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法。
技术介绍
随着我国人口的老龄化，心血管病发病率和病死率逐年上升，冠心病是其中的主要杀手。我们常说的冠心病多由动脉器质性狭窄或阻塞引起，又称冠状动脉粥样硬化性心脏病，其冠状动脉狭窄多系脂肪物质沿血管内壁堆积所致，这一过程称之为动脉硬化。动脉硬化发展到一定程度，冠状动脉狭窄逐渐加重，限制流入心肌的血流。心脏得不到足够的氧气供给，就会发生胸部不适，即心绞痛。冠心病是指冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧而引发的心脏病，常伴发心绞痛。目前该病严重威胁中老年人的健康，是造成中老年人死亡的主要原因，如何降低其发病率及减少死亡率已成为世界各国关注的研究课题。引起动脉硬化的脂肪物质的主要成分是胆固醇，许多研究表明，胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平与冠心病的发病率密切相关。由于人体内大约有70%胆固醇源于体内合成，所以抑制其体内合成是一种有效降低胆固醇的方法。羟甲基戊二酰辅酶 A(HMG-CoA)还原酶抑制剂(如洛伐他汀)是目前最有效的降胆固醇药。据报道，冠心病病人使用HMG-CoA还原酶抑制剂降低血浆高胆固醇后，死亡率可降低约1/3。但是，当体内甲羟戊酸合成途径中的关键酶一一HMG-CoA还原酶被抑制后，不仅胆固醇的合成减少，由甲羟戊酸进一步合成的非留醇类异戊二烯(如多萜醇)等物质也相应减少，而这些物质是细胞正常生长、分化和发育所需要的。因此HMG-CoA还原酶抑制剂会对细胞的生长、增殖和分化产生影响，并由此引起多种不良反应。另外，有证据表明血中甘油三酯过多是引起冠状动脉心脏病的又一原因，而HMG-CoA还原酶抑制剂几乎没有降低血浆甘油三酯的作用。所以， 需要有比HMG-CoA还原酶抑制剂更安全有效的降血脂药。角鲨烯合成酶(squalene synthase, SQS)是体内胆固醇合成、代谢途径中的一种重要酶，它能催化两分子法呢基二磷酸(FPP)经还原性二聚作用，产生中间体前角鲨烯二磷酸，在NADPH的还原作用下，前角鲨烯二磷酸生成角鲨烯，后者再经进一步合成生成胆固醇。抑制SQS的活性，就能减少角鲨烯的生成量，从而降低胆固醇的水平，而且因为SQS的催化反应在合成类异戊二烯的分支途径之后，所以SQS抑制剂对类异戊二烯的合成没有影响。而且，还有报道指出，SQS抑制剂不仅能降低血浆胆固醇水平，还降低血浆甘油三酯水平。所以，SQS成为了治疗高脂血症和冠状动脉心脏病的极具吸引力的作用靶点，其抑制剂的研究也已成为降血脂药物研制的一个重要方向。在文献“CJ-13981 and CJ-13982, new squalene synthase inhibitors, J. Antibiot.，2001，54(12)，1025-1030”中，作者从一株未鉴定的真菌CL15036中分离得到了本专利技术专利中的活性化合物CJ-13982及一个结构类似物CJ-13981，通过质谱和核磁共振技术鉴定了其平面结构，并测试了两个化合物对大鼠和人体肝脏微粒体中SQS的抑制活性，结果表明，CJ-13982对大鼠和人体肝脏微粒体中SQS的IC50分别为2. 2和1. 1 μ Μ。3在文献"Total synthesis and determination of the absolute stereochemistry of the squalene synthase inhibitors CJ-13981and CJ-13982, Tetrahedron Lett.， 2009，50( ) ,3388-3390”中，作者通过全合成的方法确定了本专利技术专利中的活性化合物 CJ-13982及其结构类似物CJ-13981的绝对构型。化合物CJ-13982的结构如式(I)所示权利要求1.一种化合物CJ-13982的制备方法，其特征在于，所述的CJ-13982是从稻黑孢 (Nigrospora oryzae)A8的发酵培养物中分离制备得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏编号为 CCTCC NO :M 2011412。2.根据权利要求1所述的化合物CJ-13982的制备方法，其特征在于，具体步骤如下(a)制备稻黑孢(Nigrosporaoryzae)A8的固体发酵培养物；(b)将固体发酵培养物用乙酸乙酯冷浸提取，浓缩乙酸乙酯提取液，得到总浸膏，将总浸膏用甲醇溶解悬浮，悬浮液用环己烷萃取，萃取后的甲醇溶液经浓缩得到甲醇相浸膏；(c)甲醇相浸膏经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇作为洗脱剂，从体积比100 O O 100 梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为10 1 5 1梯度下洗脱下来的馏分，将该馏分用凝胶柱层析，以体积比为1 1的氯仿-甲醇作为洗脱剂洗脱，收集在TLC上能用体积比为 5 1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，且用碘显色成黄色长条的馏分，将该馏分用反相硅胶柱层析，先以体积比为4 1的甲醇-水作为洗脱剂洗脱至柱子上黄色部分洗出以后，再换纯甲醇洗脱，收集该馏分，浓缩得到白色固体，即为目标化合物CJ-13982。3.根据权利要求2所述的化合物CJ-13982的制备方法，其特征在于，所述的制备稻黑孢(Nigrospora oryzae) A8的固体发酵培养物是通过以下方法制备的将稻黑孢 (Nigrospora oryzae) A8接种到CPDA培养基中，在培养3天，获得种子平板，然后将种子平板培养物切成20X20mm的小块，接种于固体发酵培养基中，培养30天，获得稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的固体发酵培养物；所述的固体发酵培养基的配方为每升含有:1000g大米，6g蛋白胨，IOOOmL水。全文摘要本专利技术公开了一种角鲨烯合成酶抑制剂CJ-13982的制备方法。化合物CJ-13982是从稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的发酵培养物中分离制备得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏编号为CCTCC NOM 2011412。本专利技术提供的从植物内生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的发酵培养物中制备得到具有抑制角鲨烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法，该方法具有培养条件温和、培养基配制简单易行、分离纯化步骤简单、产量大、可以在人工控制条件下实现大规模生产等优点，能够比较方便解决研究或应用化合物CJ-13982所需的原料问题，为制备化合物CJ-13982提供了一条新的途径。文档编号C12R1/645GK102517350SQ20111040692公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月8日 优先权日2011年12月8日专利技术者李冬利, 王磊, 章卫民 申请人:广东省微生物研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李冬利，王磊，章卫民，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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